1、第六章 药物的杂质检查,第一节 杂质及其限量检查 第二节 一般杂质检查 第三节 特殊杂质的检查,第一节 杂质及其限量,一、药物的纯度 二、杂质的来源 三、杂质的分类 四、杂质的限量,一、药物的纯度,1.药物纯度：药物的纯度是指药物的纯净程度，反映了药物质量的优劣。 2.杂质：药物中存在的无治疗作用的或影响药物稳定性和疗效、甚至对人体健康有害的物质。 3.药物纯度的评价：应把药物的性状、理化常数、杂质检查、含量测定等作为一个有联系的整体来评价药物的纯度。,4.药物的纯度与化学试剂的纯度 化学试剂的杂质限量是从试剂使用时杂质可能引起的化学变化对试剂使用目的的影响加以规定，一步影响实际的适用范围和目
2、的确定；试剂有很多等级，如基准试剂、优级纯（GR）、分析纯（AR）、化学纯（CP）、色谱纯、光谱纯。 药物的纯度主要从药物安全、有效角度考虑，杂质限量的确定要考虑杂质的生理作用核对药物稳定性的影响，药品只有两个等级：合格或不合格。,二、杂质的来源,三、杂质的分类,1.按来源分为：,按来源还可将杂质分为：,工艺杂质 降解产物 从反应物和试剂中带入的杂质,2.按理化性质分： SFDA、ICH、FDA采用这种分类,无机杂质 有机杂质 溶剂残留,无机杂质：可能来源于生产过程，如使用的仪器、原料（如砷、铅等）、干燥剂和过滤辅助器等，反应试剂、配位体、催化剂、重金属、其他残留的金属、无机盐、助滤剂、活性炭
3、等。一般是已知的和确定的。主要影响药物稳定性并能反映工艺本身的情况。 有机杂质：可能在生产或贮存中引入，这些杂质可能是确定的或不确定的、挥发性或非挥发性的，包括起始物、副产物、中间体、降解产物、试剂、配位体、催化剂；由于化学结构与活性成分类似或有渊源关系，又可称之为有关物质。 溶剂残留：来源于生产过程，一般具有已知毒性。,3.按毒性可分为： 信号杂质指本身一般无害,但其含量多少可反映药物纯度水平,指示生产工艺是否合理.如：氯化物、硫酸盐等. 毒性杂质对人体有毒害的杂质。在质量标准中严加控制,以保证用药安全.如：重金属、砷盐、氰化物等.,四、杂质的限量,在不对人体有害、不影响疗效的情况下，允许药
4、物中存在一定量的杂质。 1、杂质限量：药物中含杂质的最大允许量，用“%”或“ppm”表示。 2、杂质限量的控制法： 药物中的杂质大多不测含量，只是检查杂质是否超标，这种方法叫杂质限量检查法。多采用对照法，灵敏度法，比较法。,即：,（1）对照法：用已知杂质对照品按最大限量要求配成对照液，与供试品溶液平行试验，比较结果，判定是否杂质超标。,供试液 供试液 对照液相同条件 反应 反应下反应 比较供试液 对照液对照液 反应 反应,合格,不合格,单位：Cg/mlV mlSg,有关计算,例1：检查葡萄糖中的重金属。取葡萄糖4.0g，加水23ml溶解后，加醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml，依法检查重金属，含
5、重金属量不得过5ppm。问应取标准铅溶液多少升（每1ml相当于10g的pb）? 因为,所以，应取标准铅溶液的毫升数为：,例2: 中国药典规定检查砷盐时，应取标准砷溶液2.0ml(每1ml相当于1g的As)制备标准砷斑,今依法检查溴化钠中的砷盐,规定含砷量不得超过0.0004%。问应取供试品多少克？ 解：应取供试品的克数为：,例3： 检查磷酸可待因中的吗啡，方法为取供试品0.10g，加盐酸溶液（91000）使溶解成5 ml，加亚硝酸钠试液2 ml，放置15分钟，加氨试液3 ml，所显颜色与吗啡溶液取无水吗啡2.0 mg,加盐酸溶液（91000）使溶解成100 ml5.0 ml用同一方法制成的对照
6、液比较,不得更深。问限量为多少?,（2）灵敏度法,指在供试品溶液中加入一定量的试剂，在一定条件下，不得有正反应出现，从而判断供试品中所含杂质是否符合限度规定的方法。特点：不需对照品,指取供试品一定量依法检查，测定待检杂质的参数（如吸光度）与规定的限量比较，不得更大。 如胰岛素中蛋白激素的检查，规定用0.01mol/L的盐酸配成0.5mg/ml的供试品溶液，在276nm波长处的吸收度应为0.480.55。 特点：准确测定杂质的量，不需对照品,（3）比较法,比较法杂质限量计算,例1.某药物进行中间体杂质检查：取该药，加稀盐酸制成 每毫升含2mg的溶液，置1cm比色池中，于310nm处（杂 质有吸收
