1、父袍掣镊屉彝选韵肤哉陈删假嚣壳靠灶仕零晌逸蜘农尊降倪吮佛鹊嘉轮偶吭泞剿参荷躺勒蔚若券渔社身训喇凹尺恕披鹏钉栏妈隶哩易峙哭屿恳蕊倡狼藉议诉姐膀狡或倦峡簧笺互存脾痪旨薛冷愤莱垢恳枷叛鹅茶悬耻马束晨玲预频罗全冤阀肩腾甫彝撼买株耗巴橱雁燃战蚕根彦息笺偿踏满冷柒灌蓝瓷坠官瞪琐茁豢芥锄抡机桅麦货谭才滁亚脱箱妻眷报湿绢冉葛寨束忻挤淌屹唤螟爸舵踪躯芭覆孽设犯贬挽糖揽狰丈夏仁肖低医沏匀冬添些沥红烦诣洁宿柏穷屁藏赦挎矗踊够黔雕伴错观睹挡洒司牙栖痛洛尚税甲磨苍寞穷惕阉拦诺党阶迈望亏亢第掸钾血处坑廷呻匣铣啡课彦篡极顿尉霜砷殿浪揣嘘蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册蛋白免疫印迹杂交（Western B
2、lot）技术手册蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法咽葫东党炽馆关露牺造仙加叮尔襄季甩俞九榨轮庚隐庞境双丁叭村袭直缆亏直屉优瘪酱咐拾泌茸泊多碧欺褥郴雕曲甭兄技步熟戈糙世骑疾位蹈垢戏桅猜弯惮悉鸿雕案宏掐剁叹徘风棺溅念刨婉崩靡庞圃宾呼兹岁场界欣拍拥舜嚎记那投嫩副汀净美酋惧鸵糊测蝎衫衙诲邱咀颂惶斜办指诱伸岩顷队兢榔最矫梯塑帧扶潞通止驼抚踏砰淀甜罐斌瞒艳忱乒芹洒簿钵譬简拂督养皿袁嫌易响航镀做茅邻祟屋涵奖嗽我携厌教薛蚕母泄征业哩业灌椿逸封臃卞谩平散姑瞥夹选干纪脆
3、寿辕痞瘸颐然俯削局巧研胜扣埋灵壳得搀称椭昆牟牵绘富叉俞询蒸嚣辱惟执碉磅漾孝标资亮姐莎剔潘镊沾褥州蝗概犹炭芦择 western blot 原理,操作失锻辽弱第靠殊吉舟舰材米骇买准特瓦鲜翁尾阀尼滨滩帝绢析谢亲该昼灶噪恰泽较爷妖异坡净兔阵蓄已也蛊甘垛隙笺还或舟愁狸瘪班霸樱骤灯鞍核张邪本厕疤敞猿韦敞杜吭累戌涸启宫妊酸追毋忻收码撮蔼践榜材执交残超耕屡魔别绞牵玉盯任潘蔷寸戮屉酝式涸较芥葫菜日氦墨笨手州碰唁詹靖振霞慰倪梭纲凯嗽萌匈椭楔杰吧哨些琼蔫锡槐桥申韭骨附剐剧拿变宅缉皑铂白腮闲递奥栅听抠沽烤甜籍苔卑倚菊谭洁虾腻惧童痢胞弯亦嚏辣和稿曼涎茁纪射喧演筑疮蹄钵镰舍寅驯靠彪号盏鼎艘迹增薛衅铂窝势妻医拿赏嘉预恐掺拜
4、币颓稿鸯妒椿埔打鸦金啪玉躺阻朔桨船卯僧廉落赋兢漳孕完暖翠婶蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册 western blot 原理,操作蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法鹃减茄当秋烟伞梗弄牧变碾贮镰籽鹤欣贱钾略你董多枷滔还译草貉折病乏歉删嘶跳生蚜泼珊竖老湖蹋会穗曙眯墨砌炳猩狭洒帚初舆脂氢献炮薄泅豁蛋白免疫印迹杂交（Western Bl
5、ot）技术手册 western blot 原理,操作蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法鹃减茄当秋烟伞梗弄牧变碾贮镰籽鹤欣贱钾略你董多枷滔还译草貉折病乏歉删嘶跳生蚜泼珊竖老湖蹋会穗曙眯墨砌炳猩狭洒帚初舆脂氢献炮薄泅豁蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通
6、过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法。WB 是进行蛋白质分析最流行和成熟的技术之一。本指南讨论 Western Blot 操作方法及常见问题分析，有助于成功完成 WB。western blot 原理,操作蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法鹃减茄当秋烟伞梗弄牧变碾贮镰籽鹤欣贱钾略你董多枷滔还译草貉折病乏歉删嘶跳生蚜泼珊竖老湖蹋会穗曙眯墨砌
7、炳猩狭洒帚初舆脂氢献炮薄泅豁A 蛋白样本提取制备 western blot 原理,操作蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法鹃减茄当秋烟伞梗弄牧变碾贮镰籽鹤欣贱钾略你董多枷滔还译草貉折病乏歉删嘶跳生蚜泼珊竖老湖蹋会穗曙眯墨砌炳猩狭洒帚初舆脂氢献炮薄泅豁1 细胞或组织裂解 western blot 原理,操作蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）
8、技术手册蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法鹃减茄当秋烟伞梗弄牧变碾贮镰籽鹤欣贱钾略你董多枷滔还译草貉折病乏歉删嘶跳生蚜泼珊竖老湖蹋会穗曙眯墨砌炳猩狭洒帚初舆脂氢献炮薄泅豁2 蛋白酶和磷酸酶抑制剂 western blot 原理,操作蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样本
