1、实验一 凝集实验,一、实验内容,1、直接凝集实验(玻片法)血型鉴定,每人做,2、间接凝集实验类风湿因子检测,小组做,二、目的要求,1、掌握血清学反应概念、特点、影响条件及类型；,2、了解凝集反应的原理、类型及其用途；,3、熟悉常用凝集反应的实验方法及结果判定。,三、免疫实验需注意的问题,(一)免疫实验室注意事项：,1、必须穿白大衣进实验室；,2、实验中注意实验室秩序；,3、如发生意外如损坏玻璃器材等，要及时报告；,4、要节约实验药品；,5、实验后要回收的玻璃器材如载玻片等，放于指定陶瓷缸内；废纸及一次性用品弃于垃圾桶内。,6、实验完毕，清理完桌面，班长安排清洁，老师检查后，做清洁同学方可离开。
2、,(二)免疫实验课目的：,1、验证所学理论知识；,2、训练基本操作技术，培养独立工作能力。,(三)要求：,1、严肃认真；,2、多想、多看、多做；,3、书写实验报告。,实验报告书写格式,一、实验内容，如血型检查；,2、实验步聚；,3、实验结果；,4、结论；,5、讨论。,实验题目,二、,1、,1、主要材料；,四、凝集反应相关知识,(一)血清学反应：,即体外进行的Ag-Ab反应，由于机体绝大部分抗体存在于血清中，故又叫血清学反应。,特点：,(1)高度特异性；,(2)分子表面的可逆性结合；,(3)Ag、Ab比例合适才会出现肉眼可见的反应。,肉眼可见的凝集物。,影响条件,1、电解质：0.85% NaCl
3、；,2、酸碱度：pH69(7.0)；,3、温度：15400C(370C )。,Ag-Ab反应种类：,1、凝集反应；,2、沉淀反应；,3、补体结合反应；,4、中和反应；,5、免疫标记技术。,4大经典免疫实验,(二)凝集反应：,颗粒性抗原(细菌、细胞等)与相应抗体在适当的电解质条件下凝集成肉眼可见的小块，称为凝集反应(agglutination)。,颗粒性Ag凝集原； 相应Ab凝集素。,颗粒性抗原：,光镜下可见，肉眼观呈浑浊悬液，如细菌、RBC等。,可溶性抗原：,光镜无形态，肉眼观呈澄清透明，如蛋白质、多糖抗原等。,凝集反应,沉淀反应,凝集反应类型：,1、直接凝集反应,2、间接凝集反应,1、直接凝
4、集反应,(1)玻片法：如检查血型的血细胞凝集现象；,(2)试管法：诊断伤寒病的肥达氏反应。,已知Ab,测Ag，为定性实验；,已知Ag,测Ab，为定量实验；,用途：鉴定菌种、菌种分型、血型检查。,用途：诊断肠热症(Widal reaction),诊断布氏菌病(Wright reaction),2、间接凝集反应,RBC间接血凝试验,用途：某些病毒感染和变态反应患者血清中的相抗体量。,乳胶间接乳胶凝集试验,用途：检测类风湿因子等。,间接凝集抑制试验,妊娠试验,反向间接凝集试验,某些传染病和原发性肝癌的早期诊断。,协同凝集试验,用于检测传染病早期血液及分泌液中的微量Ag。,五、实验内容,(一)血型鉴定
5、(每人做)：,ABO血型,1、材料,已知Ab:标准血清：抗A和抗B血清,待测Ag:RBC血型抗原,2、方法,(1)取血(无名指尖或耳垂)NS试管10%RBC悬液；,(3)加血清各1滴；,(4)加RBC各1滴；,(5)牙签搅和并摇晃混匀；,(6)结果判断(5-10min后)。,(2)准备一张载波片；,A凝集、B不凝集A型血,A不凝集、B凝集B型血,A凝集、B凝集AB型血,A不凝集、B不凝集O型血,在白背景上观察,4、注意事项,(2)RBC悬液不能太淡和太浓，2-5%；,(3)搅和牙签在A和B不能混用；,(4)在白色背景上观察效果好。,(1)取血时注意无菌操作；,(二)类风湿因子检测,Ag: 变性IgG Ab: 抗变性IgG(类风湿因子),间接乳胶凝集试验,类风湿：,患者体内,1. 材料,已知Ag:致敏乳胶(乳胶颗粒上有变性IgG),待测Ab:待检血清中的类风湿因子,2.类风湿因子检测方法：,A、取一乳胶凝集实验反应板；,B、加待测血清、阳性和NS对照各一滴；,C、各加一滴致敏乳胶；,D、牙鉴搅拌;,乳胶凝集如细沙状。,以黑背景观察为佳。,E、5分钟后观察结果。,