7、，药物无吸收）测吸收度，不得超过0.05。另取 中间体对照品，用相同溶剂配成每毫升含10g的溶液， 在相同条件下测得吸收度为0.435，试问该药品中间体杂质 的限量是多少？,例2.卡比马唑片（每片含卡比马唑5mg）中甲巯咪唑的检查: 取本品20片，研细，加三氯甲烷适量，研磨使卡比马唑溶解， 滤过，用三氯甲烷洗涤滤器，合并滤液与洗液，置10ml量瓶 中，加三氯甲烷稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取 甲流咪唑对照品，加三氯甲烷制成每1ml中含100g的溶液， 作为对照品溶液。分别取上述两种溶液10L，分别点于同一 硅胶G薄层板上，展开，晾干，喷以稀碘化铋钾试液显色，供 试品如显与对照品相应的杂
8、质斑点，其颜色与对照品比较， 不得更深。求杂质限量。,第二节 一般杂质检查,本节介绍： Cl- SO2- Fe3 + 信号杂质Pb2 + As有害杂质 溶液颜色有色杂质 易碳化物易碳化杂质（微量有机杂质） 澄清度不溶性杂质 炽灼残渣无机杂质（如金属氧化物和盐） 干燥失重挥发性杂质和水 有机溶剂的检查有害杂质,药品检验操作标准规定：1. 遵循平行操作原则 （1）仪器的配对性 如纳氏比色管应配对，刻度线高低相差不超过2mm，砷盐检查时导气管长度及孔的大小要一致 （2）对照品与供试品的同步操作 2. 正确的取样及供试品的称量范围 1g不超过2%，1g不超过1% 3. 正确的比色、比浊方法 4.检查结
9、果不符合规定或在限度边缘时应对供试管和对照管各复查二份。,一般杂质检查(对照法)规则,一、氯化物的检查,（一）原理,标准储备液（NaCl）供试品溶液,AgCl,目视比较混浊程度、判断是否超过限量,（二）检查方法 药典附录除另有规定外，取各药品项下规定量的供试品，加水溶解使成25ml（溶液如显碱性，可滴加硝酸使成中性），再加稀硝酸10m1；溶液如不澄清，应滤过；置50ml纳氏比色管中，加水使成约40m1，摇匀，即得供试溶液。另取各药品项下规定量的标准氯化钠溶液，置50ml纳氏比色管中，加稀硝酸10m1，加水使成40m1，摇匀，即得对照浴液。于供试溶液与对照溶液中，分别加入硝酸银试液1.0m1，用
10、水稀释使成50m1，摇匀，在暗处放置5分钟，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察，比较，即得,（三）操作,（四）测定条件 标准NaCl溶液 10gCl/ml，50ml溶液中含5080g的Cl所显浑浊梯度明显，相当于标准NaCl溶液58ml。 反应需在硝酸酸性条件下进行，且以50ml供试溶液中含稀硝酸10ml为宜。 加速AgCl浑浊的形成；产生较好的乳浊； 避免弱酸银盐如碳酸银、磷酸银以及氧化银沉淀的形成。 3. 试剂：硝酸银 4. 供试液和对照液稀释后，再加硝酸银溶液，使生成白色浑浊而不是白色沉淀 5. 避光、暗处放置5分钟后比浊，因氯化银见光易分解。 6. 比浊方法：同置于黑色背景上，自上向
11、下观察。 7. 平行操作原则,（五）干扰及排除若供试品有色，需经处理后方可检查。 （1）内消色法：倍量法，如枸橼酸铁铵中氯化物的检查。 （2）外消色法：如高锰酸钾中氯化物的检查，可先加乙醇适量，使其还原褪色后再依法检查。 (六）意义 反映药物的纯度和生产过程是否正常。,练习1. 药物中氯化物杂质检查，是使该杂质在酸性溶液中与硝酸银作用生成氯化物浑浊，所用的稀酸是（）A. 硫酸 B. 硝酸 C. 盐酸 D. 醋酸 E. 磷酸 练习2. 中国药典（2005年版）规定，检查氯化物杂质时，一般取用标准氯化钠溶液（10gCl/ml）58ml的原因是（） A. 使检查反应完全 B. 药物中含氯化物的量均在