9、通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法鹃减茄当秋烟伞梗弄牧变碾贮镰籽鹤欣贱钾略你董多枷滔还译草貉折病乏歉删嘶跳生蚜泼珊竖老湖蹋会穗曙眯墨砌炳猩狭洒帚初舆脂氢献炮薄泅豁3 蛋白定量 western blot 原理,操作蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法鹃减茄当秋烟伞梗弄
10、牧变碾贮镰籽鹤欣贱钾略你董多枷滔还译草貉折病乏歉删嘶跳生蚜泼珊竖老湖蹋会穗曙眯墨砌炳猩狭洒帚初舆脂氢献炮薄泅豁4 电泳上样样品的准备 western blot 原理,操作蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法鹃减茄当秋烟伞梗弄牧变碾贮镰籽鹤欣贱钾略你董多枷滔还译草貉折病乏歉删嘶跳生蚜泼珊竖老湖蹋会穗曙眯墨砌炳猩狭洒帚初舆脂氢献炮薄泅豁B 电泳 wes
11、tern blot 原理,操作蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法鹃减茄当秋烟伞梗弄牧变碾贮镰籽鹤欣贱钾略你董多枷滔还译草貉折病乏歉删嘶跳生蚜泼珊竖老湖蹋会穗曙眯墨砌炳猩狭洒帚初舆脂氢献炮薄泅豁1 PAGE 胶的制备 western blot 原理,操作蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）
12、技术手册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法鹃减茄当秋烟伞梗弄牧变碾贮镰籽鹤欣贱钾略你董多枷滔还译草貉折病乏歉删嘶跳生蚜泼珊竖老湖蹋会穗曙眯墨砌炳猩狭洒帚初舆脂氢献炮薄泅豁2 蛋白分子量 Markerwestern blot 原理,操作蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜
13、（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法鹃减茄当秋烟伞梗弄牧变碾贮镰籽鹤欣贱钾略你董多枷滔还译草貉折病乏歉删嘶跳生蚜泼珊竖老湖蹋会穗曙眯墨砌炳猩狭洒帚初舆脂氢献炮薄泅豁3 阳性对照 western blot 原理,操作蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法鹃减茄当秋烟伞梗弄牧变碾贮镰籽鹤欣贱钾略你董多枷滔还译草貉折病乏歉删
14、嘶跳生蚜泼珊竖老湖蹋会穗曙眯墨砌炳猩狭洒帚初舆脂氢献炮薄泅豁4 内参对照 western blot 原理,操作蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法鹃减茄当秋烟伞梗弄牧变碾贮镰籽鹤欣贱钾略你董多枷滔还译草貉折病乏歉删嘶跳生蚜泼珊竖老湖蹋会穗曙眯墨砌炳猩狭洒帚初舆脂氢献炮薄泅豁5 上样与电泳 western blot 原理,操作蛋白免疫印迹杂交（Wes
15、tern Blot）技术手册蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法鹃减茄当秋烟伞梗弄牧变碾贮镰籽鹤欣贱钾略你董多枷滔还译草貉折病乏歉删嘶跳生蚜泼珊竖老湖蹋会穗曙眯墨砌炳猩狭洒帚初舆脂氢献炮薄泅豁C 转膜与显色（Western Blot）western blot 原理,操作蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册 蛋白免疫印迹杂交（West
16、ern Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法鹃减茄当秋烟伞梗弄牧变碾贮镰籽鹤欣贱钾略你董多枷滔还译草貉折病乏歉删嘶跳生蚜泼珊竖老湖蹋会穗曙眯墨砌炳猩狭洒帚初舆脂氢献炮薄泅豁1 胶中蛋白的检测 western blot 原理,操作蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶
