1、Comment U1: 有机药物Comment U2: 紫外可见分光光度法测定维生素 B12含量作者:作者：靳月琴 郭丽敏 宋建荣 杨金香 刘海林 陈文斌 作者单位：长治医学院化学综合实验室(046000) 【摘要】 目的：探讨维生素 B12片剂中维生素 B12的含量测定方法。方法：紫外可见分光光度法。样品以标准曲线法为测定含量依据，在 361 nm的波长处测定吸光度。结果：维生素 B12在 5 g/mL100 g/mL 浓度范围线性关系良好。回归方程Y=0.0193X+0.048,r=0.9937。结论：测定的 5个不同批号样品其含量均在标示范围之内,该方法简便、准确、灵敏度高。 【关键词】
2、 紫外可见分光光度法；维生素 B12片剂；含量测定The Content Measurement of V-B12 by UV-VisJin Yueqin,Guo Limin，Shong Jianrong,et al.Department of Chemistry Complex Laboratory of Changzhi Medical CollegeAbstract Objective：The measurement method of V-B12 content in tablet is established.Methods：UV-Vis The absorption is meas
3、ured at 361 nm according to calibration carve method.Results：The linear range is in 5 g/mL100 g/mL and the regression equation is Y=0.0193X+0.048,r=0.9937.Conclusion：The measurement is done in 5 kind of lot number and the result indicate that the V-B12 content in tablet corresponds with standard ran
4、ge. This method is simple, accurate and high sensitivity.Key words UV-Vis；V-B12 tablet；Content measurement维生素 B12是含钴的有机药物，为深红色结晶，又称为红色维生素 B12或氰钴胺，是唯一含有主要矿物质的维生素。测定维生素 B12片剂含量的传统方法是运用紫外可见分光光度计，以吸光系数法为测定含量依据，但是该方法对仪器精密度要求较高。标准曲线法是紫外可见分光光度法中最经典的方法，若认定一台仪器，固定其工作状态和测定条件，则该方法可消除因仪器而产生的一些误差，且操作简便易行1。本文利用紫外
5、可见分光光度计，建立了维生素 B12片剂含量测定的标准曲线法，并利用该方法对山西亨瑞达制药有限公司生产的维生素 B12片剂的 5个不同批号进行了 V-B12的含量测定，方法准确、简便、重复性好。1 仪器与试药1.1 仪器754 型紫外可见分光光度计（上海光谱仪器有限公司）。1.2 试药维生素 B12 对照品（中国药品生物制品检定所）；维生素 B12 片剂（山西亨瑞达制药有限公司，批号 060801，060701，061002，060902，070303）。0.8 滤膜AUTOMATIC SCIENCE（TIANJIN） INSTRUMENT CO；LTD。2 方法与结果2.1 测定波长的选择维
6、生素 B12 吸收光谱上有三个吸收峰：278 nm、361 nm、550 nm。维生素 B12 在361 nm 的吸收峰干扰因素少，吸收又最强，中国药典规定以 361 nm 处吸收峰的比吸光系数 E1%1 cm 值（207）为计算含量依据2。本实验选择 361 nm 为测定波长，以标准曲线法为计算含量依据。2.2 溶液的制备2.2.1 对照品溶液的制备3：精密称定对照品维生素 B12 0.0025 g，置于 25 mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀。将溶解后的溶液放置冰箱中冷藏备用。2.2.2 供试品溶液的制备：维生素 B12 片剂为糖衣片，取本品 50 片，除去糖衣，使其呈现粉红色，研细，精密称