12、此范围 C. 加速反应 D. 所产生的浊度梯度明显 E. 避免干扰,练习3. 采用硝酸银试液检查氯化物时，加入硝酸使溶液酸化的目的是（） A加速生成氯化银浑浊反应 B消除某些弱酸盐的干扰 C消除碳酸盐干扰 D消除磷酸盐干扰 E避免氧化银沉淀生成,练习4. 当采用比浊法检查氯化物杂质时，若药物本身有颜色而干扰检查的话，应该选用的处理方法为（） A内消色法 B外消色法 C比色法 D差示比浊法E差示可见分光法,练习5. 若要进行高锰酸钾中氯化物的检查，最佳方法是（） A. 加入一定量氯仿提取后测定 B. 氧瓶燃烧 C. 倍量法 D. 加入一定量乙醇 E. 以上都不对,练习6. 下列哪些条件为药物中氯
13、化物检查的必要条件（） A. 所用比色管需配套 B. 稀硝酸酸性下(10ml/50ml) C. 避光放置5分钟 D. 用硝酸银标准溶液做对照 E. 在白色背景下观察,二、硫酸盐的检查,（一）原理,硫酸盐为信号杂质，反映药物的纯度和生产过程是否正常。,（二）操作：,（三）测定条件,1. 标准K2SO4溶液0.1mg/ml，50ml溶液中含0.10.5mg的所显浑浊梯度明显，相当于标准K2SO4溶液15ml。 2. 反应需在盐酸酸性条件下进行，且以50ml供试溶液中含稀盐酸2ml为宜。（防止碳酸钡和磷酸钡的形成，但酸度过大可是硫酸钡溶解而降低灵敏度） 3. 供试液和对照液稀释后，再加氯化钡溶液，使
14、生成白色浑浊而不是白色沉淀 4. 比浊方法：同置于黑色背景上，自上向下观察。,若供试品有色，也可用内消色法即倍量法处理。例：药物中硫酸盐检查时，所用的标准对照液是（） A. 标准氯化钡 B. 标准醋酸铅溶液 C. 标准硝酸银溶液 D. 标准硫酸钾溶液 E. 以上都不对,（四）干扰及排除,（一）原理：Fe3+ + 6SCN- Fe (SCN)63-,红色,红色,供试品溶液（含Fe3+ ）,Fe 标准液（用Fe(NH4)(SO4)2配制）,硫氰酸铵,硫氰酸铵,目 视 比 色,三、铁盐检查法,药物中微量铁盐的存在可能会加速药物的氧化和降解， 因此需要控制其存在量，常用以下两种方法检查。,供试品,H2
15、O,25ml,稀HCl,4ml,过硫酸铵50mg,水到35ml,30%NH4SCN3ml,比色管中,50ml,H2O,白背景比色,标准品,4ml,H2O,25ml,稀HCl,4ml,过硫酸铵50mg,水35ml,30%NH4SCN3ml,比色管中,H2O,50ml,白背景比色,（二）操作：,（三）测定条件,（1）用FeNH4(SO4)212H2O（硫酸铁铵）配制标准铁贮备液（加入硫酸防止Fe3+的水解），标准铁溶液临用前稀释而成，标准铁溶液10g Fe3+/ml，50ml溶液中含1050g的Fe3+显色梯度明显，一般取标准铁溶液1.05.0ml （2）反应需在盐酸酸性条件下进行，且以50ml供
16、试溶液中含稀盐酸4ml为宜。,（3）试剂：硫氰酸铵。加过量硫氰酸铵，使反应向正反应方向进行 （4）检查Fe2+和Fe3+ （5）铁盐检查时，加氧化剂氧化Fe2+为Fe3+。加过硫酸铵可氧化Fe2+为Fe3+，同时可防止光线使硫氰酸铁还原或分解褪色。 （6）比色方法：同置于白色背景上，自上向下观察。,4. 干扰及排除,（2）具环状结构的有机药物，需经700800炽灼破坏处理后再依法检查。,（3）干扰离子的影响,（四） 干扰及排除,（1）为了提高灵敏度或供试管与对照管色调不 一致时，可用正丁醇提取后，分取正丁醇层比色。 （2）具环状结构的有机药物，需经700800 炽灼破坏处理后再依法检查。 （3
17、）某些药物(如葡萄糖、糊精和硫酸镁等)在检 查过程中需加硝酸处理，则不再加过硫酸铵，但必 须加热煮沸除去一氧化氮，因硝酸中可能含亚硝酸， 它能与硫氰酸根离子作用，生成红色亚硝酰硫氰化 物，影响比色。,例1. 中国药典（2005年版）规定铁盐的检查方法为（） A. 硫氰酸盐法 B. 巯基醋酸法 C. 普鲁士蓝法 D 邻二氮菲法 E. 水杨酸显色法,例2. 中国药典（2005年版）规定，硫氰酸铵法检查铁盐时，加入过硫酸铵的目的是（）A. 使药物中铁盐都转变为Fe3+B. 防止光线使硫氰酸铁还原或分解褪色C. 使产生的红色产物颜色更深D消除Cl-,SO42+,PO33-和枸橼酸根离子 等与铁盐形成配
