免疫组织化学技术

1、免疫组织化学技术概述,2012.9,应用免疫学及组织化学原理，对组织切片或 细胞标本中的某些多肽、蛋白质等大分子物质进 行原位定性、定位或定量研究的技术称为免疫组 织化学（immunohistochemistry）技术或免疫细胞 化学（immunocytochemistry）技术。,？,抗原 抗体,？,？,（一）免疫细胞化学/称免疫组织化学原理:通过特异的抗原、抗体（标记上可见的显示物）反应系统来检查细胞及组织上原位抗原或抗体成分的方法。此方法可以识别定位各种细胞组织成分， 如蛋白质、多肽、核酸、部分类酯、多糖、激素、病原体（寄生虫、细菌、病毒）、受体、。

2、天津天士力集团研究院药理所 文件编号：1常用免疫组织化学染色方法( 一)、ABC 法： (注，下面各种方法，均为手工操作，如没特别说明，均在室温下进行)1.切片经二甲苯 5 分钟。2.切片经二甲苯 5 分钟。3.无水酒精 30 秒。4.无水酒精 30 秒。5.95%酒精 30 秒。6.95%酒精 30 秒。7.90%酒精 30 秒。8.80%酒精 30 秒。9.70%酒精 30 秒。10.自来水洗。(后面的切片脱蜡至水一般都是 1-10)11.0.3%H2O2 甲醇处理切片 10-20 分钟。12.水洗。13.抗原修复。14.PBS 洗 3 次，1 分钟/次。15.加入血清孵育 20 分钟。16.摔干血清，加入一抗 60 分钟。 17.P。

3、1 免疫组织化学（免疫组化）技术 利用抗原抗体的特异性结合反应来检测和定位组织或细胞中的某种化学物质的一门技术，它是免疫学和传统的组织化学相结合而形成的，这种技术称免疫组织化学（immunohistochemistry IHC）或免疫细胞化学（immunocytochemistry） 。其 特点是将形态学改变与功能，代谢变化结合起来，直接在组织切片，细胞涂片或培养细胞爬片上定位一些蛋白质或多肽物质的存在，并可精确到亚细胞结构水平，结合电子计算机图像分析系统或激光扫描共聚焦显微术等技术，可对被检物质进行定量分析。 第一节 免疫组化的发展史及应用自。

4、熟悉而又陌生的世界免疫学,制作,内容,医 学 免 疫 学,第27章 免疫组织化学技术,主讲教师：王兴名,主讲教师：王兴名,主讲教师：王兴名,主讲教师：王兴名,2014-04-15,主讲教师：王兴名,指导教师：王洪江老师,35岁女性，左颈淋巴结肿大，CT扫描未发现原发灶？临床如何处理？,实例,行免疫组化染色：肿瘤细胞CK7（-），CK20(+)，CDX2（+），提示结直肠来源。,免疫组化：协助临床诊断！,活检：提示为腺癌（转移性）,肠镜检查在横结肠发现12mm的病灶，活检证实为腺癌。（ CK7和CK20联合应用）,某些免疫标志物决定是否使用靶向药物治疗,免疫组化-。

5、第四章、免疫组织化学技术,Immunohistochemistry 吉林大学白求恩医学院 组织胚胎学系 李树蕾 2012-11-6,概念： 应用免疫学及组织化学原理，对组织切片或细胞标本中的某些多肽和蛋白质等大分子物质进行原位定性、定位或定量研究的技术称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术。 基本过程： 被检抗原/半抗原提取免疫动物特异性抗体标记抗体抗原抗体反应部位出现有色沉淀,能与对应抗体结合出现抗原-抗体反应、又不能单独激发人或动物体产生抗体的抗原。它只有反应原性，不具免疫原性，又称不完全抗原。大多数多糖和所有的类脂都属于半抗原。,。

6、免疫组织化学注意事项 1、为达到免疫组织化学技术的要求，组织固定越新鲜越好。2、组织脱水必须彻底干净。3、切片必须完整、均匀、平展、无皱折。4、切片的附贴必须牢固，必须使用合适的粘贴剂。新的载玻片，放于玻璃清洗液中浸泡 4 小时甚至过夜，然后取出，经自来水彻底冲洗后，浸入酒精中达 2 小时以上，取出擦干备用或烘干也可。然后再将载玻片浸入 3氨基三乙氧基硅烷（3 Aminopropyl triethoxy- silane）的稀释液（1：50 用丙酮或无水乙醇稀释都可以）中硅化 10 分钟，后经无水乙醇洗 2 次，烘干即可使用。5、切片必须烘烤附贴牢固，。