7、定研磨样品，约相当于维生素 B12 1.25 mg(每片的标示量为25.0 g),置 50 mL 容量瓶中，加水 35 mL，充分振摇 30 min 使其溶解，加水稀释至刻度，密塞，再用力振摇 10 min，静置，取上清液，用 0.8 m 的微孔滤膜滤过，滤液放置冰箱中冷藏备用。2.3 线性关系标准曲线的绘制：精取 2.2.1 项下的储备液，用水分别按1.5、2、4、6、8、10、15、20 倍稀释，摇匀。在 361 nm 波长处测定吸光度，结果见表1。表 1 100 g/mL 标准品稀释倍数测定结果（略）以吸光度 A 与质量浓度 c 绘制标准曲线，得回归方程 Y=0.0193X+0.048,
8、r=0.9937。结果表明维生素 B12 对照品溶液在 5.00 g/mL100.00 g/mL 范围内质量浓度与吸收程度呈良好的线性关系。见图 1。2.4 精密度试验精取浓度为 100 g/mL 的对照品溶液在 361 nm 连续测定 5 次，测得维生素 B12 的平均吸光度为 2.087，RSD 为 0.7%（n=5）。RSD 数值较小，说明该方法精密度好。2.5 稳定性试验取同一供试品溶液，在冰箱中冷藏 2 h、4 h、8 h、12 h、24 h 后，按 2.7 项下含量测定法测定，结果见表 2，计算得平均吸光度为 0.468，RSD 为 0.99%（n=5）。结果表明供试品溶液在冷藏温
9、度下 24 h 内基本稳定。表 2 供试品溶液冷藏温度下 24 h 内测定值（略）2.6 重复性试验精取同一批号样品，分别按 2.2.2 项的方法制备一式 5 份的供试品溶液，按 2.7 项下含量测定法测定，计算得维生素 B12 的平均含量为 22.6 g/mL（批号为 070303），RSD为 1.08%（n=5），说明该方法有较好的重复性。2.7 含量测定以水为空白，取 2.2.2 项下的滤液，摇匀，设定吸收波长为 361 nm 测定吸光度，按标准曲线法为计算含量依据。结果见表 3。表 3 维生素 B12 片剂含量测定结果（略）维生素 B12 片剂的标示量为 25.0 g，由以上测定结果可
10、知，山西亨瑞达制药有限公司生产的维生素 B12 片剂含量均在标示范围 90.0%110.0%之内。RSD 较小，说明该厂生产的药品含量稳定。3 讨论3.1. 维生素 B12 主要来源是动物性食物，存在于动物肝脏、牛肉、猪肉、蛋、牛奶和奶酪中。在吸收时需与钙结合才能有利于人体的机能活动。维生素 B12 能促进红血球的形成和再生，防止贫血；促进儿童发育，增进食欲；增强体力；维持神经系统的正常功能；促使注意力集中，增强记忆力与平衡感。能使脂肪、碳水化合物、蛋白质适宜地为体内所利用。维生素 B12 为细胞分裂和维持神经组织髓鞘完整所必须。主要用于治疗恶性贫血，与叶酸合用治疗因抗叶酸药、脂肪泻等引起的巨
11、幼红细胞性贫血。也用于多发性神经炎、肝炎、肝硬化、白细胞减少症等的辅助治疗，目前疗效有争议。口服维生素B12 仅用于已证实维生素 B12 吸收正常的营养性维生素 B12 缺乏。3.2 本实验采取紫外可见分光光度法考察了片剂维生素 B12 的含量，将对照品按不同比例用水稀释，在 361 nm 波长处进行紫外可见吸收测定，得到标准曲线。将维生素 B12 片剂研磨，精密称定并加水溶解，利用微孔滤膜过滤得到滤液，作为供试品溶液。利用该方法得到的样品溶液，按中国药典规定波长 361 nm 测定吸光度，以标准曲线法为测定含量依据，结果表明，经紫外可见吸收测定，所测片剂含量均在标示范围之内。3.3 本实验需
12、避光操作。维生素 B12 片剂为糖衣片，呈水溶性，除去糖衣时要刮净，研细，减小干扰，使溶解度增高。3.4 因紫外可见分光光度法所需样品量少，本实验采用注射器过滤器进行过滤，得到供试品溶液。3.5 本方法简便、准确、灵敏度高，可作为测定维生素 B12 片剂含量的方法。【参考文献】 李发美.分析化学.第 5 版.北京：人民卫生出版社，2003，6：210. 中国药典 2005 年版.二部.北京：化学工业出版社，2005：668669. 李发美.分析化学实验指导.北京：人民卫生出版社，2004：9899. 杨宝峰，苏定冯.药理学.第 6 版.北京：人民卫生出版社，2003，7：303304. 徐叔云.中华临床药物学.下册.人民卫生出版社，2003，5：1 141. 陆晓和.实用临床用药监护.北京：人民卫生出版社，2003，10：384.