18、位化合物而引起的干扰E便于观察、比较,例3. 中国药典收载的铁盐检查，主要是检查（） A. Fe B. Fe2+ C. Fe3+ D. Fe2+和Fe3+E. 以上都不对,四、重金属检查法,重金属：指在实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠作用显色的金属杂质。以铅为代表。 重金属影响药物的安全性和有效性。 中国药典（2000年版）共收载四法。 （一）第一法 硫代乙酰胺法 （二）第二法 炽灼残渣法 （三）第三法 硫化钠法 （四）第四法 微孔滤膜法,（一）第一法 硫代乙酰胺法,1. 原理：对照法,适用于溶于水、稀酸和乙醇的药物。,2. 测定条件,（1）用硝酸铅配制标准铅贮备液（加硝酸防止Pb2+水解），
19、标准铅溶液临用前稀释而成，标准硝酸铅溶液10g Pb2+/ml，适宜比色范围为27ml溶液中含1020g的Pb2+。 （2）本法用2ml pH3.5的醋酸盐缓冲液控制溶液pH值为33.5。 （3）显色剂：从ChP（1990）开始改用硫代乙酰胺做显色剂,（1）供试品如有色，需经处理后方可检查。 外消色法：在对照管中加稀焦糖溶液或其他无干扰的有色溶液。 B. 内消色法 C. 改用第四法，微孔滤膜过滤法,3. 干扰及排除,（2）若供试品中有微量Fe3+存在，会氧化硫化氢生成单质硫，干扰比色，加入抗坏血酸或盐酸羟胺（0.51.0g）还原Fe3+为Fe2+，可消除干扰。 （3）若药物本身能生成不溶性硫化
20、物时，可加入掩蔽剂消除干扰。如ZnSO4中重金属的检查，要在碱性下加KCN掩蔽Zn2+后，依第三法检查,（二）第二法 炽灼残渣法,适用于含芳环、杂环以及不溶于水、稀酸、乙醇及碱的有机药物。含钠及氟的有机药物应用铂坩埚（因可腐蚀瓷坩埚，带入大量重金属）,1. 原理 对照法 500600炽灼后的残渣，经处理后，依一法检查。,2. 操作方法,3.注意事项 （1）炽灼温度对重金属检查影响较大，温度越高，重金属损失越多，例如铅在700经6h炽灼，回收率仅为32；同时温度太低灰化不完全。因此，应控制炽灼温度在500600。 （2）炽灼残渣加硝酸加热处理后，使有机物进一步分解破坏完全，必须蒸干、除尽氧化氮，
21、否则亚硝酸可氧化硫化氢析出硫，影响比色。 （3）蒸干后残渣加盐酸，是使重金属成为氯化物。为了消除盐酸或其他试剂中可能夹杂重金属的影响，在配制供试品溶液时，如使用盐酸超过1ml(或与盐酸1ml相当的稀盐酸)，使用氨试液超过2ml，以及用硫酸与硝酸进行有机破坏或其他试剂处理者，除另有规定外，对照品溶液应取同样量试剂在瓷皿中蒸干后，依法检查。,（三）第三法 硫化钠法,适用于溶于碱而不溶于稀酸或在稀酸中生成沉淀的药物。如磺胺类、巴比妥类。,1. 原理 对照法,2. 测定条件 （1）NaOH碱性条件下 （2）显色剂：硫化钠 。硫化钠试液对玻璃有一定的腐蚀性，且久置后会产生絮状物，应临用新制,（四）第四法
22、 微孔滤膜法,适用于重金属限量低（ 25g ）药物及有色供试液的检查。 1.原理：使重金属生成的硫化物富集于微孔滤膜上，比较供试品和一定量的标准铅溶液同法处理后产生的色斑深浅，确定重金属是否超过限量。我国药品检验操作标准中规定，检查新产品中重金属时，应用该法。,2试验装置,3.方法,1.标准铅斑的制备：精密量取标准铅溶液一定量，用水或规定溶剂稀释成10ml，加入醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml与硫代乙酰胺试液1.0ml，摇匀，放置10min，用50ml注射器转移至滤器中滤过(滤速约1mlmin)，滤毕，取下滤膜，放在滤纸上干燥，即得。 2.另取供试溶液10ml，照标准铅斑的制备法，自“加入醋酸
23、盐缓冲液(pH35)2m1”起，依法操作，生成的铅斑与标准铅斑比较，不得更深。,例1.重金属检查中，加入硫代乙酰胺时溶液控制最佳的pH值是（B） A. 1.5 B. 3.5 C7.5 D. 9.5 E. 11.5 例2.微孔滤膜法是用来检查（C） A. 氯化物 B. 砷盐 C. 重金属 D. 硫化物 E. 氰化物,例3. 中国药典(2005年版)重金属检查法中，所使用的显色剂是（BC）A. 硫化氢试液B. 硫代乙酰胺试液C. 硫化钠试液D. 氰化钾试液E. 硫氰酸铵试液 例4 . 葡萄糖中进行重金属检查时，适宜的条件是（C）A. 用硫代乙酰胺为标准对照液B. 用10ml稀硝酸/50ml酸化C.
