1、 基 金 项 目：年 大 学 生 创 新 创 业 训 练 项 目，项 目 编 号：。作 者 简 介：苏 洛 漩（），女，辽 宁 抚 顺 人，在 读 本 科 生。通 讯 作 者：袁 春 玲（），女，辽 宁 锦 州 人，副 教 授，博 士 学 位，主 要 研 究 方 向 为 神 经 药 理 学。丁 苯 酞 软 胶 囊 对 小 鼠 阿 尔 茨 海 默 病 学 习 记 忆 障 碍 的 影 响苏 洛 漩，王 义 可，金 春 旭，袁 春 玲（锦 州 医 科 大 学 药 学 院，辽 宁 锦 州）摘 要：目 的 研 究 丁 苯 酞 软 胶 囊 对 阿 尔 茨 海 默 病（，）模 型 小 鼠 学 习 记 忆 障
2、 碍 的 影 响。方 法 采用 小 鼠 侧 脑 室 内 注 射 制 备 模 型 模 拟 样 症 状，术 后 第 天 开 始 灌 胃 给 予 丁 苯 酞，连 续 给 药，第 天 开 始 进 行 迷宫、水 迷 宫 行 为 学 实 验；法 细 胞 检 测；试 剂 盒 检 测 小 鼠 海 马 焦 亡 标 志 蛋 白 活 性；方 法考 察 海 马 炎 症 小 体 的 表 达。结 果 给 予 丁 苯 酞 软 胶 囊 治 疗 可 明 显 改 善 所 致 小 鼠 样 症 状，减 少 神 经 元焦 亡 及 炎 症 反 应。结 论 丁 苯 酞 可 能 会 成 为 治 疗 的 候 选 药 物。关 键 词：丁 苯 酞
3、；阿 尔 茨 海 默 病；焦 亡中 图 分 类 号：文 献 标 志 码：文 章 编 号：（），（，）：（）（），；，：；阿 尔 茨 海 默 病（）是 一 种 复 杂 的 多 因 素 神经 退 行 性 疾 病，是 老 年 痴 呆 的 最 常 见 类 型。其经 典 的 神 经 病 理 学 特 征 包 括：细 胞 外 淀 粉 样 蛋白（，）沉 积 形 成 的 老 年 斑，细 胞 内由 过 度 磷 酸 化 蛋 白 组 成 的 神 经 原 纤 维 的 缠 结，以 及 神 经 元 丢 失。关 于 脑 内 神 经 细 胞 死 亡 方式 的 研 究 主 要 围 绕 着 凋 亡、坏 死 和 自 噬。焦 亡 作
4、为体 内 一 种 程 序 性 的 坏 死 形 式，近 些 年 来 也 开 始 引 起广 泛 关 注。焦 亡 是 在 弗 氏 志 贺 杆 菌 作 用 于 巨 噬 细 胞 过 程 中所 发 现 的 一 种 死 亡 方 式。随 着 深 入 研 究 和 技 术 发展，研 究 者 们 发 现 焦 亡 主 要 由 介 导，而不 是 传 统 的 凋 亡 相 关 反 应 分 子。焦 亡 不仅 仅 发 生 在 感 染 性 疾 病 中，最 近 的 研 究 表 明，无 菌性 炎 症 中 也 存 在 焦 亡，包 括 肝 损 伤、阿 尔 茨 海默 病、外 伤 性 脑 损 伤 等。丁 苯 酞（，）首次 从 芹 菜 种 子
5、 中 分 离 得 到。它 是 一 种 合 成 的 手 性 化合 物，具 有 丁 基 苯 酞 和 两 种 异 构 体。年，中 国 国 家 食 品 药 品 监 督 管 理 局 批 准 该 化 合 物 用于 脑 卒 中 患 者 的 治 疗。丁 苯 酞 是 我 国 脑 血 管 病 治 疗领 域 第 一 个 具 有 完 全 自 主 知 识 产 权 的 国 家 一 类 创 新药 物，其 剂 型 包 括 注 射 液 和 软 胶 囊 两 种。近 些 年来，随 着 对 研 究 的 深 入，人 们 发 现 不 仅对 缺 血 性 脑 血 管 病 有 效，还 对 肌 萎 缩 性 脊 髓 侧 索 硬化 症、癫 痫、阿
