1、1,课题一 微生物的实验室培养,1.何为培养基？不同的培养基有不同的配方，但是其基本成分都相同，都包括哪些营养成分？有何作用？请举例说明。,2.无菌技术包括哪些方面？消毒和灭菌的区别？常用的消毒方法有哪些？常用的灭菌方法有哪些？,自主学习:,培养基和无菌技术,一、培养基,概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。,固体培养基用于微生物的分离、计数、鉴定液体培养基常用于工业生产,分类,4,微生物需要的营养物质,（1） 一般都含有水、碳源、和氮源、 无机盐等营养物质（2）还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质 (例如生长因子即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物,如
2、维生素)以及氧气、渗透压等的要求。,1、消毒,使用较温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。,2、灭菌,使用强烈的理化因素杀死物体内所有的微生物，包括芽孢和孢子。,二、无菌技术,常用的消毒方法,1、煮沸消毒法：100煮沸5-6min 2、巴氏消毒法：70-75 下煮30min或 80 下煮15min 3、用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒 4、氯气消毒水源 5、紫外线消毒 ,二、无菌技术,1、灼烧灭菌2、干热灭菌：160 -170 下加热1-2h。3、高压蒸气灭菌：100kPa、121 下维持15-30min。,常用的灭菌方法,二、无菌技术,（一
3、）制备培养基,牛肉膏蛋白胨培养基,1. 计算 2称量 3溶化 4灭菌 5倒平板,三、实验操作,倒平板技术,1.培养基灭菌后，需要冷却到50 左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？,问题探讨,可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。,2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？,通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。,3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？,4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？,平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置
4、，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。,空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。,（二）纯化大肠杆菌,平板划线法 稀释涂布平板法,常用的微生物接种方法：,13,微生物的接种技术,平板划线法,14,微生物的接种技术,稀释涂布平板法,问题探讨,1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？,第一步灼烧是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的
5、末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。,2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？,以免接种环温度太高，杀死菌种。,3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？,划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。,问题探讨,涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？,应从操作的
6、各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。,1、临时保藏：,接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4冰箱保存。,2、长期保存：,甘油冷冻管藏法,菌种的保存,四、课题成果评价,（一）培养基的制作是否合格如果未接种的培养基在恒温箱中保温12 d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。（二）接种操作是否符合无菌要求如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。（三）是否进行了及时细致的观察与记录培养12 h与24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。,20,固体培养基：菌落,21,菌落,菌落是鉴定菌种的重要依据,22,细菌的菌落,有鞭毛细菌： 无鞭毛细菌：,有荚膜细菌： 无荚膜细菌：,菌落光滑,S型 菌落粗糙,R型,大而扁平，边缘波状或锯齿状。 较小较厚，边缘整齐。,
