1、收稿日期 : 2012-08-17 接受日期 : 2012-12-07基金项目 : 重庆市自然科学基金计划重点项目 -海洋多糖用于丹参口服缓释微囊的研究 ( CSTC， 2009BA5034)* 通讯作者 Tel: 86-23-89029068; E-mail: ZXM761 yahoo com cn天然产物研究与开发 Nat Prod Res Dev 2013， 25: 398-400文章编号 : 1001-6880( 2013) 3-0398-03丹参提取物中酚酸类含量的快速检测法励 娜 ， 胡 荣 ， 蒋成英 ， 杨荣平 ， 张小梅*重庆市中药研究院 ， 重庆 400065摘 要 : 建
2、立丹参提取物中酚酸类含量的快速检测方法 。以丹酚酸 B 为对照 ， 采用分光光度法于 482 nm 处测定丹参提取物中酚酸类的含量 。结果表明丹酚酸 B 在 00782 10166 mg( r =09977) 范围内线性关系良好 ， 回收率为 101652%， RSD 值为 081%( n =9) 。该提取物中酚酸类含量测定结果为 19 636%。该方法快速简便 、准确 、重现性好 ， 可作为快速检测丹参中总酚酸含量的方法 。关键词 : 丹参提取物 ; 丹酚酸 ; 分光光度法 ; 快速检测中图分类号 : R284. 1 文献标识码 : AQuick Determination of Salvi
3、anolic Acid in the Extract ofSalviae miltiorrhizae Radix Et RhizomaLI Na， HU Rong， JIANG Cheng-ying， YANG Rong-ping， ZHANG Xiao-mei*Chongqing Academy of Chinese Materia Medica， Chongqing 400065Abstract: The objective of this study was to establisha fast method for the determination of salvianolic ac
4、id in the extractof Salviae miltiorrhizae Radix Et Rhizoma Using salvianolic acid B as a reference substance， the concentration of salvian-olic acid in extract of Salviae miltiorrhizae Radix Et Rhizoma was determined by UV absorption at wavelength 482 nmThe linear relationship of salvianolic acid B
5、was good in the ranges of 00782-10166 mg( r =09977) The average re-covery was 101652%and RSD was 081% ( n =9) The concentration of salvianolic acid in the extract ofSalviae milti-orrhizae Radix Et Rhizoma was 19636% The method was simple， rapid and accurate for quality control of Salviae milti-orrhi
6、zae Radix Et RhizomaKey words: extract of Salviae miltiorrhizae Radix Et Rhizoma; salvianolic acid; UV; quickdetection丹参为唇形科植物丹参 Salvia miltiorrhiza Bge的干燥根及根茎 。性微寒味苦 ， 具有活血祛瘀 、通经止痛 、清心除烦 、凉血消痈的功效 。用于胸痹心痛 、脘腹胁痛 、癥瘕积聚 、热痹疼痛 、心烦不眠 、月经不调 、痛经经闭 、疮疡肿痛 1。丹参药材中主要含脂溶性和水溶性成分 。其中水溶性成分主要为丹酚酸类化合物 ， 如丹参素 、丹酚酸 A、
7、丹酚酸 B、丹酚酸C、迷迭香酸等 ， 具有改善微循环 、抗血栓 、促进组织恢复等作用 。现代医学认为 ， 丹参酚酸类成分能够缩小心肌梗死的范围 ， 减轻其病情 ， 对大鼠心肌缺血 、再灌注损伤具有保护作用 ， 同时有明显的抑制血小板聚集 、抗凝 、溶纤及降低血脂 、抗动脉粥样硬化的作用 2。中国药典 2010 年版 ( 一部 ) 丹参项下收载用HPLC 法测定丹酚酸 B 的含量标准 ， 测定时间在 20min 以上 ， 只能测定丹酚酸 B 单一组分的含量 ， 不利于丹参药材水提物的整体质量控制 。本实验应用硝酸铝络合显色原理 ， 采用紫外分光光度法测定丹参提取物中酚酸类的含量 ， 并对方法的可
