1、课题1,DNA的粗提取和鉴定,一、基础知识,1、提取DNA的方法,（1）DNA的溶解性 DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐溶液就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离目的。,DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步分离。,（2）DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响。 大多数蛋白质不能忍受6080的高温，而DNA在80 以上才会变性。 洗涤剂能够瓦解细胞膜， 但对DNA没有影响。,在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色。因此，二
2、苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。DNA+冰醋酸、少量浓硫酸+二苯胺 蓝色物,2、DNA的鉴定,二、实验设计,（一）实验材料的选取,1、材料：鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基中培养的大肠杆菌。（从中选取23种实验材料） 2、原则：凡是含有DNA的生物材料都可以考虑，但选用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大,（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液,1、动物细胞的破碎：以鸡血为例，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可。,2、植物细胞的破碎：提取洋葱DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行充分的搅
3、拌和研磨，过滤后收集研磨液。,（三）去除滤液中的杂质,方案一：在滤液中加入NaCl，使NaCl溶液浓度为2mol/L，过滤除去不溶的杂质，再调节NaCl溶液浓度为0.14mol/L，析出DNA，过滤去除溶液中的杂质，再用2mol/L的NaCl溶解DNA。,方案二：直接在滤液中加入嫩肉粉，反应1015min，嫩肉中的木瓜蛋白酶能够分解蛋白质。,方案三：将滤液放在6075的恒温水浴中保温1015，注意严格控制温度范围。,（四） DNA的析出与鉴定,1、DNA的析出： 将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积相等的、冷却的酒精溶液（体积分数为95%），静置23min，溶液中会出现白色丝状物，这就是粗提取的
4、DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分。,2、DNA的鉴定： 取两支20mL的试管，各加入物质的量浓度为2mol/L的NaCl溶液5mL，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4mL的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min，待试管冷却后，比较两支试管中溶液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶液是否变蓝。,三、操作提示,1、以鸡血为实验材料时，每100mL血液中需要加入3g柠檬酸钠，防止血液凝固。 2、加入洗涤剂后，动作要轻缓、柔和，否则容易产生大量的泡沫，不利于后续步骤的操作。加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，
5、以免加剧DNA分子的断裂，导致DNA分子不能形成絮状沉淀。 3、二苯胺试剂要现配现用，否则会影响鉴定的效果。,鸡血细胞液中DNA的粗提取实验流程图,2mol/L,鸡血细胞液中DNA的粗提取实验流程图,过滤取纱布上的滤物,纱布过滤,再次溶解DNA,2mol/LNaCl溶液,取滤物,鸡血细胞液中DNA的粗提取实验流程图,加冷酒精使DNA析出（纯化）,冷酒精,鸡血细胞液中DNA的粗提取实验流程图,DNA的鉴定,总结：,1. 下列关于DNA粗提取与鉴定的说法正确的是A氯化钠的浓度越低，对DNA的溶解度越大B人血也可代替鸡血进行实验C柠檬酸钠的主要作用是加速血细胞破裂DDNA不能溶于酒精 2. 在破碎鸡血细胞时，要先加入20ml的蒸馏水，其作用是 A. DNA溶解于水 B 血细胞破裂，DNA释放 C稀释血液，防止凝固 D 有利于搅拌 3. 若选择的实验材料为植物细胞，破碎细胞时要加入一定量的洗涤剂和食盐，加入食盐的目的是 A. 利于DNA的溶解 B. 分离DNA和蛋白质 C. 溶解细胞膜 D. 溶解蛋白质 4. 在DNA粗提取实验中，向在溶解DNA的NaCl溶液中，不断加入蒸馏水的目的是 A有利于溶解DNA B有利于溶解杂质 C减少DNA的溶解度 D减少杂质的溶解度,
