1、第八章 皂 苷,知识要求： 掌握皂苷的结构与分类 掌握皂苷的溶解性、表面活性、溶血作用 掌握皂苷的提取，分段沉淀法、胆固醇沉淀法分离 熟悉皂苷的性状、显色反应 熟悉皂苷的色谱法分离 熟悉皂苷的实例分析 能力要求 熟练应用皂苷的性质区别甾体皂苷与三帖皂苷 熟练应用皂苷的提取与分离技能 学会皂苷的鉴别方法,皂苷是一类结构比较复杂的苷类化合物。它的水溶液振摇后能产生大量持久性、类似肥皂样的泡沫，故名皂苷,分布 在自然界分布广泛，菌类、蕨类、单子叶、双子叶植物、动物及海洋生物中均有分布，尤以双子叶植物中分布最多。 主要分布于菊科、石竹科、五加科、豆科、远志科、桔梗科、玄参科、薯蓣科、百合科、玄参科、菝
2、葜科、龙舌兰科等单子叶植物中。 含有三萜类成分的主要中药如人参、甘草、柴胡、黄芪、桔梗、川楝皮、泽泻、灵芝等。,生物活性,人参皂苷能促进RNA蛋白质的生物合成，调节机体代谢，增强免疫功能。 七叶皂苷具有明显的抗渗出、抗炎、抗瘀血作用，能恢复毛细血管的正常的渗透性，提高毛细血管张力，控制炎症，改善循环，对脑外伤及心血管病有较好的治疗作用 柴胡皂苷能抑制中枢神经系统，有明显的抗炎作用，并能减低血浆中胆固醇和甘油三酯的水平。,抗生育：杀灭精子、抗早孕 主要用作合成甾体避孕药和激素类药物的原料。 降血糖:伪原知母皂苷A和原知母皂苷A 降低胆固醇和免疫调节 抗真菌、杀虫等,防治心脑血管疾病：地奥心血康胶
3、囊含8种由黄山药中提取的甾体皂苷，总量在90%以上，治疗冠心病。 心脑舒通由蒺藜果实中提取的总甾体皂苷，用于心脑血管疾病的防治。 盾叶冠心宁从盾叶薯蓣中提取的水溶性皂苷。,抗肿瘤：从百合科一植物中分离出的一种皂苷OSW-1,此化合物对人的正常细胞几乎没有毒性，而对恶性肿瘤细胞具有强烈毒性。体外生理活性实验表明，它的抗癌活性比目前临床应用的顺铂、紫杉醇等高100倍，有望成为一类新的抗癌药物。,多以游离或成苷、成酯的形式存在 常见的糖：葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖、鼠李糖，糖醛酸，特殊糖（如芹糖、乙酰氨基糖等） 分类 糖链数目不同：单糖链皂苷、双糖链皂苷、三糖链皂苷 是否含有羧基：酸性皂苷、中性
4、皂苷、酯皂苷 苷元化学结构：甾体皂苷、三萜皂苷 次皂苷：原生苷被部分降解的产物,第一节、化学结构,（一）结构特点,一、甾体皂苷,螺旋甾烷,甾体皂苷元共有27个碳原子组成:基本骨架为螺旋甾烷和异螺旋甾烷。,（1）分子中含有A,B,C,D,E,F六个环，A,B,C,D为甾体母核-环戊烷多氢菲，C22是E环和F环共有的碳原子，以螺缩酮的形式相联。 （2）分子中有含有多个羟基，大多在C3位有羟基取代。多数为-型，少数为-型。羰基和双键也是常见取代基。,（3）一般B/C 和C/D环稠合为反式(8,9,13,14)，而A/B环有顺式或反式（5或5）。,（4） 在甾体皂苷元的E,F环中有3个手性碳原子，为C
5、20、C22、C25 。 C20甲基为型，即C20-甲基位于E环平面的背面，对E环来说是型，但对F环来说是型。 C22也为型。 C25甲基有两种构型，当C25甲基位于环平面上的直立键时为型，其绝对构型为S型（25S,25L,25F,Neo）; S型即为螺旋甾烷，由其衍生的皂苷为螺甾烷醇皂苷类（spirostanol saponins）。,当C25甲基位于环平面下的平伏键时为型，其绝对构型为R型（25R，25D,25F,Iso）. R型即为异螺旋甾烷。由其衍生的皂苷为异螺甾烷醇皂苷类(isospirotanol saponins)。两者互为异构体，常共存于植物体内，25R型较稳定 （5）甾体皂苷