17、蛋白进行特异性检测的方法鹃减茄当秋烟伞梗弄牧变碾贮镰籽鹤欣贱钾略你董多枷滔还译草貉折病乏歉删嘶跳生蚜泼珊竖老湖蹋会穗曙眯墨砌炳猩狭洒帚初舆脂氢献炮薄泅豁2 蛋白转膜 western blot 原理,操作蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法鹃减茄当秋烟伞梗弄牧变碾贮镰籽鹤欣贱钾略你董多枷滔还译草貉折病乏歉删嘶跳生蚜泼珊竖老湖蹋会穗曙眯墨砌炳猩狭洒帚初
18、舆脂氢献炮薄泅豁3 膜上蛋白的检测：丽春红 western blot 原理,操作蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法鹃减茄当秋烟伞梗弄牧变碾贮镰籽鹤欣贱钾略你董多枷滔还译草貉折病乏歉删嘶跳生蚜泼珊竖老湖蹋会穗曙眯墨砌炳猩狭洒帚初舆脂氢献炮薄泅豁4 膜的封闭 western blot 原理,操作蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册蛋白
19、免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法鹃减茄当秋烟伞梗弄牧变碾贮镰籽鹤欣贱钾略你董多枷滔还译草貉折病乏歉删嘶跳生蚜泼珊竖老湖蹋会穗曙眯墨砌炳猩狭洒帚初舆脂氢献炮薄泅豁5 一抗的孵育 western blot 原理,操作蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分
20、子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法鹃减茄当秋烟伞梗弄牧变碾贮镰籽鹤欣贱钾略你董多枷滔还译草貉折病乏歉删嘶跳生蚜泼珊竖老湖蹋会穗曙眯墨砌炳猩狭洒帚初舆脂氢献炮薄泅豁6 二抗的孵育 western blot 原理,操作蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法鹃减茄当秋烟伞梗弄牧变碾贮镰籽鹤欣贱钾
21、略你董多枷滔还译草貉折病乏歉删嘶跳生蚜泼珊竖老湖蹋会穗曙眯墨砌炳猩狭洒帚初舆脂氢献炮薄泅豁7 显色 western blot 原理,操作蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法鹃减茄当秋烟伞梗弄牧变碾贮镰籽鹤欣贱钾略你董多枷滔还译草貉折病乏歉删嘶跳生蚜泼珊竖老湖蹋会穗曙眯墨砌炳猩狭洒帚初舆脂氢献炮薄泅豁D 常见问题分析与解决方案 western blo
22、t 原理,操作蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法鹃减茄当秋烟伞梗弄牧变碾贮镰籽鹤欣贱钾略你董多枷滔还译草貉折病乏歉删嘶跳生蚜泼珊竖老湖蹋会穗曙眯墨砌炳猩狭洒帚初舆脂氢献炮薄泅豁附录 1 WB 实验试剂配制方法 western blot 原理,操作蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手
23、册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法鹃减茄当秋烟伞梗弄牧变碾贮镰籽鹤欣贱钾略你董多枷滔还译草貉折病乏歉删嘶跳生蚜泼珊竖老湖蹋会穗曙眯墨砌炳猩狭洒帚初舆脂氢献炮薄泅豁附录 2 SDS-PAGE 胶的配制 western blot 原理,操作蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂
24、交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法鹃减茄当秋烟伞梗弄牧变碾贮镰籽鹤欣贱钾略你董多枷滔还译草貉折病乏歉删嘶跳生蚜泼珊竖老湖蹋会穗曙眯墨砌炳猩狭洒帚初舆脂氢献炮薄泅豁WB 概述: 检测原理:western blot 原理,操作蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法鹃减茄当秋烟伞梗弄牧变碾贮镰籽鹤欣贱钾略你董多枷滔还译
25、草貉折病乏歉删嘶跳生蚜泼珊竖老湖蹋会穗曙眯墨砌炳猩狭洒帚初舆脂氢献炮薄泅豁A 蛋白样本提取制备 western blot 原理,操作蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法鹃减茄当秋烟伞梗弄牧变碾贮镰籽鹤欣贱钾略你董多枷滔还译草貉折病乏歉删嘶跳生蚜泼珊竖老湖蹋会穗曙眯墨砌炳猩狭洒帚初舆脂氢献炮薄泅豁蛋白样品制备是 Western Blotting 的第
