1、实验二 利用高效液相色谱测定混合样品中苯和甲苯,一、目的要求,1掌握高效液相色谱定性和定量分析的原理及方法； 2. 了解高效液相色谱的构造、原理及操作技术； 3熟悉建立分析方法的基本思路。,二、仪器和试剂,岛津液相色谱仪LC-10AT、SPD-10A紫外-可见光检测器、CDT-10AS贮温箱、C18色谱柱、微量注射器10ul；溶液：苯标准液；甲苯标准液；苯、甲苯混合标准溶液：,三、操作步骤,1、最佳分离条件的选择启动仪器，先注入5微升的甲醇流动相，观察检测器当峰斜率小于1000是，设定流动相甲醇含量为60%，注入5微升的苯与甲苯混合液，观察检测器显示的两峰的保留时间及分离效果。双峰显示完毕后，
2、改变流动相甲醇含量为80%，观察检测器显示的两峰保留时间及分离效果。,1色谱条件优化,由上图可知，当甲醇的含量为85%时，能将两者分开，且时间较短，因此可选甲醇含量为85%作为实验条件。,2苯、甲苯定性分析,在最佳分离条件下，用10L微量注射器，分别注射5.0L苯、甲苯的标准溶液，观察记录保留时间，确定苯和甲苯的峰,3苯、甲苯定量分析,在最佳的分离条件下，用10L微量注射器，分别注射5.0L的0.2L/m L、2L/m L、4L/m L、10L/m L的混合标准溶液（各重复实验2次），再分别测定苯和甲苯的峰面积，求出平均值，以峰面积对浓度作图，作出标准曲线。在最佳的分离条件下，用10L微量注射器，分别注射5.0L的试样（重复进样2次），观察记录保留时间和峰面积。根据峰面积在工作曲线上查出苯和甲苯待测夜的浓度，取两次平均值为试样中苯和甲苯的含量。,苯、甲苯混合标准溶液浓度分别为：1 ul/ml, 2 ul/ml,5 ul/ml, 10 ul/ml。,苯,甲苯,