6、分子中不含羧基，呈中性，故又称中性皂苷。,（三）结构举例,结构分类,甾体皂苷的皂苷元基本骨架属于螺甾烷的衍生物，依照螺甾烷结构中C25的构型和环的环合状态，可将其分为四种类型。,1螺甾烷醇类C25为S构型。,2异螺甾烷醇类（isospirostanols) C25为R构型,3呋甾烷醇类（furostanols） F环为开链衍生物,4变形螺甾烷醇类（pseudo-pirostanols） F环为五元四氢呋喃环,二、三萜皂苷,三萜及其苷类由于结构复杂，分离难度也较大，在过去研究进展不快，近年来，由于分离技术和结构鉴定方法的发展，使皂苷类研究进展很快，同时，尤其是三萜皂苷类的生理活性的多样性，如人参
7、皂苷具有促进RNA蛋白质的生物合成，增强机体免疫等作用，柴胡皂苷等，具有抑制中枢神经系统和抗炎作用等。由于这些作用，三萜皂苷被认为是许多中药的有效成份，得到国内外学者的普遍重视，使其研究发展极为迅速。,由30个碳原子组成的萜类化合物，符合“异戊二烯定则”(C5H8)6 大多与糖结合成苷，大多溶于水，水溶液振摇会产生持久的泡沫，因此称为三萜皂苷。因为许多三萜皂苷具有羧基，因此又称为“酸性皂苷”。广泛存在于自然界，双子叶植物中分布最多 三萜苷元分类：四环三萜、五环三萜,四环三萜(tetracyclic triterpenoids) 在生源上可视为由鲨烯变为甾体的中间体，大多数结构和甾醇很相似，亦具
8、有环戊烷骈多氢菲的四环甾核。在4、4、14位上比甾醇多三个甲基，也有认为是植物甾醇的三甲基衍生物。存在于自然界较多的四环三萜或其皂苷苷元主要有达玛烷、羊毛脂烷、甘遂烷、环阿屯烷（环阿尔廷烷）、葫芦烷、楝烷型三萜类。,（一）四环三萜皂苷,甾醇,四环三萜,一、达玛烷型,从环氧鲨烯由全椅式构象形成，其结构特点是A/B、B/C、C/D环均为反式, C18 -CH3由C13位转位到C8位连接（C环内）,A,B,D,C,人参中的人参皂苷,由达玛烷衍生的人参皂苷，在生物活性上有显著的差异。例如由20(S)-原人参三醇衍生的皂苷有溶血性质，而由20(S)-原人参二醇衍生的皂苷则具对抗溶血的作用，因此人参总皂苷
9、不能表现出溶血的现象。 人参皂苷Rg1有轻度中枢神经兴奋作用及抗疲劳作用。人参皂苷Rh则有中枢神经抑制作用和安定作用。 人参皂苷Rb1还有增强核糖核酸聚合酶的活性，而人参皂苷Rc则有抑制核糖核酸聚合酶的活性。,二、羊毛脂甾烷型,从环氧鲨烯由全椅-船-椅式构象形成，其A/B, B/C, C/D环均为反式。10、13、14位分别连有, , -CH3，即C18 -CH3连接在C13位上。,从灵芝中分离出一个三萜化合物，具有扶正固本之功。它的结构与羊毛甾烷相比，多了3=O，11=O，15=O，23=O，27-CH327-COOH，是羊毛甾烷的高度氧化化合物。,三、葫芦烷型,基本骨架与羊毛脂烷相似，但它
10、有5-H, 10-H,9-CH3（羊毛脂烷为5 - H, 10-CH3,9 -H ）,从雪胆属植物小蛇莲Hemsleya amabilis根中分离得到的 雪胆甲素和雪胆乙素，临床上用于治疗急性痢疾、肺结核、慢性气管炎等。,（二） 五环三萜,多数三萜皂苷苷元以五环三萜形式存在。其C3-OH与糖结合成苷，苷元中常含有羧基，故又称酸性皂苷，在植物体中常与钙、镁等离子结合成盐。五环三萜主要有下面几种类型：,（1）齐墩果烷型(oleanane),又称 -香树脂烷型(-amyrane) ，在植物界分布极为广泛。其基本碳架是多氢蒎的五环母核，环的构型为A/B，B/C，C/D均为反，D/E顺，母核上有8个甲基
11、，其中C4、C20上的均为偕二甲基， C8、C10 、C17的甲基均为-型， C17位上的甲基为 -型，一般C3位上的羟基为-型，并与糖结合成苷,A,E,D,C,B,齐墩果酸首先由油橄榄的叶子中分得，广泛分布于植物界，如在青叶胆全草、女贞果实等植物中游离存在，但大多数与糖结合成苷存在。齐墩果酸具有抗炎、镇静、防肿瘤等作用，是治疗急性黄胆性肝炎和慢性迁延性肝炎的有效药物。 含齐墩果酸的植物很多，但含量超过10%的很少，从刺五加(Acanthopanax senticosus)、龙牙葱木(Aralia mandshurica)中提取齐墩果酸，得率都超过10%，纯度在95%以上，是很好的植物资源。,
