1、ICS 65.020B04DB 32江 苏 省 地 方 标 准DB 32/ T XXXXXXXX农产品产地环境水中 Hg()的测定 酶联免疫法Determination of Hg () in water of agricultural producing area by enzyme-linked immunosorbent assay（报批稿）XXXX - XX - XX发布 XXXX - XX - XX实施江 苏 省 质 量 技 术 监 督 局 发 布DB32/ T XXXXXXXXI前 言本标准按GB/T 1.1-2009标准化工作导则第1部分：标准的结构及编写的规定编写。本标准由南京
2、农业大学提出。本标准起草单位：南京农业大学、江苏省农业科学院本标准主要起草人：刘凤权、王利民、张存政、王鸣华、华修德、孙远明DB32/ T XXXXXXXX1农产品产地环境水中 Hg()的测定 酶联免疫法1 范围本标准规定了农产品产地环境水中Hg ()的酶联免疫检测方法。本标准适用于农产品产地环境水中Hg ()的在线筛查和快速监测。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和实验方法3 原理采用间接竞争ELISA方法，在微孔
3、板上包被Hg ()包被抗原，检测样品中残留的Hg ()与微孔板上的包被抗原竞争汞抗体，加入酶标羊抗鼠二抗后，显色剂显色，终止液终止反应。用酶标仪测定450nm处吸光值 (OD450)，吸光值与检测样品中的Hg ()残留量成负相关。4 试剂与设备4.1 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，实验用水均为 GB/T 6682 中规定的三级水。4.2 Hg ()酶联免疫检测试剂盒包括阳性参考品、阴性参考品、检测液、Hg ()抗体溶液、酶标二抗溶液、底物溶液、终止溶液和包被有Hg ()包被源的可拆卸96孔板，96孔板真空密封包装。Hg ()酶联免疫检测试剂盒应满足：对农产品产地环境水中Hg ()的检测限位
4、0.001 mg/L；阳性样品的符合率90%，阴性样品的符合率90%，假阴性率5%，假阳性率5%；对Cd (), Pb (),Cr (), As()，Cu (), Zn (), Mn (), Fe ()等重金属离子的交叉反应均小于1%。Hg ()酶联免疫检测试剂盒在4下保存（有效期：180天）。4.3 酶标仪：用于读取测定 OD450 值。5 试样准备采集的水样经过滤后与检测液等体积混合，待测。6 测定6.1 撕开包装袋，根据检测试样数取出一定量的检测微孔条。DB32/ T XXXXXXXX26.2 用检测液将抗体溶液 100 倍稀释，并与样品等体积混合后，按照每孔 50 L 加样，同时设置两
5、孔阴性参考品、两孔阳性参考品对照，并设一孔空白对照（空白对照孔不加抗体溶液）。37孵育 45 min，并洗板。6.3 用检测液将酶标二抗溶液 100 倍稀释，按照每孔 50 L 加样。37孵育 30 min，并洗板。6.4 按照每孔 50 L 加样，加入底物溶液，37孵育 10 min。6.5 按照每孔 25 L 加样，加入终止溶液，并在 5 min 之内测定 OD450 值。7 结果判定对照阳性参考品OD450平均值、阴性参考品OD450平均值和空白孔的结果，根据竞争免疫法的原理及微孔板OD450值，按照如下原则进行结果判定：表 1 检测结果判定表结果判定 判定依据无效 阳性参考品显色 OD450 平均值0.8 或阴性参考品 OD450 平均值0.1阳性 样品 OD450 值与阳性参考品显色 OD450 平均值的比值0.9阴性 样品 OD450 值与阳性参考品显色 OD450 平均值的比值0.9_