7、1酶组织化学与免疫组织化学技术习题第一部分组织学技术和免疫组织化学技术一、选择题 （一）A1 型题(标准型) 1.C 2.B 3.A 4.C 5.A 8.B 9.C 10.D 14.A 23.D1.免疫组化技术的关键步骤是 A.标本处理 B.抗体的处理与保存 C.免疫染色D.设立对照试验 E.结果判断2.免疫组化技术的首要试剂是 A.抗原 B.抗体 C.标记物D.固定剂 E.洗涤液3.酶免疫组化技术中，关于标本处理的说法正确的是 A.充分洗后于室温用 0.3%H2O2 和 80%甲醇处理 2030min。B.充分洗后于室温用 0.3%H2O2 和 80%甲醇处理 4050min。C.充分洗后于室温用 0.5%H2O2 和 90%甲醇处理 2030。

8、免疫组织化学染色方法（S-P 法）免疫细胞化学（immunocytochemistry）是根据免疫学原理，利用抗体同特定抗原专一结合，对抗原进行定位测定的技术。抗原主要为大分子或与大分子相结合的小分子；抗体则是由浆细胞针对特定的抗原分泌的 球蛋白。如果将抗体结合上标记物，再与组织中的抗原发生反应，即可在光镜或电镜下显示出该抗原存在于组织中的部位。常用的标记物有荧光素和酶。荧光素标记的称为免疫荧光法（immunofluorescent technique），常用的萤光素有异硫氰酸荧光素（fluorescein isothiocyanate）、罗丹明（rhodamine）等。酶标记的。

9、1组织学病理学技术与免疫组织化学课程任课教师：张雷 学时数：20一 光镜组织病理切片技术(6 学时)（1） 取材注意事项及组织固定法（2） 制片方法：石蜡切片、冰冻切片、铺片、磨片（3） HE染色及特殊染色方法二 组织化学技术（4 学时）（1） 固定与制片（2） 蛋白质、糖类、脂质及核酸组织化学反应（3） 酶组织化学三 免疫组织化学技术（10 学时）（1） 免疫学及免疫组织化学的原理和基本技术（2） 常用免疫组织化学方法（3） 免疫酶组织化学技术（4） 免疫电镜技术（5） 原位杂交组织化学（6） 细胞凋亡的过程及相关因素（7） 免疫组织化。

10、免疫组织化学技术2010,免疫组织化学技术,免疫组织化学技术的原理,免疫组织化学技术特点,免疫组织化学技术的主要方法,亲和免疫组织化学技术,酶免疫组织化学技术,酶免疫组织化学技术中,常用的酶是,简述免疫组织化学技术的主要方法,亲和免疫组织化学技术定义。

11、第四章、免疫组织化学技术,Immunohistochemistry吉林大学白求恩医学院 组织胚胎学系 李树蕾 2013-11-19,（二）冰冻切片免疫组化染色 1.恒冷箱切片：新鲜组织或80保存 组织切片10-14um； 2.裱片和晾干,密封-20短期保存 ； 3.染色前冷丙酮4固定10-20分，PBS冲洗2次5min； 4.必要时细胞膜打孔。 5.通常苏木精复染细胞核，水溶性封片剂封片。,(三)培养细胞免疫细胞化学染色 1.固定 贴壁细胞制备细胞爬片；悬浮细胞制备滴片或者甩片4%多聚甲醛或冷丙酮室温固定10-20min 2.晾干 易脱片的细胞大于2h， PBS冲洗2次5min； 3.细胞膜打孔,二、免疫组。

12、武汉大学病理教研室,免疫组织化学技术的定义,免疫组织化学技术(Immunohistochemistry, IHC)是用标记的特异性抗体（或抗原）对组织内的抗原（或抗体）的分布进行定位、定性、定量检测，经过组织化学呈色反应在组织原位显示抗原（或抗体），如各种蛋白质、多肽、磷脂和多糖等成分的一门新技术。,武汉大学病理教研室,免疫组织化学的应用,IHC通过检测细胞内、细胞表面或细胞间的正常或异常的物质，以研究组织细胞的正常生理、代谢及疾病的病因、发病机理，广泛用于各种蛋白质或肽类物质表达水平的检测，细胞属性的判定、淋巴细胞的免疫表型分。