12、（2）乌苏烷型,又称-香树脂烷型(-amyrane)或熊果烷型，其分子结构与齐墩果烷型不同之处是E环上两个甲基位置不同，即C29、C30甲基分别连接在C19、C20位上，构型分别是和型。,熊果酸（Ursolic acid）来源于木犀科植物女贞(Ligustrum lucidum Ait.)叶中，熊果酸又名乌索酸，乌苏酸，属三萜类化合物。具有镇静、抗炎、抗菌、抗糖尿病、抗溃疡、降低血糖等多种生物学效应。,近年来发现熊果酸具有抗致癌、抗促癌、诱导F9畸胎瘤细胞分化和抗血管生成作用。研究发现：熊果酸能明显抑制HL60细胞增殖，可诱导其凋亡；能使小鼠的巨噬细胞吞噬功能显著提高。体内试验证明，熊果酸可以
13、明显增强机体免疫功能。说明它的抗肿瘤作用广泛，极有可能成为低毒有效的新型抗癌药物。,中药地榆 (Sanguisorba officinalis)具有凉血止血的功效，其中含有地榆皂苷B, E (sanguisorbin B and E)，是乌苏酸的苷。,从积雪草（Centella asiatica）中 分离到的 积雪草酸：,（3）羽扇豆烷型,羽扇豆烷三萜类E环为五元碳环，且在E环19位有异丙基以构型取代，A/B、B/C、C/D及D/E均为反式。,白桦脂醇(betulin)存在于中草药酸枣仁、桦树皮、棍栏树皮、槐花等中。 白桦脂酸(betulinic acid) 存在于酸枣仁、桦树皮、柿蒂、天门冬
14、、石榴树皮及叶、睡菜叶等中。 羽扇豆醇(lupeol)存在于羽扇豆种皮中。,从白头翁（Pulsatilla chinensis） 中分离得到的 23羟基白桦酸：,第二节、理化性质,一.性状 甾体皂苷元有较好晶形。皂苷多为无定形粉末，味苦而辛辣，对人体黏膜有强烈的刺激性；但甘草皂苷有显著而强的甜味，对黏膜刺激性弱。皂苷还具吸湿性。皂苷多具旋光性，且多为左旋。 二.溶解性 皂苷一般可溶于水,易溶于热水、稀醇，难溶于石油醚、苯、乙醚等亲脂性溶剂。,皂苷在含水正丁醇或戊醇中有较大溶解度，可利用此性质从含皂苷水溶液中用该溶剂进行萃取。 皂苷在提取的过程中会产生次级苷，水溶性下降，溶于中等极性有机溶剂（醇
15、，乙酸乙酯）。 皂苷元：不溶于水，易溶于石油醚、苯、CHCl3、Et2O。,三、表面活性 亲水性基团为糖，亲脂性基团为苷元，当二种基团比例适当时具有表面活性。皂苷水溶液经强烈振摇能产生持久性的泡沫，且不因加热而消失。因此皂苷可作为清洁剂、乳化剂应用。,区别皂苷与蛋白质,蛋白质水溶液,皂苷水溶液,加热,蛋白质凝固，泡沫消失,泡沫不消失,区别甾体皂苷与三萜皂苷,0.1mol/L HCl 5mL,0.1mol/L NaOH 5mL,中药提取液,泡沫高度一样：三萜 皂苷,碱管中泡沫高，保持时间长：甾体皂苷,四.溶血作用,皂苷水溶液能与红细胞壁上的胆甾醇结合，生成不溶于水的分子复合物，破坏了红细胞的正常
16、渗透，使细胞内渗透压增加而发生崩解，从而导致溶血现象，故皂苷又称为皂毒素(saptoxins)。因此，皂苷水溶液不能用于静脉注射或肌肉注射。 但并不是所有的皂苷都具有溶血作用，如以人参二醇为苷元的皂苷则无溶血作用。 溶血指数：指在一定条件下能使血液中红细胞完全溶解的最低皂苷浓度。如甘草皂苷，溶血指数1：4000，溶血性能较强。,五.显色反应,1）浓H2SO4-醋酐（Liebermann-burchard反应）样品溶于冰醋酸，加浓硫酸-醋酐(1:20)，产生黄红 紫 蓝等颜色变化，最后褪色。甾体皂苷也有此反应，但颜色变化快，在颜色变化的最后呈现污绿色；而三萜皂苷颜色变化稍慢，且不出现污绿色。,2
