1、第三章 药物的杂质检查,基本内容,第二节 一般杂质的检查方法,第三节 特殊杂质的检查方法,第一节 概述,练习与思考,基本要求,一、掌握一般杂质检查的原理、方法和计算。二、熟悉特殊杂质检查的方法和原理。,一、药物纯度的概念与要求,第一节 概述,1.药物纯度的概念：药物的纯度是指药物的纯净程度。对药物纯度的认识是在防治疾病的实践中积累起来的 如：ASA中除了SA外，还存在乙酰水杨酸酐、乙酰水杨酰水杨酸等SA的衍生物，具有致敏作用。 2. 对药物纯度的要求随着临床应用的实践和分析测试技术的发展，在不断改进，使之更加完善 如：度冷丁（）1948年收入BP，1970年经GC分离鉴定出两种无效异构体（）和
2、（），有时高达20%30%。,例：纯度要求 盐酸哌替啶(杜冷丁),无效异构体I 无效异构体 II,3.杂质：药物中存在的无治疗作用的、影响药物稳定性和疗效、甚至对人体健康有害的物质。4.药物纯度的评价：应把药物的性状、理化常数、杂质检查、含量测定等作为一个有联系的整体来评价药物的纯度。,5.与试剂的纯度不同，不能用化学试剂的规格代替药品标准，更不能将化学试剂当作药品直接用于临床如：试剂规格的BaSO4,允许存在可溶性钡盐药品中不允许：可导致医疗事故,1杂质的来源：生产过程中引入贮藏过程中产生,二、杂质的来源与种类,酸度：水解试剂带入乙醇中不溶物：水解中间体(糊精)SO32-：产品用H2SO3漂
3、白可溶性淀粉：水解不完全,1杂质的来源：生产过程中引入贮藏过程中产生,二、杂质的来源与种类,外界条件影响：日光、空气、温度、湿度、微生物等引起药物产生,例如： 麻醉乙醚 醛及有毒的 过氧化物,2杂质的分类 依杂质来源分类：一般杂质：含义，品种特殊杂质：含义 依杂质毒性分类：信号杂质有害杂质 依杂质理化性质分类：有机杂质无机杂质残留溶剂,二、杂质的来源与种类,一般杂质:在自然界分布比较广泛,在多种药物的生产或贮存过程中容易引入的杂质。 如：pH值、溶液的澄清度、氯化物、硫酸盐、重金属等,特殊杂质：在有关药物的生产和贮存过程中，因其生产工艺或药物本身的性质可能引入的杂质。,A + B C D +
4、E,原料,中间产物,副产物,产品,试剂 溶剂 催化剂,金属容器、管道、装置,制剂时的辅料,异构体多晶型,三、杂质的限量检查,在不对人体有害、不影响疗效的情况下，允许药物中存在一定量的杂质 1.杂质限量：药物中所含杂质的最大允许量 表示方法：或（百万分率） 2.限量检查：药物中杂质的检查，一般不要求测定其含量，而只是检查杂质的量是否超过限量。,常用方法：对照法,供试液 供试液 对照液相同条件 现象 现象下反应 比较供试液 对照液对照液 现象 现象,取一定量 (CV) 与被检杂质相同的纯品或对照品配成对照品溶液，与一定量(S)药物供试溶液在相同条件下处理后，比较反应结果，以确定杂质含量是否超过规定
5、。,合格,不合格,对照液浊度 供试液浊度,杂质限量的计算：,式中：L 杂质的限度（%） C 对照液浓度 （g/ml） V 对照液的加入体积（ml) S 供试品的量(g) 注意: 单位统一,例 1 ： 对乙酰氨基酚中氯化物的检查：取试样 2.0g 溶于100ml水中，取25ml检查Cl-，与标准NaCl溶液(10g/ml) 5ml对照液相比，不得更深。C= 10g/ml V=5.0mlS= 25 2.0 100=0.5g,一氯化物检查法： 1. 原理：供试液：Ag+ClAgCl（白色混浊） 对照液：标准氯化钠溶液 2. 方法：,比浊,第二节 一般杂质的检查方法,3.讨论黑色背景下，从上至下观察（