6、尔 茨 海 默 病 动 物 模 型 都 有 锦 州 医 科 大 学 学 报（）DOI:10.13847/ki.lnmu.2023.01.018治 疗 作 用。据 文 献 报 道，能 通 过 减 少 淀 粉样 蛋 白、蛋 白 的 过 度 磷 酸 化，减 少 神 经炎 症，提 高 突 触 可 塑 性、抗 凋 亡 及 促 神 经新 生 等 改 善 动 物 模 型 的 学 习 记 忆 障 碍。丁苯 酞 对 动 物 模 型 神 经 元 焦 亡 的 影 响，尚 未 见 文献 报 道。本 研 究 我 们 旨 在 评 价 丁 苯 酞 软 胶 囊 对 诱 导 模 型 小 鼠 样 症 状、细 胞 焦 亡 和 焦
7、亡相 关 信 号 通 路 的 影 响。材 料 与 方 法 仪 器 和 材 料动 物 脑 立 体 定 位 仪（成 茂，日 本），水 迷 宫 系 统（中 国 医 学 科 学 院 药 物 研 究 所，中国），酶 标 仪（赛 默 飞，美 国），电 泳 仪（，美 国），低 温 冰 箱（中 科 美 菱，中 国）。丁 苯 酞 软 胶 囊（石 药 集 团 恩 必 普 药 业 有 限 公司，生 产 批 号：，粒），盐 酸多 奈 哌 齐（卫 材（中 国）药 业 有 限 公 司，生 产 批号：，片 盒），（，批号：）。侧 脑 室 注 射 致 小 鼠 模 型 的 建 立 小 鼠，雄 性，体 重（），辽 宁 长 生生
8、物 技 术 有 限 公 司，合 格 证 号，适 应 性 饲 养，腹 腔 注 射 水 合 氯 醛（体 重）麻 醉。小 鼠 侧 脑 室（前 囟 后、矢 状 线 旁、颅 骨 表 面 下），注 射（含），缓 慢 推 注，留 针，假 手 术 组 注 入 等 体 积 的 生 理 盐 水。分 组 及 给 药将 小 鼠 分 为 组，即 假 手 术 组、模 型 组、盐 酸多 奈 哌 齐 组、丁 苯 酞 组，每组 只。各 组 动 物 手 术 后 第 天 开 始 灌 胃 给 药 至行 为 学 实 验 结 束。丁 苯 酞 软 胶 囊 溶 解 于 花 生 油 中 配制 成 溶 液，连 续 给 药，第 天 开 始 进行
9、行 为 学 实 验，实 验 流 程 见 图。图 实 验 流 程 图 水 迷 宫 测 试实 验 装 置 由 一 个 直 径 黑 色 圆 形 水 池 和一 个 可 移 动 位 置 的 黑 色 平 台（安 全 台，直 径）以 及 视 频 分 析 系 统 构 成。水 温（），水 面 高 于 平 台 顶 端 约。定 向 航 行 实 验：将 小 鼠 面 向 池 壁 放 入 水 中并 开 始 计 时，记 录 其 找 到 安 全 台 的 时 间（逃 避 潜伏 期），动 物 上 台 后 采 集 自 动 停 止。若 小 鼠 在 内 未 找 到 安 全 台，则 逃 避 潜 伏 期 记 为，然 后 诱导 动 物 到
10、达 安 全 平 台 并 停 留 学 习。每 天 训 练 次，连 续 训 练，以 每 天 次 潜 伏 期 的 平 均 值 作为 当 天 的 成 绩 进 行 统 计 分 析，整 个 实 验 过 程 中 保 持安 全 台 的 位 置 不 变。空 间 探 索 实 验：定 向 航 行 实 验 结 束 后，安全 台 移 出 水 池，将 小 鼠 面 向 池 壁 放 入 水 池 中，自 由探 索。记 录 内 动 物 在 原 安 全 台 所 在 象 限 游 泳的 时 间 及 穿 台 次 数。迷 宫 测 试 迷 宫 装 置 由 夹 角 为 的、个 臂组 成。将 小 鼠 放 入 臂 末 端，内 让 其 自 由 出入