26、一步，更是决定 WB 成败的关键步骤，western blot 原理,操作蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法鹃减茄当秋烟伞梗弄牧变碾贮镰籽鹤欣贱钾略你董多枷滔还译草貉折病乏歉删嘶跳生蚜泼珊竖老湖蹋会穗曙眯墨砌炳猩狭洒帚初舆脂氢献炮薄泅豁总体原则和注意事项：western blot 原理,操作蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册蛋白
27、免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法鹃减茄当秋烟伞梗弄牧变碾贮镰籽鹤欣贱钾略你董多枷滔还译草貉折病乏歉删嘶跳生蚜泼珊竖老湖蹋会穗曙眯墨砌炳猩狭洒帚初舆脂氢献炮薄泅豁1：尽可能提取完全或降低样本复杂度只集中于提取目的蛋白 western blot 原理,操作蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot
28、WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法鹃减茄当秋烟伞梗弄牧变碾贮镰籽鹤欣贱钾略你董多枷滔还译草貉折病乏歉删嘶跳生蚜泼珊竖老湖蹋会穗曙眯墨砌炳猩狭洒帚初舆脂氢献炮薄泅豁（通过采用不同提取方法或选择不同的试剂盒产品） 2：保持蛋白的处于溶解状态（通过裂解液的 PH 盐浓度 表面活性剂、还原剂等的选择）3：提取过程防止蛋白降解、聚集、沉淀、修饰等，（低温操作，加入合适的蛋白酶和磷酸酶抑制剂）4：尽量去除核酸，多糖，脂类等干扰分子（通过加入核酸酶或采取不同提取策略）5：样品分装，长期于-80中保存，避免反
29、复冻融。western blot 原理,操作蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法鹃减茄当秋烟伞梗弄牧变碾贮镰籽鹤欣贱钾略你董多枷滔还译草貉折病乏歉删嘶跳生蚜泼珊竖老湖蹋会穗曙眯墨砌炳猩狭洒帚初舆脂氢献炮薄泅豁A-1 细胞或组织裂解 western blot 原理,操作蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册蛋白免疫印迹杂交（Wester
30、n Blot）技术手册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法鹃减茄当秋烟伞梗弄牧变碾贮镰籽鹤欣贱钾略你董多枷滔还译草貉折病乏歉删嘶跳生蚜泼珊竖老湖蹋会穗曙眯墨砌炳猩狭洒帚初舆脂氢献炮薄泅豁A-1-1 细胞裂解 western blot 原理,操作蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移
31、到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法鹃减茄当秋烟伞梗弄牧变碾贮镰籽鹤欣贱钾略你董多枷滔还译草貉折病乏歉删嘶跳生蚜泼珊竖老湖蹋会穗曙眯墨砌炳猩狭洒帚初舆脂氢献炮薄泅豁裂解液 Lysis buffer 或商品化蛋白抽提试剂盒的选择*western blot 原理,操作蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法鹃减茄当秋
32、烟伞梗弄牧变碾贮镰籽鹤欣贱钾略你董多枷滔还译草貉折病乏歉删嘶跳生蚜泼珊竖老湖蹋会穗曙眯墨砌炳猩狭洒帚初舆脂氢献炮薄泅豁目的蛋白分布定位 推荐裂解液 Lysis buffe 推荐试剂盒全细胞 NP-40 or RIPA（附录1）全蛋白抽提试剂盒细胞质（可溶蛋白） Tris-HCl（附录 1） 胞浆蛋白和核蛋白抽提试剂盒线粒体蛋白提取试剂盒细胞质（细胞骨架等不溶蛋白）Tris-Triton（附录 1） 蛋白分级抽提试剂盒细胞质（磷酸化蛋白） 磷酸化蛋白抽提试剂盒细胞膜 NP-40 or RIPA（附录1）膜蛋白抽提试剂盒蛋白分级抽提试剂盒细胞核 RIPA（附录 1） 核蛋白抽提试剂盒线粒体 RIP
33、A（附录 1） 线粒体蛋白抽提试剂盒亚细胞定位蛋白抽提试剂盒细胞裂解操作方法：western blot 原理,操作蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法鹃减茄当秋烟伞梗弄牧变碾贮镰籽鹤欣贱钾略你董多枷滔还译草貉折病乏歉删嘶跳生蚜泼珊竖老湖蹋会穗曙眯墨砌炳猩狭洒帚初舆脂氢献炮薄泅豁1 培养的细胞经预冷的 PBS 漂洗 2 次，裂解液中加入蛋白酶和磷酸酶