24、 在pH3.5醋酸盐缓冲溶液中D. 用硫化钠为试液E. 结果需在黑色背景下观察,例5. 现有一药物为苯巴比妥，欲进行重金属检查，应采用中国药典上收载的重金属检查的哪种方法（C） A. 一法 B. 二法 C. 三法 D. 四法 E. 以上都不对 例6. 下面哪些方法为中国药典收载的重金属检查方法（ACD）A. 500600炽灼残渣后,按一法操作B. pH33.5条件下，加入硫化氢试液C. 碱性下，加入硫化钠试液D. 按一法操作，结果用微孔滤膜过滤后观察色斑 E. 以上都对,（一）古蔡氏法： 1.原理：,五、砷盐的检查,Zn与盐酸作用产生新生态的氢，与药物作用生成挥发性的 砷化氢，遇溴化汞试纸，产
25、生黄色到棕色的砷斑。,2.操作：,3.标准砷溶液的制备： 称取三氧化二砷0.132g，置1000ml量瓶中，加20%的氢氧化钠溶液5ml溶解后，用适量的稀硫酸中和，再加稀硫酸10ml，用水稀释至刻度，摇匀，作为储备液。 临用前，精密量取储备液10ml，置1000ml量瓶中，加稀硫酸10ml，用水稀释至刻度，摇匀，即得。（每1ml相当于1g的As）,导管C中装有醋酸铅棉花， 旋塞D上端有HgBr2试液,A、坤化氢发生瓶B、中空磨口塞C、导气管D、具孔有机玻璃旋塞E、具孔有机玻璃塞盖,4.装置,5.注意： a、醋酸铅棉花是为了防止s2-干扰。 b、KI和SnCl2是还原剂，将As()还原为As()
26、，同时可抑制锑化氢的生成， SnCl2还能与Zn作用，在Zn粒表面形成锌锡齐，其去极化作用，使氢气均匀而连续的发生。AsO43-+2I-+2H+AsO33-+I2+H2O AsO43-+Sn2+2H+ASO33-+ Sn4+H2OI2+Sn2+2I-+ Sn4+,c、SnCl2可使Zn与HCl反应快而均匀。 d、标准砷斑不能过深过浅，中国药典规定标准砷溶液含砷1ug/ml取2ml制标准坤斑。 e、砷斑生成后应立即比色。 f、供试品若为低价态硫酸盐时，在酸性溶液中会产生硫化氢或二氧化硫，与溴化汞作用干扰检查，应先用硝酸处理，使之生成硫酸盐以排除干扰。 G、环状结构的药物，砷以共价键结合，与干法破
27、坏后检查。,含锑药物的砷盐检查-白田道夫法,原理：氯化亚锡在酸性条件下将砷盐还原为棕褐色的胶态砷，与同法处理后的标准砷溶液比色，判断药物的砷含量。,（二）二乙基二硫代氨基甲酸银法（Ag-DDC法),原理：,H3AS+6Ag（DDC）+3N(C2H5)36Ag+As(DDC)3+3(C2H5)3NHDDC,A、砷化氢发生瓶 B、中空磨口塞 C、导气 管 D平底玻璃管,Ag（DDC）法 检坤装置,操作：在试坤瓶中,六、溶液颜色检查法 目的：控制有色杂质的含量,第一法：与标准比色液比较,标准比色液的配制,第二法：分光光度法 取规定量的供试品加水溶解，取10ml透明溶液，按标准中规定波长处测吸收度，不
28、能超过标准规定值。,第三法 色差计法 全波长范围定量测色仪器一般为光电积分型色差计,七、易炭化物检查法 【目的】检查遇H2SO4易炭化或氧化而呈色的微量杂质。 【方法】在比色管中将一定量供试品中加入5mlH2SO4，溶解后静止15min，与标准中规定的比色液(5ml)比较不得更深.,对照液： （1）“溶液颜色检查”项下的标准比色液； （2）由比色用氯化钴液，比色用重铬酸钾液，比色用硫酸铜液按规定方法配成的对照液； （3）高锰酸钾液 比色：同置白色背景前，平视观察比较。,1 目的：检查药物中的微量不溶性杂质方法：按规定配制供试品溶液与等量的浊度标准液,同时置于伞棚灯下，在1000Lx比较两者的浊
