1、肝泰片质量标准研究【摘要】 目的建立肝泰片质量标准。方法对珠子草、甘草进行薄层鉴别研究，并用高效液相色谱（HPLC）法测定制剂中没食子酸的含量。结果薄层图谱斑点清晰，阴性对照无干扰。没食子酸在4.1641.6g 浓度范围内与峰面积呈线性关系，平均回收率 为100.31%，RSD 为 0.69%（n=5）。结论结果准确，重复性好，可用于该制剂的质量控制。 【关键词】 肝泰片 质量标准 没食子酸 高效液相色谱肝泰片是由珠子草、黄芪、甘草等几味中药组成的复方制剂，具有舒肝利胆，清热解毒，扶正祛邪之功效， 临床上用于乙型和丙型肝炎的治疗，取得了较好的疗效。为了增强对其质量的可控性，我们制订了对方中珠子
2、草、甘草薄层鉴别方法，并采用 HPLC 法对珠子草所含没食子酸进行了含量测定。实验结果表明，本方法简便，专属性强，重复性好，可有效控制该制剂的质量。1 仪器与试药岛津 LC-10AVP 高效液相色 谱仪（包括 SPD-10AVP 二极管阵列检测器，LC-10AT 二元泵）；FA2004N 电子天平（上海精密科学仪器有限公司）；珠子草、甘草对照药材（中国药品生物制品检定所）；没食子酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号：0831-9501 ）；肝泰片（我院自制制剂，批号 20050201，20050412，20050608）；硅胶 G 薄层板(青岛海洋化工厂)；CQX25-12 超声波清洗器（上
3、海必能信超声有限公司）；甲醇（色谱纯），重蒸水，其它试剂均为分析纯。2 方法与结果2.1 珠子草的薄层鉴别 取本品内容物约 1 g，加甲醇 10 ml，超声处理 10 min，过滤， 滤液作为供试品溶液。另取珠子草对照药材 0.5 g，加甲醇 10 ml，如上法操作， 滤液作为对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2005 年版部附录）试验，吸取上述溶液各 5 l，分别点于硅胶 G 薄层板上，以环已烷氯仿醋酸乙 酯(205 5)上行展开、取出、挥干溶剂，喷 10硫酸乙醇溶液，105烘 5 min，日光下检视，样品供试液色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上有相同颜色的斑点,见图 1。阴性对照液无干
4、扰。2.2 甘草的薄层鉴别 取本品内容物约 1 g，加稀乙醇 10 ml，超声提取 15 min，滤过， 滤液蒸干，残渣加乙醇 1 ml 使溶解，作为供试品溶液。另取甘草对照药材 0.2 g，同法制成 对照药材溶液，照薄层色谱法（中国药典2005 年版部附录）试验，吸取上述两种溶液各 5 l，分别点于同一硅胶 G 薄层板上，以甲苯 -醋酸乙酯- 冰醋酸（1240.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 10%硫酸乙醇溶液，在105加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点,见图 2。阴性对照液无干扰。2.3 珠子草中没食子酸的含量测定2.3.1 色 谱条件
5、ODS C18 分析柱（250 mm4.6 mm，5 m）； 检测波长:270 nm；流动相:A 甲醇，B 0.1%磷酸水溶液，梯度洗脱条件：015 min，A-B（10:90），1517 min，A-B（90:10），1735 min，A-B（10:90）；流速 1.0 mlmin-1； 柱温室温；进样量 20l。理论塔板数按没食子酸对照品计算大于 5 000。2.3.2 供 试品溶液的制 备 取本品 30 片，除去包衣，研细，精密称定，求得平均装量后，混匀，精密称取内容物适量（约 500 mg），置 25 ml 容量瓶中，加入 30%甲醇溶液约 25 ml，称定重量，加热回流 2 h，放冷
6、，用 30%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过 ，取续滤液再经 0.45 m 微孔滤膜 过滤后，即得。2.3.3 对照品溶液的制备 精密称取减压干燥至恒重的没食子酸对照品，加 30%甲醇制成 41.6 gml-1 的对照品溶液。2.3.4 阴性对照溶液的制备 取不含珠子草的阴性样品,按供试品溶液制备方法制得阴性对照溶液。精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性对照液各 20 l，分 别注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定，结果阴性对对照在没食子酸相应的保留时间处无干扰，色谱图见图3。1.没食子酸对照品 2.阴性对照品 3.肝泰片样品图 3 高效液相色谱图2.3.5 线性关系的考察 分别精密吸取上述没
7、食子酸对照品溶液0.1， 0.2， 0.25，0.5，0.75，1.0 ml ，分别置 25 ml 容量瓶中，用 30%甲醇稀释至刻度，摇匀，各进样 20 l，依次注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积积分值，以峰面积积分值为纵坐标，对照品进样量（g）为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程 Y=62 059.84X-35 650.77，r=0.999 9(n=6），结果表明没食子酸在 4.1641.6 g 浓度范围内与峰面积呈良好线性关系。2.3.6 稳定性实验 取供试品溶液，分 别于配制后 0，2，4，8，12 h，依样品测定法测定，结果其峰面积积分值的 RSD=0.90%，可见供试品溶液
8、在 12 h 内基本稳定。2.3.7 精密度实验 精密吸取“2.3” 项下对照品溶液 20 l，重复进样5 次，测定其峰面积的 RSD=0.60%。2.3.8 重复性实验 取同一批号肝泰片，平行制备 5 份样品，按样品测定法测定，结果每片含没食子酸平均值为 3.812 4 mg(RSD=0.65%，n=5)。2.3.9 加样回收率实验 精密称取已知含量的同一批 样品 0.1 g,精确加入没食子酸对照品溶液适量(2.33 gml-1),按样品溶液的制备方法操作,测定其含量,并计算平均回收率为 100.31%，RSD=0.69%(n=5)。2.3.10 样品测定 按样品测定方法测定 3 批样品，测
9、定结果见表1。表 1 样品含量测定结果3 讨论3.1 提取条件的选择 为了选择样品的提取方法，本实验曾采取浸渍、超声法与加热回流法，结果表明以加热回流法提取的供品溶液没食子酸峰的峰面积较稳定，重现性较好。本实验对加热回流时间的进行了比较，样品在分别加热回流 0.5，1，2 h，在同样条件下测定，结果加热回流 2h 的峰面积最大，故选择加热回流的时间为 2 h。3.2 流动相的选择 本实验选用 ODS 分析柱，曾用醋酸-水（2:98）、甲醇-0.005% 磷酸溶液（2:98）、甲醇-0.025%磷酸溶液（ 15:85）、甲醇-0.008%磷酸溶液（5:95）、甲醇-0.01%磷酸溶液（10:90）、甲醇- 水-磷酸（4:96:0.5）、甲醇 -水-磷酸（20:80:0.5 ）、甲醇-水（77:23）、甲醇-水（70:30）、甲醇-水（60:40）进行试验，结果以甲醇-0.1% 磷酸水溶液作为流动相梯度洗脱，其分离效果最好，色谱峰形对称。在梯度洗脱时，经过多次摸索，以梯度洗脱法在 32 min 内可使全部色谱峰流出，且达到基线分离。