13、,免疫学检验,第二十二章 免疫组织化学检验技术,免疫组织化学检验技术又称免疫细胞化学检验技术-是利用标记的特异性抗体（或抗原）与组织细胞内抗原（或抗体）进行的抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对组织和细胞抗原进行定性、定位、定量测定的免疫检测方法。,免疫组化的检测原理,免疫组化的检测原理,免疫组化的检测原理,第一节 免疫组化检验技术基本知识,免疫组化全过程,一、标本制作,标本制作是获得良好的免疫细胞组织化学分析的保障，良好的细胞和组织学结构将有助于抗原的准确显示和定位。 （一）标本的主要来源主要有：活体组织各。

14、免疫组化概念 组织包埋液 步骤 抗原修复原因和方法 结果判断假阴性假阳性 质量控制 表上的抗体 CD34，CD68 B细胞标记物 T细胞标记物：3、7,细胞角蛋白,免 疫 组 织 化 学 (Immunohistochemistry，IHC),南京鼓楼医院病理科王景美,免疫组织化学概念,免疫组织化学或免疫细胞化学应用免疫学(抗原抗体反应）和组织化学（化学显色反应）的原理，对组织切片或细胞标本中的某些成份进行原位定性、定位甚至定量研究的技术。,免疫组织化学的发展历史,1941：Coons实用免疫荧光技术 1970：Sternberger抗体酶标技术（PAP法） 1975：Kohler,Milstein单克。

15、免 疫 组 织 化 学引言酶工程是生物工程的重要组成部分，近几十年来，随着研究手段的更新和技术水平的提高，产生了一门以研究酶在细胞内的存在及其动态，以阐明组织细胞的结构和功能为主要内容的科学酶组织化学。酶组织化学是利用酶化学反应的产物可在光学显微镜或电子显微镜下被识别的特性，借以从形态学角度判定酶在组织细胞内的存在的部位的一门技术，其基础是组织化学。它具有将形态学、生物化学和生理学联系起来的特点，在生物学、生物化学、医学生物领域内日益发挥着重要的作用。研究组织细胞内特定酶分布的酶组织化学方法大致分为。

16、免疫组织化学染色技术,第一节 常规组织学染色技术概述,宏观 微观 超微结构 基因水平组织形态学研究技术的种类：一、病理大体组织标本的染色方法在标本制作中，为了某种特殊目的，突出显示标本的重要部分，借助组织切片的特殊染色方法对标本进行染色，将病变器官及不同组织成分用染料染成不同的颜色，以便于区分大体标本的不同成分和病变特点，如： 脂肪组织染色法目的：主要用于心、肝、肾脂肪变性，动脉粥样硬化大体标本的染色,试剂：苏丹或苏丹 结果：病变处脂肪组织呈橙黄色早期心肌梗死染色法目的：显示早期心肌梗死的区域试剂：0.1% 。

17、免疫组织化学技术 http:/www.keygentec.com.cn,免疫组织化学技术,基本原理通过免疫学中抗原抗体结合反应，用特异性抗体（单克隆或多克隆）检测组织、细胞内相应的抗原物质，形成抗原 抗体复合物；此复合物上带有事先标记的标记物，通过与标记物相对应的检测系统，如酶底物显色反应可使之呈现某种颜色，从而可检测组织细胞内的抗原，以达到诊断、鉴别诊断和研究的目的。,组织与细胞材料的制备免疫组织化学方法,组织与细胞材料的制备,组织石蜡切片制作 组织冰冻切片制作 细胞爬片制作 细胞涂片制作,切片的制作,组织的固定 组织石蜡包埋 切片。

18、免疫组织化学的概念： 免疫组化是利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质) ，对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学。免疫组化实验中常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体。免疫组化实验所用的组织和细胞标本有哪些？实验所用主要为组织标本和细胞标本两大类，前者包括石蜡切片（病理大片和组织芯片）和冰冻切片，后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。其中石蜡切片是制作组织标本最常用、最基本的方法，对于组织形态保存好。