29、度，应不超过标准液。 2. 浊度标准液的配制 反应原理：乌洛托品在偏酸性条件下水解产生甲醛，甲醛与肼缩合生成甲醛腙，不溶于水，形成白色浑浊。 1.00硫酸肼溶液与10乌洛托品溶液等量混合配制浊度标准 贮备液 浊度标准原液 浊度标准液（5个级号）,八、澄清度检查,稀释,稀释,3.判断 药典中规定的“澄清”，系指供试品溶液的澄清度相同于 所用溶剂，或未超过0.5号浊度标准液。,九、炽灼残渣检查法,【目的】检查混入药物中的无机杂质 【方法】,3. 注意事项,（1）供试品的取样量应根据炽灼残渣限量和称量误差决定。 （2）含氟的药物对瓷坩埚有腐蚀，应采用铂坩埚。 （3）若残渣需留作重金属检查，则5006
30、00炽灼至恒重。 （4）加硫酸处理是使杂质转化为稳定的硫酸盐，并帮助有机物炭化,十、干燥失重测定法,干燥失重：药品在规定条件下，经干燥后所减失的量，以百分率表示 检查：药物中的水分和挥发性物质 (一)常压恒温干燥法适用于受热较稳定的药物温度：105,(二)减压干燥法适用于熔点低、受热分解的药物 (三)干燥剂干燥法适用于受热易分解或升华的药物干燥剂：硅胶、硫酸、五氧化二磷 分为常压干燥剂干燥法和减压干燥剂干燥法。,（四）热重分析法（TGA）在程序升温下，测量物质的质量与温度的关系。特点：样品用量少、灵敏、快速常用于贵重和易氧化药物的干燥失重测定。,干燥失重=100%,m,S,m,十一、水分测定法
31、,1.卡尔费休法 原理： I2+ SO2 + H2O 2HI + SO3 或： I2+ SO2 + H2O +C5H5N+CH3OH C5H5N.2HI + C5H5N.HSO4CH3,费休氏液：I2、 SO2、无水甲醇、无水吡啶 终点：费休氏液：淡黄红棕色永停法,样品消耗的体积,空白消耗的体积,纯水校正获得,测定装置,2.甲苯法,适于制剂水分测定,测定法： 取供试品适量精密称定，置A瓶中，加甲苯约200ml，自冷凝管顶端加入甲苯，至充满B管的狭细部分。将A瓶置电热套中或用其它适宜方法缓缓加热，待甲苯开始沸腾时，调节温度，使每秒钟馏出2滴。馏出液甲苯和水分进入水分测定管中，水的相对密度大于甲苯
32、，沉于底部，甲苯流回A瓶中。待水分完全馏出，即测定管刻度部分的水量不再增加时，将冷凝管内部先用甲苯冲洗，再用饱蘸甲苯的长刷或其他适当方法，将管壁上附着的甲苯推下，继续蒸馏5分钟，放冷至室温，拆卸装置，如有水粘附在B管的管壁上，可用蘸甲苯的铜丝推下，放置，使水分与甲苯完全分离（可加显色剂）。检读水量，并计算供试品中含水量（%）。,十二、有机溶剂残留量测定法,主要检查药物在生产过程中引入的有害的有机溶剂常采用气相色谱法进行检查直接进样法顶空进样法（适用于挥发性大的样品测定）,第三节 特殊杂质检查,特殊杂质：在该药物的生产和贮存过程中，根据药物的性质、生产方法和工艺条件，有可能引入的杂质 方法： 利
33、用药物和杂质在物理和化学性质上的差异进行,物理：外观性状、分配或吸附、对光的吸收的差异 化学：对某一化学反应的差别,杂质与试剂反应 药物无反应,一、色谱分析法,（一）TLC 1.杂质对照品法判断结果：供试品溶液如显与对照品相应的杂质斑点，其颜色与对照品溶液主斑点比较，不得更深,特点：分离效能高，分离的同时进行测定，应用广泛,需要对照品,供试品A,对照品B,A,？,B,前沿,原点,l0,l,2.高低浓度对比法 当杂质结构不能确定、或无杂质对照品时，采用此法 要求：杂质斑点的颜色与主成分斑点颜色相同或相近,供试液,稀释,对照液,点样、展开、干燥、显色,结果判断：供试液所显杂质斑点与对照液主斑点比较