11、 个 臂，并 记 录 其 进 入 个 臂 的 总 次 数（）及进 臂 顺 序，以 连 续 进 入 个 不 同 的 臂 为 一 次 正 确 交替 反 应。自 发 交 替 反 应 率（）交 替 反 应 次 数（）。染 色行 为 学 实 验 结 束 后，麻 醉 小 鼠，每 组 只，和 多 聚 甲 醛 灌 流 取 脑。将 脑 置 于 多 聚 甲 醛 中 固 定 后 石 蜡 包 埋，切 片 机 切 冠 状 切 片，按 照 细 胞 凋 亡 两 步 法 检 测 试 剂盒（武 汉 博 士 德，）说 明 书 操 作。蛋 白 免 疫 印 迹行 为 学 实 验 结 束 后，麻 醉 小 鼠，每 组 只，断头 取 脑，
12、液 氮 速 冻 后 保 存。用 时 取 出，裂解，定 量 后，将 脑 蛋 白 加 入 丙 烯 酰 胺 凝胶 电 泳，再 依 次 转 膜、封 闭、加 一 抗 过 夜，室 温 孵育 二 抗。试 剂 盒 显 影。（）条带 分 析。活 性 检 测 活 性 检 测 试 剂 盒（上 海 碧 云 天 生 物技 术 有 限 公 司，）基 于 可 以 催 化 底 物（）产 生 黄 色 的（），在 附 近 有 强 吸 收，酶 标 仪 检 测 活性。统 计 学 方 法采 用 软 件 进 行 单 因 素 方 差 分析（）或 双 因 素 方 差 分 析（）。实 验 数 据 用 均 数 标 准 差 表 示。以 为 差 异
13、 具 有 统 计 学 意 义。锦 州 医 科 大 学 学 报 年 月，（）结 果 丁 苯 酞 对 侧 脑 室 注 射 小 鼠 学 习 记 忆 障碍 的 影 响 水 迷 宫 被 用 来 评 价 小 鼠 的 空 间 学 习 记 忆能 力。在 训 练 期，与 假 手 术 组 相 比，模 型 组 花 费 较多 的 时 间 寻 找 隐 藏 的 平 台。与 模 型 组 相 比，多 奈 哌齐 组 与 组 明 显 降 低，第 天 逃 避 潜 伏 期，见 图。在 中，与 假 手 术 组 相 比，模 型 组 小鼠 目 标 象 限 游 泳 时 间、穿 台 次 数 均 显 著 降 低；与 模型 组 相 比，多 奈 哌
14、 齐 组 和 组 目 标 象 限 游 泳 时 间、穿 台 次 数 均 显 著 增 加，见 图。丁 苯 酞 对 侧 脑 室 注 射 小 鼠 工 作 记 忆 障碍 的 影 响 迷 宫 被 用 来 评 价 小 鼠 的 工 作 记 忆 能 力。各 组小 鼠 进 臂 总 次 数 没 有 显 著 差 异，表 明 各 组 动 物 运 动功 能 无 显 著 差 异，见 图。与 假 手 术 组 相 比，诱 导 小 鼠 自 发 交 替 反 应 率 显 著 降 低；多 奈 哌齐 和 可 显 著 提 高 小 鼠 自发 交 替 反 应 率，提 示 给 药 组 小 鼠 工 作 记 忆 能 力 显 著改 善，见 图。丁 苯
15、 酞 对 侧 脑 室 注 射 小 鼠 海 马 神 经 细胞 的 影 响 染 色 结 果 显 示，与 假 手 术 组 相 比，诱 导 小 鼠 海 马 阳 性 细 胞 数 显 著 增 加，丁 苯 酞 可 以 显 著 减 少 阳 性 细 胞 数，见 图。丁 苯 酞 对 侧 脑 室 注 射 小 鼠 海 马 焦 亡 标志 蛋 白 活 性 的 影 响结 果 表 明，与 假 手 术 组 相 比，模 型 组 活 性 显 著 增 加；丁 苯 酞 治 疗 后 活 性 显 著 降 低，且 与 假 手 术 组 无 显 著 性 差 异，表 明 丁 苯 酞 可 恢 复 导 致 的 小 鼠 活性 升 高，见 图。：平 均