17、）三氯甲烷-浓硫酸反应（Salkowski反应） 试样溶于三氯甲烷、加入浓硫酸，三氯甲烷层显红色或蓝色，浓硫酸层显绿色荧光 3）三氯乙酸（Rosen-Heimer）反应 样品溶液点于滤纸上，喷25%三氯醋酸乙醇溶液，加热至60（甾体皂苷）或100（三萜皂苷），显红色紫色斑点。,4）三氯化锑或五氯化锑（kahlenberg）反应将样品醇溶液点于滤纸上，喷以20%三氯化锑（或五氯化锑）氯仿溶液（不应含乙醇和水）干燥后，60-70 加热，显黄色、灰蓝色、灰紫色斑点，在紫外灯下显蓝紫色荧光。注意：五氯化锑腐蚀性很强，宜少量配置，用后倒掉。,5）冰醋酸-乙酰氯（Tschugaeff） 反应 样品溶于冰醋
18、酸，加乙酰氯数滴及氯化锌 结晶数粒，稍加热，则呈现淡红色或紫红色。 6）氯仿-浓硫酸（salkawski）反应 将样品溶于氯仿，加入浓硫酸后，在氯仿层呈现红色或兰色，硫酸层有绿色荧光出现。,六.沉淀反应,皂苷的水溶液可以和一些金属盐类如铅盐、钡盐、铜盐等产生沉淀。此性质可用于皂苷的分离：先用金属盐使皂苷沉淀下来，分离出来之后在对其分解脱盐。如：三萜皂苷+PbAc2沉淀分解脱铅皂苷 缺点：铅盐吸附力强，容易带入杂质，并且在脱铅时铅盐也会带走一些皂苷，脱铅也不一定能脱干净。 三萜皂苷为酸性皂苷，可用中性PbAc2沉淀，而甾体皂苷则为中性皂苷，须用碱性PbAc2沉淀。,另：甾体皂苷可与甾醇形成分子复
19、合物，甾体皂苷的乙醇溶液可被甾醇（常用胆甾醇）沉淀。除胆甾醇外，凡是含有C3位OH的甾醇都可与皂苷结合生成难溶性分子复合物。若C3-OH为构型，或者是当C3-OH被酰化或生成苷键，就不能与皂苷生成难溶性的分子复合物。生成的分子复合物用乙醚回流提取时，胆甾醇可溶于醚，但皂苷不溶，从而达到纯化皂苷和检查是否有皂苷成分的存在。,皂苷提取通法： 甲醇或乙醇提取。 回收溶剂（约1/3），转溶于水。 水溶液用石油醚，氯仿等萃取。除去油脂和脂溶性成份。 正丁醇萃取，将皂苷转溶出来。与亲水性杂质分离。 回收正丁醇，得粗制总皂苷。,第三节 提取与分离,1.皂苷的提取,其他方法： 先用石油醚脱脂，再用醇类溶剂提取
20、，冷却后，皂苷难溶于冷乙醇而析出。 碱提取、酸沉淀的方法:酸性皂苷的提取，某些酸性皂苷难溶于冷水，易溶于碱性水溶液，采用碱提取、酸沉淀的方法。,2. 皂苷元的提取：1）.在植物组织中将皂苷水解，然后用低极性溶剂提取皂苷元。2）.先用极性溶剂如甲醇、乙醇、丁醇将皂苷提出，再加酸加热水解，滤出水解物，然后用低极性溶剂提取皂苷元。,常用的提取方法,甲醇或乙醇 提取,石油醚等脱脂 正丁醇萃取,总皂苷,大孔 吸附树脂柱,二、精制与分离,（一）分段沉淀法粗皂苷溶于少量的甲醇或乙醇中，逐滴加入乙醚或丙酮至混浊，放置产生沉淀，得极性较大的皂苷。母液继续滴加乙醚或丙酮，至析出沉淀得极性较小的皂苷。,（二）胆固醇
21、沉淀法粗皂苷溶于少量乙醇中，再加入胆固醇的饱和溶液，直至不再析出沉淀（混合后需稍加热），浓集沉淀。用水、乙醇、乙醚依次洗涤，除去糖类、色素、油脂及游离的胆固醇。沉淀干燥，用乙醚连续回流提取。,（三）色谱法,1.分配柱层析法 以硅胶为支持剂，CHCl3-MeOH-H2O，CH2Cl2-MeOH-H2O，EtOAc-EtOH-H2O或水饱和的正丁醇等溶剂系统洗脱。 2.吸附色谱法 吸附剂常用硅胶，适用于分离亲脂性皂 苷元，用混合溶剂洗脱,3.高效液相色谱法以反相键合相RP-18、RP-8或RP-2为填充剂，常用CH3OH-H2O或乙腈-水为洗脱剂。 4.大孔树脂吸附法,大孔吸附树脂法, 甲醇或乙醇提取，回收溶剂，残渣溶于水。 通过大孔树脂。 洗脱； （a）先用少量水洗，洗去糖类及水溶性杂质。 （b）3050%乙醇洗脱皂苷，与黄酮等分离。 将醇洗脱部分减压浓缩，得粗制总皂苷。,