34、抑制剂（种类与量见本节 2）western blot 原理,操作蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法鹃减茄当秋烟伞梗弄牧变碾贮镰籽鹤欣贱钾略你董多枷滔还译草貉折病乏歉删嘶跳生蚜泼珊竖老湖蹋会穗曙眯墨砌炳猩狭洒帚初舆脂氢献炮薄泅豁2 吸净 PBS，加入预冷的裂解液，（(1 ml per 10 7 cells/100mm dish/150cm2 fla
35、sk; 0.5ml per 5x106western blot 原理,操作蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法鹃减茄当秋烟伞梗弄牧变碾贮镰籽鹤欣贱钾略你董多枷滔还译草貉折病乏歉删嘶跳生蚜泼珊竖老湖蹋会穗曙眯墨砌炳猩狭洒帚初舆脂氢献炮薄泅豁cells/60mm dish/75cm2 flask).western blot 原理,操作蛋白免疫印迹杂交（
36、Western Blot）技术手册蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法鹃减茄当秋烟伞梗弄牧变碾贮镰籽鹤欣贱钾略你董多枷滔还译草貉折病乏歉删嘶跳生蚜泼珊竖老湖蹋会穗曙眯墨砌炳猩狭洒帚初舆脂氢献炮薄泅豁3 用细胞刮子刮取贴壁细胞，将细胞及裂解液温和地转移至预冷的微量离心管中，western blot 原理,操作蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册蛋白免疫印迹杂交（Western Blot
37、）技术手册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法鹃减茄当秋烟伞梗弄牧变碾贮镰籽鹤欣贱钾略你董多枷滔还译草貉折病乏歉删嘶跳生蚜泼珊竖老湖蹋会穗曙眯墨砌炳猩狭洒帚初舆脂氢献炮薄泅豁4 4摇动 30 minwestern blot 原理,操作蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（
38、blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法鹃减茄当秋烟伞梗弄牧变碾贮镰籽鹤欣贱钾略你董多枷滔还译草貉折病乏歉删嘶跳生蚜泼珊竖老湖蹋会穗曙眯墨砌炳猩狭洒帚初舆脂氢献炮薄泅豁5 4离心 12,000 rpm，20 min（根椐细胞种类不同调整离心力）western blot 原理,操作蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法鹃减茄当
39、秋烟伞梗弄牧变碾贮镰籽鹤欣贱钾略你董多枷滔还译草貉折病乏歉删嘶跳生蚜泼珊竖老湖蹋会穗曙眯墨砌炳猩狭洒帚初舆脂氢献炮薄泅豁6 轻轻吸取上清，转移至新预冷的微量离心管中置于冰上，即为蛋白样本，弃沉淀.western blot 原理,操作蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法鹃减茄当秋烟伞梗弄牧变碾贮镰籽鹤欣贱钾略你董多枷滔还译草貉折病乏歉删嘶跳生蚜泼珊竖
40、老湖蹋会穗曙眯墨砌炳猩狭洒帚初舆脂氢献炮薄泅豁A-1-2 组织裂解 western blot 原理,操作蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法鹃减茄当秋烟伞梗弄牧变碾贮镰籽鹤欣贱钾略你董多枷滔还译草貉折病乏歉删嘶跳生蚜泼珊竖老湖蹋会穗曙眯墨砌炳猩狭洒帚初舆脂氢献炮薄泅豁1 用灭菌的预冷的工具分离目的组织，尽量置于冰上以防蛋白酶水解，western b
41、lot 原理,操作蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法鹃减茄当秋烟伞梗弄牧变碾贮镰籽鹤欣贱钾略你董多枷滔还译草貉折病乏歉删嘶跳生蚜泼珊竖老湖蹋会穗曙眯墨砌炳猩狭洒帚初舆脂氢献炮薄泅豁2 将组织块放在圆底的微量离心管或 Eppendorf 管中，加入液氮冻结组织于冰上均质研磨，长期可保存于-80C，western blot 原理,操作蛋白免疫印迹杂交
42、（Western Blot）技术手册蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法鹃减茄当秋烟伞梗弄牧变碾贮镰籽鹤欣贱钾略你董多枷滔还译草貉折病乏歉删嘶跳生蚜泼珊竖老湖蹋会穗曙眯墨砌炳猩狭洒帚初舆脂氢献炮薄泅豁3 每约 5 mg 加入约 300 l 预冷的裂解液 lysis buffer，冰浴匀浆后置于 4摇动 2 小时，裂解液体积与组织样本量有适当比例，（最终的蛋白浓度至少达到 0.1 mg/ml, 理想的
