1、2.2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数学习目标：1.简述尿素在生产实践中的作用及分解尿素的细菌的作用。2.研究培养基对微生物的选择作用。3.进行土壤中分解尿素细菌的分离与计数。4.简述活菌计数技术的应用。学习过程：一、理论基础1.筛选菌株(1)实验室中微生物筛选的原理:人为提供有利于 生长的条件(包括营养、温度、pH 等),同时 或 其他微生物生长。 (2)选择培养基: 在微生物学中,将允许 种类的微生物生长,同时 或 其他种类微生物生长的培养基,称作选择培养基。 2.统计菌落数目:常用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目。当样品的 足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一
2、个 。通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确,一般选择菌落数在 的平板进行计数。此外,测定微生物数量的常用方法还有 直接计数。 3.设置对照:设置对照的主要目的是排除实验组中 对实验结果的影响,提高实验结果的 。例如为了排除培养基是否被杂菌污染了,需有 。 二、实验设计土壤中某样品细菌的分离与计数实验的操作步骤1. 取样:从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土 3 cm 左右,再取样。 2.制备 :准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基,将菌液稀释相同的倍数,在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目,因此,牛肉膏蛋白胨培养基可以作为对照,
3、用来判断选择培养基是否起到了选择作用。 3.微生物的 与观察:将 10 g 土样加入盛有 90 mL 无菌生理盐水的锥形瓶中(体积为 250 mL),充分摇匀,吸取上清液 ,转移至盛有 的生理盐水的无菌大试管中,依次等比稀释至 107 稀释度,并按照由 107103 稀释度的顺序分别吸取 进行平板涂布操作。每个稀释度下需要 3 个选择培养基、1 个牛肉膏蛋白胨培养基。 将涂布好的培养皿放在 30 温度下培养,及时观察和记录。 挑选选择培养基中不同形态的菌落接入含 培养基的斜面中,观察能否产生颜色反应。 4.细菌的计数:当菌落数目稳定时 ,选取菌落数在 的平板进行计数。在同一稀释度下,至少对 3
4、 个平板进行重复计数,然后求出 ,并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。 探究：知识点一: 筛选菌株1.筛选菌株的原理是什么?请举例说明。2.简述筛选菌株的方法。3.请简述选择培养基的制备原理、制备方法、用途及实例。来源:21 世纪教育网知识点二:统计菌落数目和设置对照1.如何对样品中微生物进行计数?试简述相关方法的原理及缺点。2.如何计算每克样品中的菌落数?3.在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数目的实验时,A 同学从对应的 106 倍稀释的培 养基中筛选出大约 230 个菌落,但是其他同学在同样的稀释度下只选择出大约 100个菌落。试分析其原因并设计探究方案,根据结果得出结论。参考答案：学习过程：一、理论基础1.（1）目的菌株 抑制 阻止（2）特定 抑制 阻止2. 稀释度 活菌 30300 显微镜3. 非测试因素 可信度 空白对照二、实验设计1. 土壤2. 培养基3. 培养 1 mL 9 mL 0.1 mL 选择4. 30300 平均数