6、纳氏比色管“成对”）氯化物适宜浓度：5080g/50ml（浊度梯度明显） 硝酸酸性：作用（介质条件）避光（AgCl见光分解）供试液若不澄清（事先过滤）供试液若有色（干扰消除）平行操作原则,供试品有色：可采用内消色法，按中国药典附录规定的方法处理。,供试品,+ AgNO3,放置10min 过滤,澄清溶液,+标准NaCl,+水,对照溶液,供试品,+ AgNO3,+水,供试品溶液,+ AgNO3,+水,二、硫酸盐检查法,1.原理： 供试液： SO2 Ba2 BaSO（白色混浊） 对照液：标准硫酸钾溶液,比浊,2.方法,3. 讨论黑色背景下，从上至下观察硫酸盐适宜比浊浓度：100500g/50ml 盐
7、酸酸性（介质）供试液如浑浊需滤过供试液若有色（干扰消除）平行操作原则,三铁盐检查法 （一）硫氰酸盐法1.原理： 供试液：Fe3 6SCNFe(SCN)63（红色） 对照液：标准铁溶液（硫酸铁铵溶液）,比色,2.方法,3.讨论白色背景下，从侧面观察 盐酸酸性（防止三价铁水解） 过硫酸铵的作用（氧化二价铁为三价铁） Fe3的适宜比色范围：10-50g/50ml 色调不一致时或所呈硫氰酸铁的颜色较浅 不便比较时：可分别移入分液漏斗中，加正丁醇或异戊醇提取，分别取提取液比色。 平行操作原则,(二）巯基醋酸法（BP ）1. 原理 巯基醋酸还原Fe3+为Fe2+，在氨碱性试液中与Fe 2 +作用生成红色配
8、位离子。 2Fe3+ + 2HSCH2COOH 2Fe2+ + SCH2COOH + 2H+ SCH2COOHFe2+ + 2HSCH2COOH Fe(SCH2COOH)2 + 2H+Fe(SCH2COOH)2 Fe(SCH2COOH)2 2- + 2H2O,2OH-,四、重金属检查法,重金属是指在实验条件下与硫代乙酰胺或硫化钠作用显色的金属杂质，如银、铅、汞、铜、镉、锡、锑、铋等，由于药品生产过程中遇到铅的机会比较多，铅在体内又易积蓄中毒，故检查时以铅作为代表。,ChP(2010年版)第一法(硫代乙酰胺法)用于溶于水、稀酸和乙醇的药物，最常用1.原理：供试液：CH3CSNH2 + H2O C
9、H3CONH2 + H2SH2S + Pb2 PbS+ 2H（黄棕黑）对照液：标准铅溶液（加硝酸防止Pb2+水解）2.方法：,比浊,3. 讨论白色背景下，从上至下观察pH 3.5醋酸盐缓冲液Pb2适宜比色范围：1020g/27ml供试液有色时：供试品有微量Fe3+:在弱酸性溶液中氧化硫化氢析出S产生混浊影响比色，可加Vc或盐酸羟胺使Fe3+还原成Fe2+再检查。,第二法（炽灼后的硫代乙酰胺法）：用于在水、稀酸、乙醇中难溶，或含芳环、杂环（能与重金属离子形成配位化合物）的有机药物1.原理：炽灼破坏后 Pb2 第一法检查2.方法：500600炽灼第三法（硫化钠法）：用于难溶于稀酸但能溶解于碱性水溶
10、液的药物（磺胺类、巴比妥类）供试液：Pb2Na2SPbSNa（灰黑色） 对照液：标准铅溶液 介质条件：NaOH碱性条件,比浊,五砷盐检查法古蔡法 二乙基二硫代氨基甲酸银法（Ag-DDC） （一）古蔡法：1.原理：金属锌与酸作用产生新生态的氢，氢与药物中微量砷盐反应，生成具挥发性的砷化氢气体，遇溴化汞试纸产生黄至棕色的砷斑，与一定量标准砷溶液在同样条件下生成的砷斑比较，颜色不得更深。,As3+ + 3Zn + 3H+ 3Zn2+ + AsH3 AsO33- + 3Zn + 9H+ 3Zn2+ + 3H2O + AsH3AsO43- + 4Zn + 11H+ 4Zn2+ + 4H2O + AsH3
11、AsH3 + 3HgBr2 3HBr + As(HgBr)3 (黄色) 2As(HgBr)3 + AsH3 3 AsH(HgBr)2 (棕色) As(HgBr)3 + AsH3 3HBr + As2Hg3 (棕黑色)2.仪器装置3.方法：醋酸铅棉花的作用KI和酸性SnCl2的作用标准砷斑用2ml的标准砷溶液制成,供试品、HCl、Zn、KI、SnCl2,Pb(Ac)2棉,HgBr2试纸,返 回,KI和酸性SnCl2的作用：,AsO43- + 2I- +2H+ AsO33- + I2 + H2OAsO43- + Sn2+ + 2H+ AsO33- + Sn4+ H2O I2 + Sn2+ 2I-