8、行性进行了验证 。结果表明该含量测定方法简便 、快捷 、准确 ，大大缩短了丹酚酸含量测定时间 ， 提高了丹参药材质量检测的效率 ， 为丹参药材及其水提物质量控制提供了有效方法 。1 仪器与材料UV-1601 紫外 -可见分光光度计 ( 日本岛津公司 ) ; BUG25-12 超声波清洗机 220 W， 50 KHz， 必能信超声 ( 上海 ) 有限公司 ; 数显恒温水浴锅 ( 上海梅香仪器有限公司 ) ; AEG-45SM 电子天平 ( 十万分之一 ， 日本岛津公司 ) ; BP121S 电子天平 ( 万分之一 ，北京赛多利斯科学仪器有限公司 ) 。丹参药材提取物 ( 南京泽朗医药科技有限公司
9、提供 ， 批 号 :090927) ; 丹酚酸 B 对照品 ( 南京泽朗医药科技有限公司提供 ， 批号 : 115939-258A0056) 。试剂均为分析纯 。2 方法与结果21 对照品溶液与供试品溶液的制备211 对照品溶液的制备称取丹酚酸 B 对照品 16 mg， 置于 10 mL 容量瓶中 ， 精密称定 ， 加入 75% 甲醇溶解并定容至刻度 。即得每 1 mL 含 016 mg 的丹酚酸 B 对照品溶液 。212 供试品溶液的制备取丹参提取物粉末约 002 g， 精密称定 ， 加沸水使溶解 ， 冷却后定容于 25 mL 容量瓶 ， 摇匀 ， 作供试品溶液 。22 测定波长的选择取对照
10、品溶液和供试品溶液 5 mL， 分别置于 25mL 量瓶中 ， 顺序加入 5% NaNO23 mL、10% Al( NO3)305 mL、NaOH 试液 15 mL， 加水至刻度 ， 摇匀 ， 放置 5 min 后 ， 在 400 800 nm 波长范围内扫描 ， 二者在 482 nm 有最大吸收 ， 故选择 482 nm 为测定波长 。23 分光光度法条件筛选231 5%NaNO2用量考察取供试品溶液各 5 mL， 置于 25 mL 量瓶中 ， 分别加入 5% NaNO20、1、3、5、10、13 mL， 再加入 10%Al( NO3)305 mL 和 NaOH 试液 5 mL， 加水至刻度
11、 ，摇匀 ， 放置 5 min 后 ， 在 482 nm 波长处测定其吸光度分别为 0074、0330、0441、0398、0438、0432。结果表明 ， 5%NaNO2用量在 3 mL 时样品吸光度较高 ， 故 5%NaNO2用量选择在 3 mL 为宜 。232 10% Al( NO3)3用量考察取供试品溶液各 5 mL， 置于 25 mL 量瓶中 ， 加入 5% NaNO23 mL 后 ， 分别加入 10% Al( NO3)30、0. 1、05、1、3 mL， 再加入 NaOH 试液 5 mL， 加水至刻度 ， 摇匀 ， 放置 5 min 后 ， 在 482 nm 波长处测定其吸光度分别
12、为 0 065、0 431、0 469、0 522、0 511、0. 478。结果表明 ， 10%Al( NO3)3用量在 05 mL 时样品吸光度较高 ， 故 10%Al( NO3)3用量选择在 0 5mL 为宜 。233 NaOH试液用量考察取供试品溶液各 5 mL， 置于 25 mL 量瓶中 ， 加入 5%NaNO23 mL、10% Al( NO3)30 5 mL 后 ， 分别加入 NaOH 试液 0、1、5、10、15 、16 mL， 加水至刻度 ，摇匀 ， 放置 5 min 后 ， 在 482 nm 波长处测定其吸光度分别为 0164、0358、0496、0511、0550、0551
13、。结果表明 ， NaOH 试液用量在 15 mL 和 16 mL 时样品吸光度均较高 ， 同时吸光度值相差不大 ， 故 NaOH试液用量选择在 15 mL 为宜 。234 显色时间的考察取供试品溶液 5 mL， 置于 25 mL 量瓶中 ， 加入5%NaNO23 mL、10% Al( NO3)30 5mL 和 NaOH 试液 15 mL， 加水至刻度 ， 摇匀 ， 分别在 0、3、5、10、20、30 min 后 ， 在 482 nm 波长处测定其吸光度分别为0. 522、0522、0. 521、0 517、0 515、0 514。结果表明 ， 在放置 5 min 内吸光度值较高且稳定 ， 5
14、 min 后吸光度值开始下降较明显 ， 故选择的显色时间为 5min。24 线性关系考察精密移取对照品溶液 0 5、1、2、4、6、6 5 mL， 分别置于 25 mL 量瓶中 ， 顺序加入 5% NaNO23 mL、10%Al( NO3)305 mL、NaOH 试液 15 mL， 加水至刻度 ， 摇匀 ， 放置 5 min 后 ， 于 482 nm 波长下测定吸光度 。以丹酚酸 B 的浓度 ( mg/mL) 为横坐标 ( X) 、吸光度值为纵坐标 ( Y) ， 进行回归 ， 回归方程为 Y =0. 8071X +00427( r =0 9977) 。结果表明 ， 丹酚酸B 含量在 00782
15、 1. 0166 mg 范围内 ， 吸光度值与含量线性关系良好 。25 精密度实验精密吸取丹酚酸 B 对照品溶液 ( 016 mg/mL) 5mL 于 25 mL 容量瓶中 ， 按 2 4 中显色条件操作 ， 经放置显色后 ， 于 482 nm 波长处测定吸光度 ， 连续 6次 ， RSD 值为 0009%， 表明仪器精密度较好 。26 稳定性实验261 对照品稳定性试验精密吸取丹酚酸 B 对照品溶液 ( 016 mg/mL) 5mL 于 25 mL 容量瓶中 ， 按 2 4 中显色条件显色后 ，分别在 0、0 5、1、1 5、3、4、8、12、24 h 测定其在 482nm 波长处的吸光度
