1、紫外分光光度法测定维生素 B1 片的含量维生素 B1 及其制剂及其制剂常采用的方法有非水滴定法，紫外分光光度法和硫色素荧光法。中国药典用非水溶液滴定法测定原料药，片剂和注射剂采用紫外分光光度法，USP 采用硫色素荧光法。采用非水溶液滴定法可能受到氢卤酸盐的干扰，对操作人员要求较高，采用硫色素滴定法不受氧化破坏产物的干扰，测定准确但操作繁琐，且荧光测定受干扰因素较多，本实验采用紫外分光光度法进行含量测定。1 实验装置及试剂1.1 仪器 BS210S 型天平，UV751GD 型紫外/可见分光光度计。1.2 实验材料 维生素 B1 片（来源：成都第一制药，规格：1-00 片*10mg，批号：0612
2、04） ，维生素 B1 标准品（分析纯） ，维生素 B1 对照品（200ug/ml，2.0mg/ml） ，维生素B1 标准溶液（0.250mg/ml） ，空白辅料，盐酸溶液（91000） 。2 实验方法处方分析：组成 处方量(g) 比例(%)维生素 B1 10 16.39淀粉 20 32.78糊精 30 49.18硬脂酸镁 1.0 1.639生产 1000 片根据处方量分析，维生素 B1 含 16.39%，辅料含 83.61%。平均片重约 61mg，取相当于25mg 维生素 B1 的片粉约 0.15g。1、测定方法：取供试品 20 片，精密称定，研细，称取片粉适量（约相当于维生素 B125mg
3、） ，置100ml 量瓶中，加盐酸溶液（91000）约 70ml，振摇 15min 使维生素 B1 溶解，再加盐酸溶液（91000）稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液 5ml，置另一 100ml量瓶中，加盐酸溶液（91000）稀释至刻度，摇匀，照分光光度法，在 246nm 的波长处测定吸收度，按 C12H17ClN4OS.HCl 的吸收系数（ ）为 421 计算，即得。1%cmE2、方法验证2.1.线性和范围精密称取维生素 B1对照品约 25mg，置 100 ml 量瓶中，加盐酸溶液（91000）溶解并稀释至刻度，制备成含维生素 B1 250g/ml 的对照溶液。分别精密量取该溶
4、液3、4、5、6、7ml 置 100ml 量瓶中，加盐酸溶液（91000）稀释至刻度，摇匀，即得系列浓度的对照品溶液，照分光光度法，在 246nm 的波长处测定吸收度，以吸收度（A）对浓度（C）回归处理，得标准曲线和回归方程。2.2. 回收试验（准确度试验）对照品溶液的制备：对照品溶液的制备，同 2.1 项下。供试品溶液的制备：精密称取维生素 B1精制原料约 0.25g，置 50ml 量瓶中，加入盐酸溶液（ 91000 ）稀释至刻度，摇匀，制成 5.0mg/m 维生素 B1溶液储备液；分别精密量取该溶液 4、5、 6ml 置已加入比例量辅料（ 0.15g，1/100 天平）的 100ml 量瓶
5、中（一式三份） ，加 盐酸溶液（91000）约 70ml，振摇使之溶解，再加盐酸溶液（91000）稀释至刻度，滤过，精密量取续滤液 5ml，置另一 100ml 量瓶中，摇匀，得高、中、低三种浓度的试验溶液，照分光光度法，在 246nm 的波长处测定吸收度，用对照品比较法计算含量。2.3、精密度试验取供试品 20 片，精密称定，研细，称取片粉适量（约相当于维生素 B125mg） ，一式 5份，置 100ml 量瓶中，加盐酸溶液（91000）适量，振摇 15min，再加盐酸溶液（91000）稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液 5ml，置另一 100ml 量瓶中，加盐酸溶液（91000）稀释至刻
6、度，摇匀，即得约含维生素 B112.5ug/ml 的供试品溶液。另取维生素 B1对照品适量，用盐酸溶液（91000）稀释制成 12.5g/ml 的对照品溶液。照分光光度法（ChP2005 二部附录 IVA）在 246nm 处分别测定供试品溶液和对照品溶液的吸光度，用百分吸光度和对照品比较法分别进行计算，即得。表 1 维生素 B1 标准曲线的制备编号 1 2 3 4 5对照液浓度 7.50 10.00 12.50 15.00 17.50（ug/ml ）吸光度 A 0.312 0.391 0.480 0.559 0.640图 2 维生素 B1 标准曲线图由图 2 可得，采用此法进行维生素 B1 含
7、量的测定，在浓度为 8.00-16.00ug/ml范围内线性关系较好（R=0.9997） 。表 2 维生素 B1 片回收率实验结果编号加入量（mg）对照液浓度（ug/ml ）吸光度 A测得对照液浓度（ug/ml ）回收率（%）1 10.00 10.00 0.370 9.26 92.62 10.00 10.00 0.370 9.26 92.63 10.00 10.00 0.370 9.26 92.64 12.50 12.50 0.455 11.84 94.75 12.50 12.50 0.456 11.87 95.06 12.50 12.50 0.455 11.84 94.77 15.00 15
8、.00 0.539 14.38 95.98 15.00 15.00 0.539 14.38 95.99 15.00 15.00 0.541 14.44 96.31 2 3 X RSD RSD高 95.9% 95.9% 96.3% 96% 0.24%中 94.7% 95.0% 94.7% 94.8% 0.18%低 92.6% 92.6% 92.6% 92.6% 01.6%回收率平均值(%)=94.48%RSD=1.6%由表 2 可得，采用此法进行维生素 B1 含量的测定，加入量在 10.00-15.00mg 范围内，对照液浓度在 10.00-15.00ug/ml 范围内时，回收率较高。表 3 维
9、生素 B1 片精密度考察实验结果编号 加入片粉量（ g）吸光度A浓度（ ug/ml）百分吸光度法（ %）对照品比较法（%） 标准曲线%1 0.1724 0.431 12.57 81.44 95.88 88.382 0.1730 0.427 12.61 80.43 94.69 87.143 0.1723 0.428 12.61 80.62 94.91 87.384 0.1716 0.425 12.51 80.70 95.00 87.355 0.1723 0.433 12.56 81.89 96.40 89.03对照品0.447 12.50当 m=0.1715g 维 B1 浓度 12.50ug/mlRSD1（百分吸光度法）=0.8%RSD2（对照品比较法）=0.8%RSD3（标准曲线法）=0.9%表 4 维生素 B1 片含量测定结果测定方法 含量为标示量的百分数范围 含量为标示量的百分数均值百分吸光度法 84.43%-81.89% 81.02%对照品比较法标准曲线法94.69%-96.40%87.14%-89.03%95.38%87.86%百分吸光度法：含量不符合规定标准。对照品比较法：含量符合规定标准。标准曲线法：含量符合规定标准。高效液相色谱法测定维生素 B1 的含量