16、速 度；：逃 避 潜 伏 期。与 假 手 术 组 相 比，；与 模 型 组 相 比，图 丁 苯 酞 对 侧 脑 室 注 射 痴 呆 模 型 小 鼠 水 迷 宫 定 向 航 行 实 验 的 影 响（）：目 标 象 限 游 泳 时 间；：穿 台 次 数。与 假 手 术 组 相 比，；与 模 型 组 相 比，图 丁 苯 酞 对 侧 脑 室 注 射 痴 呆 模 型 小 鼠 空 间 探 索 实 验 的 影 响（）苏 洛 漩，等：丁 苯 酞 软 胶 囊 对 小 鼠 阿 尔 茨 海 默 病 学 习 记 忆 障 碍 的 影 响：进 臂 总 次 数；：自 发 交 替 反 应 率。与 假 手 术 组 相 比，；与
17、 模 型 组 相 比，图 丁 苯 酞 对 侧 脑 室 注 射 痴 呆 模 型 小 鼠 工 作 记 忆 的 影 响（）与 假 手 术 组 相 比，；与 模 型 组 相 比，图 丁 苯 酞 对 侧 脑 室 注 射 痴 呆 模 型 小 鼠 海 马 神 经 细 胞 的 影 响（）与 假 手 术 组 相 比，；与 模 型 组 相 比，图 丁 苯 酞 对 侧 脑 室 注 射 痴 呆 模 型 小 鼠 海 马 活 性 的 影 响（）丁 苯 酞 对 侧 脑 室 注 射 小 鼠 炎 症 小 体 的 影 响结 果 表 明，与 假 手 术 组 相 比，模 型 组 小 鼠 含 量 明 显 增 加；与 模 型 组 相 比
18、，多 奈 哌 齐 组 和 组 小 鼠 海 马 含 量明 显 降 低，见 图。锦 州 医 科 大 学 学 报 年 月，（）与 假 手 术 组 相 比，；与 模 型 组 相 比，图 丁 苯 酞 对 侧 脑 室 注 射 痴 呆 模 型 小 鼠 海 马 蛋 白 的 影 响（）以 上 结 果 提 示 丁 苯 酞 可 能 具 有 抑 制 致 小鼠 神 经 元 焦 亡 的 作 用。讨 论 是 以 进 行 性 的 记 忆 力 丧 失、认 知 下 降 和 异常 精 神 行 为 为 特 征 的 神 经 退 行 性 疾 病。最 近 已 经 被证 实 神 经 元 的 丢 失 与 患 者 学 习 记 忆 能 力 下 降
19、 直接 相 关。神 经 元 丢 失 及 功 能 障 碍 会 损 伤 突 触 并导 致 患 者 认 知 障 碍。此 外，抑 制 早 期 神 经元 的 死 亡 可 减 少 晚 期 细 胞 外 沉 积 和 认 知 障碍。研 究 证 明，寡 聚 体 的 可 激 活 小 胶 质 细胞 内 的 炎 症 小 体，活 化 的 炎 症 小 体在 的 发 生 中 发 挥 重 要 作 用。被 激 活后，与 其 适 配 器 形 成 复 合 物，促 进 的 自 催 化 活 化，形 成 水 解 酶 活 性，继 而 裂 解 其 下 游 效 应 物，加 工 成 成 熟 的 形 式，介 导 炎 症 形 式 的 细 胞 程序 化
20、 死 亡 称 为 焦 亡。焦 亡 是 一 个 高 炎 症 形 式 的细 胞 死 亡，其 依 赖 于 的 活 性，对 细 胞 焦 亡 起 到 至 关 重 要 的 作 用。过 度 的 诱 导 的 焦 亡 对 机 体 是 有 害 的。因 此，靶向 抑 制 可 抑 制 神 经 元 的 焦 亡，提 高 模 型 小 鼠 的 学 习 记 忆 能 力。年 被 中 国 国 家 食 品 药 品 监 督 管 理 局认 定 为 缺 血 性 脑 卒 中 的 治 疗 药。它 也 被 美 国 批 准 用 于 缺 血 性 脑 卒 中 的 期 临 床 试 验。研 究 显示 不 仅 能 明 显 减 轻 脑 卒 中 急 性 症 状