34、，不得更深,（高）,（低）,3.1法与2法并用 适用：当药物中存在多个杂质时，其中有的杂质有对照品，有的杂质没有对照品或结构未知,1.外标法测定 需要杂质对照品，进样量能够精确控制,供试液：A杂 对照液：A对 比较，A杂A对 或：,（二）高效液相色谱法(HPLC),2.内标（加校正因子）测定法需要杂质对照品,校正因子的测定 杂质对照品+内标物质测定,供试品+内标物质测定,3.加校正因子的主成分自身对照法 杂质结构确定、但杂质对照品不易获得或价格昂贵时，采用此法。 建立方法时，需要杂质对照品 杂质检查时，不需杂质对照品,杂质对照品药物对照品 f校正因子直接载入各品种质量标准中 供试液对照液：供试
35、液稀释成与L相当的溶液,分别测定,C杂,4.不加校正因子主成分对照法用于杂质结构不能确定、或无杂质对照品时，时杂质的检查。对照液：供试品的稀释液，进样测得A主供试液：进样测得杂质Ai，杂质Ai A主即为合格. 例如:样品液(1mg/ml),取1ml稀释至100ml作对照品溶液； 对照液(0.01mg/ml)进样20l,调灵敏度，使主峰达10%30%，取样品液20l进样，当杂质AiA主时，杂质限量为1.0%.,5.峰面积归一化法 适用于粗略测量杂质含量 L% = Ai /(Ai + A主）100% 例如：利巴韦林中有关杂质的检查： 对照品液(5g/ml)进样10l,调灵敏度，使主峰 达满量程的2
36、0%25% 样品液(0.4mg/ml)进样10l, 杂质Ai(Ai+A主）的1.0%,（三）气相色谱法(GC)主要用于药物中挥发性的杂质检查，其检查方 法与HPLC法相同。,利用药物和杂质对光选择性吸收性质的差异 （一）紫外分光光度法若主药在某处无吸收，而杂质有较大吸收，可通过规定杂质吸收度的方法限制杂质。 如: 中国药典（2000年版）规定肾上腺素中检查肾上腺素酮的方法为:310nm波长处测定，吸收度不得超过0.05，(已知肾上腺素酮在310nm波长处的为453，肾上腺素在该波长处无吸收),二、光谱分析法,例：,药物：地蒽酚,杂质：二羟基蒽醌,中国药典用0.01%的地蒽酚溶液控制432nm处
37、的吸光度不超过0.12,则控制杂质含量不大于2.0%。,（计算 A=ELC，0.12=4951C，C=0.0002%， ）,（二）红外分光光度法用于药物中无效或低效晶型的测定 晶型结构不同，化学键的键长、键角等发生不同 程度的变化，导致红外吸收光谱中某些特征峰的 频率、峰形、强度等出现显著差异。,利用药物和杂质在化学性质上的差异,选择合适的试剂，使之与杂质反应产生颜色、 沉淀或气体，而药物不发生反应,三、化学分析法,利用药物和杂质在物理性质上的差异,（一）臭味及挥发性的差异若存在具有特殊气味的杂质，可由气味判断 （二）颜色的差异药物无色有色杂质有色分解产物,溶液颜色检查法,四、物理分析法,（三
38、）溶解行为的差异 药物溶于水、有机溶剂、酸、碱 杂质不溶于,或反之,（四）旋光性质的差异,手性C,旋光性,比旋度/旋光度,反应药物纯度限定杂质限量,药物和杂质的比旋度差异很大,是否偏离规定范围,药物无旋光性而杂质有,是否超出限定的药物溶液的旋光度值,练习与思考,A型题,1含锑药物的砷盐检查方法为 A.古蔡法 B.碘量法 C.白田道夫法 D.Ag-DDC E.契列夫法,2药物中杂质的限量是指 A.杂质是否存在 B.杂质的合适含量 C.杂质的最低量 D.杂质检查量 E.杂质的最大允许量 3中国药典中收载的砷盐检查方法为 A.摩尔法 B.碘量法 C.白田道夫法 D.Ag-DDC E.契列夫法,B型题