12、+ Sn4+ 4I- + Zn2+ ZnI42-,AsO43-,AsO33-,AsH3,慢,快,KI SnCl2,将五价砷还原为三价砷，加快反应速度,5,3,抑制锑化氢的生成,促进AsH3的生成,形成Zn-Sn齐，去极化,返 回,Pb(AC)2棉的作用：消除锌粒和供试品中可能含有的少量的硫化物的影响。S2- + 2H+ H2S H2S + HgBr2 2HBr + HgS （汞斑）H2S + Pb(Ac)2 PbS + 2HAc,返 回,4.供试品处理,（1）供试品为S2-,SO32-, S2O32-等: 因在酸中生成H2S,SO2,与HgBr作用生成HgS或Hg，干扰砷斑检查。用硝酸氧化成硫
13、酸盐可消除。 （2）供试品为Fe3+ ，能消耗KI，SnCl2 ，可先加足量SnCl2。 （3）环状结构有机药物，先有机破坏 （4）含锑药物，改用白田道夫（Betterdorff ）法2As3+ + 3SnCl2 + 6HCl 2As+ 3SnCl4 + 6H+,胶态、棕褐色,（二）二乙基二硫代氨基甲酸银法（silver diethyl dithio carbamate) （Ag-DDC法）1.原理：供试液：AsH3+ 6Ag（DDC）Ag （红色胶态）对照液：标准砷溶液2.仪器装置：,比色或 测定A,Ag(DDC)的 吡啶溶液(USP) 三乙胺-氯仿溶液(ChP),3.方法：白色背景下，从上
14、至下观察；或在510nm处，测定吸收度,小结,其他要求：原理试液的作用对照的方法砷盐检查法的仪器装置,六、溶液颜色检查法,控制药物中有色杂质的含量1. 目视比色法,5种色调 10种色号,标准比色液,标准贮备液,比色原液,K2Cr2O7 CoCl2 CuSO4,2. 分光光度法有色杂质对光有吸收，通过测定吸收度可控制其限量 3. 色差计法 通过比较供试品、标准比色液与水之间的色差值,黄绿、黄 橙黄,橙红 棕红,七、易炭化物检查法,检查药物中遇硫酸易炭化或易氧化而呈色的微量有机杂质。 这类杂质多数结构未知，常采用加硫酸呈色后与对照液比较的方法进行检查。对照液为：标准比色液由CoCl2,K2Cr2O
15、7,CuSO4 配制KMnO4液,八、溶液澄清度检查法,八、溶液澄清度检查法,澄清：系指供试品溶液的澄清度相当于所用溶剂或 未超过0.5号浊度标准液,九、炽灼残渣检查法,炽灼残渣：有机药物经炭化或挥发性无机药物加热分解后，高温炽灼，所产生的非挥发性无机杂质的硫酸盐 加硫酸炽灼法：700800;如炽灼残渣需留作重金属检查，则炽灼温度应控制在500600 恒重：供试品连续两次炽灼或干燥后的重量差异在0.3mg以下 限量标准：0.1%-0.2%,十、干燥失重测定法,干燥失重：药品在规定条件下，经干燥后所减失的量，以百分率表示 检查：药物中的水分和挥发性物质 1.常压恒温干燥法适用于受热较稳定的药物温
16、度：105 2.减压干燥法适用于熔点低、受热分解的药物 3.干燥剂干燥法适用于受热易分解或升华的药物干燥剂：硅胶、硫酸、五氧化二磷,十一、有机溶剂残留量测定法,主要检查药物在生产过程中引入的有害的有机溶剂常采用气相色谱法进行检查直接进样法顶空进样法（适用于挥发性大的样品测定）,第三节 特殊杂质检查,特殊杂质：在该药物的生产和贮存过程中，根据药物的性质、生产方法和工艺条件，有可能引入的杂质 方法： 利用药物和杂质在物理和化学性质上的差异进行,物理：外观性状、分配或吸附、对光的吸收的差异 化学：对某一化学反应的差别,杂质与试剂反应 药物无反应,一、色谱分析法,（一）TLC 1.杂质对照品法判断结果