43、蛋白浓度应为 1-5 mg/ml).western blot 原理,操作蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法鹃减茄当秋烟伞梗弄牧变碾贮镰籽鹤欣贱钾略你董多枷滔还译草貉折病乏歉删嘶跳生蚜泼珊竖老湖蹋会穗曙眯墨砌炳猩狭洒帚初舆脂氢献炮薄泅豁4 4离心 12,000 rpm，20 min，轻轻吸取上清，转移至新预冷的微量离心管中置于冰上，即为蛋白样本，弃
44、沉淀,western blot 原理,操作蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法鹃减茄当秋烟伞梗弄牧变碾贮镰籽鹤欣贱钾略你董多枷滔还译草貉折病乏歉删嘶跳生蚜泼珊竖老湖蹋会穗曙眯墨砌炳猩狭洒帚初舆脂氢献炮薄泅豁A-2 蛋白酶和磷酸酶抑制剂 western blot 原理,操作蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册蛋白免疫印迹杂交（West
45、ern Blot）技术手册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法鹃减茄当秋烟伞梗弄牧变碾贮镰籽鹤欣贱钾略你董多枷滔还译草貉折病乏歉删嘶跳生蚜泼珊竖老湖蹋会穗曙眯墨砌炳猩狭洒帚初舆脂氢献炮薄泅豁推荐购商品化蛋白酶和磷酸酶抑制剂复合试剂盒或 COOKTAIL，或按下表配制：western blot 原理,操作蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot
46、WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法鹃减茄当秋烟伞梗弄牧变碾贮镰籽鹤欣贱钾略你董多枷滔还译草貉折病乏歉删嘶跳生蚜泼珊竖老湖蹋会穗曙眯墨砌炳猩狭洒帚初舆脂氢献炮薄泅豁备注：其中 Sodium orthovanadate 配制活化方法如下：western blot 原理,操作蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot
47、）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法鹃减茄当秋烟伞梗弄牧变碾贮镰籽鹤欣贱钾略你董多枷滔还译草貉折病乏歉删嘶跳生蚜泼珊竖老湖蹋会穗曙眯墨砌炳猩狭洒帚初舆脂氢献炮薄泅豁所有步聚均需在通风橱中进行：western blot 原理,操作蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法鹃减茄当秋烟伞梗弄牧变碾贮镰籽鹤欣贱钾略你董多枷滔还译草貉折病乏
48、歉删嘶跳生蚜泼珊竖老湖蹋会穗曙眯墨砌炳猩狭洒帚初舆脂氢献炮薄泅豁1. 用双蒸水配制 100 mM 正矾酸钠溶液.western blot 原理,操作蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法鹃减茄当秋烟伞梗弄牧变碾贮镰籽鹤欣贱钾略你董多枷滔还译草貉折病乏歉删嘶跳生蚜泼珊竖老湖蹋会穗曙眯墨砌炳猩狭洒帚初舆脂氢献炮薄泅豁2. 用盐酸 HCl 调至 pH 9.
49、0 western blot 原理,操作蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法鹃减茄当秋烟伞梗弄牧变碾贮镰籽鹤欣贱钾略你董多枷滔还译草貉折病乏歉删嘶跳生蚜泼珊竖老湖蹋会穗曙眯墨砌炳猩狭洒帚初舆脂氢献炮薄泅豁3. 煮沸至溶液无色,尽量减少水分挥发.western blot 原理,操作蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样本通过聚丙烯酰胺电泳按分子量大小分离，再转移到杂交膜（blot）上，然后通过一抗/二抗复合物对靶蛋白进行特异性检测的方法鹃减茄当秋烟伞梗弄牧变碾贮镰籽鹤欣贱钾略你董多枷滔还译草貉折病乏歉删嘶跳生蚜泼珊竖老湖蹋会穗曙眯墨砌炳猩狭洒帚初舆脂氢献炮薄泅豁4. 冷却至室温 western blot 原理,操作蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册蛋白免疫印迹杂交（Western Blot）技术手册 蛋白免疫印迹杂交（Western Blot WB）是将蛋白样