16、。吸光度平均值为 0 668， RSD值为 1. 57%。结果表明 ， 对照品溶液在 24 h 内较稳定 。262 样品稳定性试验取丹参提取物粉末约 0 02 g， 精密称定 ， 按2. 12 项下制得供试品溶液 ， 取供试品溶液 5 mL， 按24 中显色条件显色后 ， 分别在 0、0 5、1、1 5、3、4、8、12、24 h 测定其在 482 nm 波长处的吸收度 。样品24 h 内总酚酸含量平均值为 19 553%， RSD 值为993Vol. 25 励 娜等 : 丹参提取物中酚酸类含量的快速检测法3. 26%; 12 h 内丹酚酸含量平均值为 19718%， RSD值为 166%，
17、表明供试品溶液在显色后 12 h 内基本稳定 。27 重现性实验取丹参提取物粉末约 0 025 g， 精密称定 ， 5 份 ，按 2 1 2 项下制得供试品溶液 ， 分别取供试液 5mL， 按 2. 4 中显色条件显色后 ， 测定其在 482 nm 波长处 的 吸 收 度 。计算丹酚酸的含量平均值为19. 416%， RSD 值为 118%， 表明实验重现性良好 。28 回收率试验精密称取已知含量的丹参提取物 6 份 ， 精密称定 。按样品中丹酚酸含量的 80%、100%、120% 精密加入对照品 ， 按 212 项下制得供试品溶液 ， 分别取供试液 5 mL， 按 2 4 中显色条件显色后
18、， 测定其在 482 nm 波长处的吸收度 。计 算 回 收 率 为101. 652%， RSD 值为 081%， 结果见表 1。表 1 加样回收率试验结果 ( n =9)Table 1 Results of recovery test ( n =9)样品Sample样品量Sampleweight( g)加入量Added( mg)测得量Detected( mg)回收率Recovery( %)平均回收率Average recovery( %)RSD( %)1 00108 3012 5145 1014452 0011 3012 5186 1015783 0012 3012 5393 101624
19、00124 3765 6188 1004315 00102 3765 5785 101132 101625 0816 00103 3765 5868 102837 00113 4518 6838 1026328 00104 4518 657 1008199 00098 4518 6529 10238229 样品的含量测定按拟定含量测定方法对丹参药材提取物 3 批样品进行检验 ， 结果见表 2。表 2 3 批样品中含量测定结果Table 2 Content of salvianolic acid determined in 3 batchessample样品Sample丹酚酸含量平均值Avera
20、ge contentof salvianolic acid ( %)平均值Average( %)1 199712 19469 196363 194693 讨论本实验测定法较用 HPLC 法测定丹酚酸 B 单一成分含量更快速 、简便 ， 同时对丹参药材水溶性大类成分的控制也更为准确 、可靠 。同时 ， 可根据本实验方法及结果 ， 将显色剂组合开发为测定试纸等快速测定用产品 ， 用于含邻二酚羟基的酚酸类化合物的测定 。对药材的种植 、加工 、炮制等各个环节的质量控制具有非常重要的开发利用价值 。丹参药材中酚酸类成分含量约为 10% 13% 3， 而本实验测定含量在 19% 20%， 原因在于本实验
21、测定的是丹参水溶提取物中酚酸类成分的含量 ， 理应比丹参药材中酚酸类成分的含量高 ， 实验目的在于考察方法的可行性 。丹酚酸类成分受热见光均不稳定 、易氧化 ， 故样品制备好后应及时检测 。同时 ， 应注意样品的避光低温保存 。本法简便 、准确 ， 重现性良好 ， 可用于丹参药材及提取物的质量控制 。参考文献1 Chinese Pharmacopoeia Commission( 国家药典委员会 ) Pharmacopoeia of the Peoples Republic of China( 中华人民共和国药典 ) Beijing: China Medical Science Press，20
22、10， Vol I702 Gao X( 高霞 ) ， Wang ZM( 王著明 ) ， Wen SJ( 温守俭 ) Dif-ferent water extraction and alcohol precipitation process forthe purification of salvianolic acid process Jilin Med J( 吉林医学 ) ， 2009， 30: 614-6153 Ye Y( 叶勇 ) Comparative study on determination of salvian-olic acids content by colorimetery and HPLC J ZhejiangUniv Tradit Chin Med( 浙江中医药大学学报 ) ， 2006， 30:350-351004 天然产物研究与开发 Vol. 25
