1、,凝集试验,凝集反应,凝集反应是指颗粒性抗原（细菌、红细胞或附着在载体上的可溶性抗原）与相应的抗体在适量的电解质存在的条件下，经一定时间后凝聚成肉眼可见的凝集物。参加反应的抗原称为凝集原,抗体称为凝集素。凝集反应是经典的血清学反应，使用历史悠久并一直沿用至今。1896年， Widal诊断伤寒病；1900年，Landsteriner发现人类血型并于1930年获得了诺贝尔奖金。,凝集反应的特点,凝集反应的发生人为可以分为两个阶段： 1、抗原抗体特异性结合阶段，反应快速 2、出现可见的凝集反应阶段，反应较慢实际上这两个阶段是难以严格区分的，所需的时间也是受多种因素的影响的。,凝集反应的原理,细菌和红
2、细胞等颗粒抗原在悬液中带弱负电荷，周围吸引一层与之牢固结合的正离子，外面又排列一层松散的负离子层，构成一个双层离子云。在松散层内界和外界之间的电位差形成Z电位。溶液中的离子强度愈大，Z电位也就愈大。Z电位使颗粒相互排斥。当特异抗体与相应抗原颗粒互补结合时，抗体的交联作用克服了抗原颗粒表面的Z电位，而使颗粒聚集在一起。,正离子,负离子层,负电荷,负电荷,抗原 ,凝集反应的原理,抗原抗体的特异结合,出现可见的颗粒凝集,凝集试验按方法的不同，可分为两大类：一、直接凝集试验二、间接凝集试验其中自身红细胞凝集试验和抗球蛋白参与的凝集试验是两种特殊的凝集反应。,方法学评价凝集试验是一个定性的检测方法，也可
3、进行半定量检测，操作简单，敏感度高，临床上应用广泛。,一、直接凝集反应,原理：颗粒性抗原直接与抗体结合，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象。常用的凝集反应有玻片法和试管法,颗粒性抗原,凝集素,直接凝集反应,玻片凝集试验,方法评价: 定性试验，简便和快速，敏感度低 临床应用: 菌种鉴定、血清学分型、血型鉴定,试管凝集试验,试管凝集反应,方法评价： 半定量试验 简便、快速 敏感度低 可有假阳性,临床应用： 肥达试验 外斐试验 Wright test:布鲁菌病 交叉配血试验,二、间接凝集反应,间接凝集反应(indirect agglutination)将可溶性抗原或抗体吸附于颗粒性载体表面，然
4、后与相应的抗体或抗原反应，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象可分为四类：正向间接凝集反应、反向间接凝集反应、间接凝集抑制反应、协同凝集反应,正向间接凝集反应,用抗原致敏载体以检测标本中相应抗体,正向间接凝集反应,可溶性抗原,载体颗粒,反向间接凝集反应,用特异性抗体致敏载体以检测标本中相应的抗原,反向间接凝集反应,抗体,可溶性抗原,载体颗粒,间接凝集抑制反应,诊断试剂为抗原致敏载体和相应的抗体，用以检测标本中是否存在与致敏抗原相同的抗原，先将标本与抗体反应，再加入致敏抗原，若出现凝集，说明标本中不存在相同的抗原，如凝集抑制，说明存在相同的抗原。,间接凝集抑制反应,凝集,凝集抑制,待检样品,
5、待检样品,协同凝集反应,抗体致敏载体，载体为金黄色葡萄球菌A蛋白（SPA） SPA具有与IgG的Fc段结合的特性。,间接血凝试验,是以红细胞作为载体的间接凝集试验。,载体常用的有绵羊、家兔、鸡的红细胞及人O型红细胞。新鲜红细胞吸附蛋白质抗原/抗体能力较差，不耐热，易变脆、溶血，保存时间短。醛化的红细胞具有较强的吸附蛋白质能力，能耐60加热，可长期保存不溶血。,致敏致敏用的抗原/抗体要求纯度高，并有良好的免疫活性直接法：低PH、低离子强度下，醛化红细胞直接吸附。间接法：需用偶联剂将蛋白质抗原或抗体结合到红细胞上。,血凝试验可在微量滴板或试管中进行，将倍比稀释的标本滴一滴到板孔中，同时设一空白孔，
6、再滴入一滴0.5%致敏RBC悬液，混匀，室温静置1-2h.结果：RBC沉积孔底，集中于一圆点为阴性RBC凝集，分布孔底周围，可根据凝集程度判断阳性反应的强弱，以+为滴度终点,反向间接血凝试验,血凝试验强度,胶乳凝集试验,一种以聚苯乙烯胶乳为载体颗粒的间接凝集反应。 通过物理吸附、化学交联的方式结合蛋白质抗原/抗体 分为试管法和玻片法 胶乳为人工合成的载体，性能比红细胞稳定，均一性好，但与蛋白质结合能力以及聚集性能不如红细胞，因此作为间接凝集反应，胶乳凝集的敏感度不及血凝试验。,三、胶乳凝集试验,明胶凝集试验,将病毒抗原或重组抗原吸附于粉红色明胶颗粒上，当致敏颗粒与样品血清作用时，若血清含有抗病
7、毒抗体则可形成肉眼可见的粉红色凝集,间接凝集反应的应用,抗原的检测反向间接凝集试验可用于检测病原体的可溶性抗原，也可用于检测各种蛋白质成分。抗体的检测检测细菌、病毒、寄生虫等感染后产生的抗体。,自身红细胞凝集试验,双功能抗体：1、抗人O型红细胞抗体：能与各种血型的红细胞结合，但不引起凝集反应2、待测抗原特异性抗体待测标本：全血1、未经致敏的红细胞与抗人O型红细胞抗体结合2、待测抗原与特异性抗体结合应用：HIV、HBV等检测，敏感度与间接血凝试验相仿,自身红细胞凝集试验（一）,双功能抗体,自身红细胞凝集试验（二）,双功能抗体抗原交联物,抗球蛋白试验,IgM类抗体：分子量大，在凝集反应中能与两个或
8、以上相应的抗原牢固的结合，起到桥接作用，发生可见的反应。 IgG类抗体：分子量小，在凝集反应中能与一个相应的抗原牢固的结合，不能很好的起到桥联作用，在一般条件下不出现可见反应，故又称不完全抗体。,抗球蛋白试验，又称Coombs试验，利用抗球蛋白抗体作为第二抗体，连接与红细胞表面抗原结合的特异性抗体，使红细胞凝集，是检测标本不完全抗体的一种很有用的方法。分为两种方法：直接Coombs试验间接Coombs试验,直接Coombs试验,检测标本中结合到红细胞表面的不完全抗体 可分为玻片法定性试验和试管法半定量试验 常用于HDN、自身免疫性溶血症、突发性自身免疫性贫血和医源性溶血性贫血等检测。,间接Coombs试验,检测血清中游离的不完全抗体。先将受检血清和具有待测不完全抗体相对应抗原的红细胞结合，再加入抗球蛋白抗体，使红细胞凝集。 常用于检测母体Rh(D)抗体、红细胞不相容的输血所产生的血型抗体等,