17、：供试品溶液如显与对照品相应的杂质斑点，其颜色与对照品溶液主斑点比较，不得更深,特点：分离效能高，分离的同时进行测定，应用广泛,需要对照品,供试品A,对照品B,A,？,B,前沿,原点,l0,l,2.高低浓度对比法当杂质结构不能确定、或无杂质对照品时，采用此法 要求：杂质斑点的颜色与主成分斑点颜色相同或相近,供试液,稀释,对照液,点样、展开、干燥、显色,结果判断：供试液所显杂质斑点与对照液主斑点比较，不得更深,（高）,（低）,（二）高效液相色谱法(HPLC),1.内标法（加校正因子测定法）,1.内标法（例）,2. 外标法测定 需要杂质对照品，进样量能够精确控制,3.加校正因子的主成分自身对照法
18、建立方法时，需要杂质对照品 杂质检查时，不需杂质对照品,4.不加校正因子主成分对照法用于没有杂质对照品时杂质的检查对照液：供试品的稀释液，进样测得A主供试液：进样测得杂质Ai，杂质Ai A主即为合格.,4.不加校正因子主成分对照法（例）,5.峰面积归一化法适用于粗略测量杂质含量 L% = Ai /(Ai + A主）100% 例如：利巴韦林中有关杂质的检查：,5.峰面积归一化法（例）,（三）气相色谱法(GC)主要用于药物中挥发性的杂质检查，其检查方 法与HPLC法相同。,利用药物和杂质对光选择性吸收性质的差异 （一）紫外分光光度法在药物无吸收而杂质有吸收的波长测定吸收度，规定测得的吸收度不得超过
19、某一限值,二、光谱分析法,220 260 300 nm,肾上腺酮及肾上腺素的紫外吸收曲线,max310nm,二、光谱分析法,（二）红外分光光度法用于药物中无效或低效晶型的测定 晶型结构不同，化学键的键长、键角等发生不同 程度的变化，导致红外吸收光谱中某些特征峰的 频率、峰形、强度等出现显著差异。,（三）原子吸收分光光度法用于金属元素的测定,试样预处理原子化器待检元素的原子蒸气求出待检元素含量检测器吸收特定的光,利用药物和杂质在化学性质上的差异,选择合适的试剂，使之与杂质反应产生颜色、 沉淀或气体，而药物不发生反应,三、化学分析法,利用药物和杂质在物理性质上的差异,（一）臭味及挥发性的差异若存在
20、具有特殊气味的杂质，可由气味判断 （二）颜色的差异药物无色有色杂质有色分解产物,溶液颜色检查法,四、物理分析法,（三）溶解行为的差异 药物溶于水、有机溶剂、酸、碱 杂质不溶于,或反之,（四）旋光性质的差异,手性C,旋光性,比旋度/旋光度,反应药物纯度限定杂质限量,药物和杂质的比旋度差异很大,是否偏离规定范围,药物无旋光性而杂质有,是否超出限定的药物溶液的旋光度值,2药物中杂质的限量是指 A.杂质是否存在 B.杂质的合适含量 C.杂质的最低量 D.杂质检查量 E.杂质的最大允许量 3中国药典中收载的砷盐检查方法为 A.摩尔法 B.碘量法 C.白田道夫法 D.Ag-DDC E.古蔡氏法,练习与思考
21、,A型题,B型题,A.稀HNO3 B.硫代乙酰胺试液 C. BaCl2试液 D. Ag-DDC试液 E. NH4SCN试液 1. 铁盐检查 2. 硫酸盐检查 3. 氯化物检查 4. 砷盐检查,E,C,A,D,A.AgNO3试液 B.硫代乙酰胺试液 C. BaCl2试液 D. KI-SnCl2试液 E. NH4SCN试液5. 重金属检查6. 硫酸盐检查7. 氯化物检查8. 砷盐检查,B,C,A,D,X型题,1一般杂质检查包括 A。氯化物检查 B. 硫酸盐检查 C. 重金属检查 D. 砷盐检查 E. 铁盐检查,2干燥失重检查法有： A. 常压恒温干燥法 B. 干燥剂干燥法 C. 减压干燥法 D. 摩尔法 E. 白田道夫法,