21、，还 具 有强 大 的 神 经 保 护 作 用，并 减 轻 血 管 性 痴 呆 和 的认 知 障 碍。的 神 经 保 护 作 用 可 能 参 与 多 条 机制，包 括 改 善 微 循 环 和 代 谢，降 低 氧 化 应激 损 伤，减 轻 炎 症 反 应 和 减 少 神 经 元 凋 亡。本 研 究 证 明 能 减 少 模 型 小 鼠 海 马 的 蛋 白 表 达，降 低 活 性，继 而 减 少大 脑 神 经 元 细 胞 的 焦 亡，改 善 模 型 小 鼠 学 习 记忆 障 碍。后 续 的 研 究 我 们 将 进 一 步 探 索 长 期 给 予 对 模 型 小 鼠 的 改 善 作 用 及 其 机 制
22、。参 考 文 献：，：，：，：，（）：，：，：，（）：，（）：，：，（），（）：（下 转 第 页）苏 洛 漩，等：丁 苯 酞 软 胶 囊 对 小 鼠 阿 尔 茨 海 默 病 学 习 记 忆 障 碍 的 影 响马 泛 素 末 端 水 解 酶 表 达 的 影 响 现 代 预 防 医 学，（）：，黄 景 玉，廖 潇 潇，张 姗 红，等 抑 郁 症 患 者 血 清 微 量 元 素、铜 蓝 蛋 白 与 执 行 功 能 的 关 系 暨 南 大 学 学 报（自 然 科学 与 医 学 版），（）：冯 安 琪，刘 楠，朴 美 花，等 异 氟 醚 对 缺 锌 转 基因 阿 尔 茨 海 默 病 模 型 小 鼠 海
23、马 神 经 元 凋 亡 的 影 响 吉林 大 学 学 报（医 学 版），（）：，房 燚，李 凌 巍，姜 涛，等 进 食 不 同 浓 度 锌 对 大 鼠 脊 髓 损伤 抗 氧 化 应 激 的 作 用 锦 州 医 科 大 学 学 报，（）：，杨 晓 宇，武 国 栋，霍 乃 蕊，等 锌 对 镉 染 毒 小 鼠 腹 腔 巨 噬细 胞 免 疫 功 能 损 伤 的 抑 制 效 应 中 国 兽 医 科 学，（）：吴 艺 舸，王 泽 乾，殷 丽 君，等 小 胶 质 细 胞 吞 噬 在 阿 尔 茨海 默 病 不 同 阶 段 的 作 用 及 其 机 制 中 国 病 理 生 理 杂 志，（）：刘 玥 滢，杜 天 舒
24、，刘 玚，等 小 胶 质 细 胞 介 导 的 吞 噬 作 用在 神 经 退 行 性 疾 病 中 的 研 究 进 展 生 理 学 报，（）：曾 琪，俞 梅 琴，刘 艳 娟 过 表 达 调 控 介 导 小 胶 质 细 胞 极 化 的 机 制 研 究 中 国 病 理 生 理 杂 志，（）：官 劲 帆，安 露 露，韩 江，等 利 拉 鲁 肽 通 过 调 控 小胶 质 细 胞 巨 噬 细 胞 极 化 改 善 糖 尿 病 大 鼠 脑 缺 血 损 伤 陆 军 军 医 大 学 学 报，（）：揭 娟，杨 莉，沈 俊，等 右 美 托 咪 定 抑 制 核 易 位 减轻 大 鼠 创 伤 性 脑 损 伤 神 经 炎 症
25、 中 华 急 诊 医 学 杂 志，（）：罗 婕，王 京 琼，谢 丽 娜，等 自 主 跑 轮 运 动 通 过 信号 调 控 海 马 小 胶 质 细 胞 极 化 抑 制 慢 性 应 激 所 致 大 鼠 抑 郁 样行 为 生 理 学 报，（）：刘 婧 昀，左 群 锌 转 运 体 和 骨 骼 肌 损 伤 修 复 的 研 究 现状 与 进 展 生 命 科 学，（）：南 楠，詹 平 锌 对 砷 致 雄 性 大 鼠 睾 丸 毒 性 损 伤 的 拮 抗 作 用 上 海 交 通 大 学 学 报（医 学 版），（）：房 亚 兰，尹 洁，刘 克 建，等 脑 缺 血 再 灌 注 损 伤 中 自 由 基与 锌 离 子 的 相 互 作 用 首 都 医 科 大 学 学 报，（）：收 稿 日 期：（上 接 第 页），（）：，（）：，：，（），（）：，（）：，（）：，：，：，？，：，：，（）：，（）：，：收 稿 日 期：王 喆，等：硫 酸 锌 通 过 抑 制 活 性 氧 促 进 诱 导 的 小 胶 质 细 胞 向 型 极 化