39、,A。稀HNO3 B.硫代乙酰胺试液 C. BaCl2试液 D. Ag-DDC试液 E. NH4SCN试液 1. 铁盐检查 2. 硫酸盐检查 3. 氯化物检查 4. 砷盐检查,E,C,A,D,A。AgNO3试液 B.硫代乙酰胺试液 C. BaCl2试液 D. KI-SnCl2试液 E. NH4SCN试液5. 重金属检查6. 硫酸盐检查7. 氯化物检查8. 砷盐检查,B,C,A,D,X型题,1一般杂质检查包括 A。氯化物检查 B. 硫酸盐检查 C. 重金属检查 D. 砷盐检查 E. 铁盐检查,一、计算题（每题20分） 1.检查维生素C中的重金属时，若取样量为1.0g，要求含重金属不得过百万分之十
40、，问应吸取标准铅溶液（每1ml0.01mg的Pb）多少ml？ 2.检查某药物中的砷盐，取标准砷溶液2ml（每1ml相当于1g的As）制备标准砷斑，砷盐限量为0.0001，应取供试品的量为多少? 二、选择题(每题15分) 1.药物中氯化物杂质检查，是使该杂质在酸性溶液中与硝酸银作用生成氯化物浑浊，所用的稀酸是（） A. 硫酸 B. 硝酸 C. 盐酸 D. 醋酸 E. 磷酸,2.采用硝酸银试液检查氯化物时，加入硝酸使溶液酸化的目的是（ABCDE）A加速生成氯化银浑浊反应；B消除某些弱酸盐的干扰；C消除碳酸盐干扰；D消除磷酸盐干扰；E避免氧化银沉淀生成 3.下列哪些条件为药物中氯化物检查的必要条件（
41、） A. 所用比色管需配套；B. 稀硝酸酸性下(10ml/50ml)；C. 避光放置5分钟；D. 用硝酸银标准溶液做对照；E. 在白色背景下观察 4.中国药典（2000年版）规定，硫氰酸铵法检查铁盐时，加入过硫酸按的目的是（） A.使药物中铁盐都转变为Fe3+；B. 防止光线使硫氰酸铁还原或分解褪色；C. 使产生的红色产物颜色更深；D防止干扰；E便于观察、比较,5.下面哪些方法为中国药典收载的重金属检查方法（） A.500600炽灼残渣后,按一法操作；B. pH33.5条件下，加入硫化氢试液；C.碱性下，加入硫化钠试液；D. 按一法操作，结果用微孔滤膜过滤后观察色斑;E.以上都对 6.葡萄糖中
42、进行重金属检查时，适宜的条件是（） A. 用硫代乙酰胺为标准对照液；B. 用10ml稀硝酸/50ml酸化；C. 在pH3.5醋酸盐缓冲溶液中；D. 用硫化钠为试液；E. 结果需在黑色背景下观察 7.古蔡氏法中，SnC12的作用有（） 使As5+As3+ ；B. 除去H2S；C. 除去I2；D. 组成锌锡齐；E. 除去其它杂质 8.干燥失重测定中应注意哪几个方面（） A. 供试品平铺在称量瓶中的厚度一般不超过5mm; B. 干燥温度一般为105; C. 可用干燥剂干燥; D. 主要指水分和挥发性物质 E. 测定时间不超过3小时,9.古蔡氏法检查下列药物中的砷盐时，排除干扰的方法：A.先用硝酸或溴水氧化；B.先加酸性氯化亚锑还原；C.改用白田道夫法;D. 先加氰化钾掩蔽；E.先加草酸生成沉淀 （1）硫化物（） （2）亚硫酸盐（） （3）硫代硫酸盐（） （4）高铁盐（） （5）锑盐（） 10.杂质检查中所用的酸是 A.稀硝酸 B.稀盐酸 C.硝酸 D.盐酸 E.醋酸盐缓冲液 （1）氯化物检查法（） （2）硫酸盐检查法（） （3）铁盐检查（） （4）重金属检查法（） （5）砷盐检查法（） 11. A干燥失重测定法 B炽灼残渣检查 C两者皆是 D两者皆不是 （1）不溶物的测定法（） （2）杂质检查法（） （3）有机药物中不挥发无机物的检测法( ) （5）药物中挥发性物质的检测法（）,
