1、第十二节 单核细胞增多症李斯特氏菌检验 (Listeria monocytogenes),简称单李菌，胞内寄生菌。 人的感染主要由食物为媒介，在公共卫生上至关重要。,健康的人一般并不会因感染李氏杆菌而患病。但是一些身体免疫力低下的人, 如重病患者、孕妇和老年人、新生儿、和慢性病患者等却由于抵抗力差而很容易受感染； 该细菌能够在人体的大肠中迅速繁殖, 通过血液系统进入大脑和胎盘, 引起脑膜炎和流产。,Schlech 在1983年报道了加拿大1982年发生的一次李氏杆菌病爆发流行(7个成年人和34个产妇发病)的实验调查结果。 从一患者家中冰箱取得的卷心菜丝分离到李氏菌4b型,该型菌与从患者血中分得
2、的李氏菌的菌型相同。而用于制备该菜丝的卷心菜，又系生长于曾用已知患过羊李氏菌病羊群的混合生肥料施过肥的菜地，由此清楚的证明了该患者的发病确是因吃了带有李氏菌的卷心菜所制备的菜丝所引起的，从而使李氏菌却是一种极危险的食物中毒菌的认识得到了进一步的公认。,李氏杆菌食物中毒的记载,2000年法国共发现了9 名因食用熟肉制品而感染了李氏杆菌的患者, 其中两人已经死亡。死者中一位是75 岁老人, 另一位是新生儿。新生儿是由于母亲在孕期食用受李氏杆菌污染的食品而遭受感染的。经过调查, 法国卫生部门终于发现古德雷食品公司生产的熟肉酱和猪舌是引发这次食品污染事件的罪魁祸首。为了安全起见, 法国卫生部门下令从商
3、场货架上撤出古德雷食品公司生产的所有熟肉制品。,2008年8月加拿大爆发李氏杆菌疫情，共报道41宗病例，并导致6人死亡。已死亡的六人，经化验确是在食用枫叶公司产品后感染李氏杆菌。污染病菌经检测与确诊患者体内李氏杆菌菌株的遗传特征相同。加拿大食品检验局确认，造成全国性李氏杆菌疫情爆发的污染源是枫叶公司生产的即食肉类。枫叶公司主要生产不需烹调即可食用的肉类产品，包括烘烤牛肉及腌渍牛肉等。这些肉类产品多用做三明治。,该公司首席执行官迈克尔麦凯恩说，工厂的两台切肉机的零件可能受到李氏杆菌的“深度”污染，尽管工人经常清洗机器，但还是无法避免肉制品被污染。,2008年9月法国布瓦塞奶酪公司日前在其生产的奶
4、酪中检测出了李氏杆菌，为此公司决定召回已上市销售的数千盒奶酪。布瓦塞奶酪公司年产奶酪约300吨。该公司发言人表示，受到李氏杆菌污染的奶酪有几百盒，但为防万一，公司共召回了5000盒奶酪。这些奶酪主要在法国各地销售，少量销往英国、比利时和德国。,2008年11月，法国“南方水牛”食品公司生产的奶酪被检测出李氏杆菌，该公司决定召回已经上市的数百盒问题奶酪以防万一。 该公司称，法国动物检疫部门在对该公司生产的一批奶酪进行检查时，发现其中含有李氏杆菌，这些奶酪从月日起被投入法国市场销售。,2009年4月由于法国市场上由意大利一家食品公司生产的戈尔贡佐拉奶酪检测出李氏杆菌，法国食品总局11日下令将其召回
5、。 报道说，这些奶酪由意大利Dolcissimo公司生产，在法国部分超市有售。在检测出李氏杆菌后，食品总局立即通知了销售商，要求他们将问题奶酪下架或召回处理。,一、分类,产单核细胞李氏杆菌 L. monocytogenes 无害李氏杆菌 L. innocua 伊氏李氏杆菌 L. ivanovii 塞氏李氏杆菌 L. seeligeri 韦氏李氏杆菌 L. welshimeri 脱硝化李氏杆菌 L. denitrficans 格氏李氏杆菌 L. grayic 麦氏李氏杆菌 L. murrayi,二、感染对象和途径,家畜、家禽均可感染，鼠类是主要带菌者。 病畜表现神经症状、妊畜流产、血液中单核细胞
6、增多 。 成人脑膜炎，新生儿脑膜炎（10%） 本病为散发性，一般只有少数发病，但病死率较高。,三、形态与染色,G+ ，两端钝圆的短小杆菌，单在、呈字排列、或成从排列；,无芽胞、无荚膜， 2025：4根周身鞭毛； 37 ：多数1根鞭毛。 R型菌多为长丝状。,三、培养特性,需氧或兼性厌氧。营养不高；对食盐耐受力很强。 血液葡萄糖琼脂：圆形、光滑、淡蓝色、透明、露滴状菌落，狭窄 溶血，有菌落下溶血。4 可生长 故称“冰箱菌”麦康凯上不生长半固体穿刺，呈云雾状,四、生化特性,可分解多种糖；产酸不产气 接触酶： 氧化酶 ,产单核细胞李氏杆菌与猪丹毒杆菌的鉴别要点,李氏杆菌与食物的关系,对热耐受力强，可耐
7、受71，15s。 能在10%氯化钠培养基中生长。 能耐受40%的胆汁。,污染对象,乳及乳制品：能在冰箱中增殖，俗成冰箱菌。肉品禽、蛋品：鸡常严重污染，可高达10-60%水产品,李氏增菌液,成分 胰胨 5 g 多价胨 5 g 酵母膏 5 g 氯化钠 20 g 磷酸二氢钾 1.35 g 磷酸氢二钠 12 g 七叶苷 1 g 蒸馏水 1000 ml 制法 将上述成分加热溶解，调pH 至7.27.4，分装，121，15min灭菌。,李氏液（LB1）225 ml中加入 1%萘叮酮酸（用0.05 mol/L氢氧化钠溶液配制） 0.45 ml 1%盐酸丫啶黄（用灭菌蒸馏水配制） 0.27 ml 李氏液（LB
8、2）200 ml中加入： 1%萘叮酮酸 0.40 ml 1%盐酸丫啶黄 0.50 ml 无菌分装于10 ml大试管中。,EB增菌液,成分 胰胨 17 g 多价胨 3 g 酵母膏 6 g 氯化钠 5 g 磷酸氢二钾 2.5 g 葡萄糖 2.5 g 蒸馏水 1000 ml 盐酸丫啶黄 15 mg/L 萘啶酮酸 40 mg/L,除丫啶黄和萘啶酮酸外，其余成分加热混合，pH值7.2，121，15 min灭菌。 使用前加入丫啶黄和萘啶酮酸过滤除菌后加入。,改良的Mc Bride琼脂（MMA）,成分 胰胨 5 g 多价胨 5 g 牛肉膏 3 g 葡萄糖 1 g 氯化钠 5 g 磷酸氢二钠 1 g 苯乙醇
9、2.5 ml 无水甘氨酸 10 g 氯化鲤 0.5 g 琼脂 15 g 蒸馏水 1000 ml,制法 将上述成分加热搅拌均匀，调pH值7.27.4，分装121 ，15 min灭菌。30 ，2448 h，形成灰蓝或蓝色的菌落。,SIM 动力培养基,成分 胰胨 20 g 多价胨 6 g 硫酸铁铵 0.2 g 硫代硫酸钠 0.2 g 琼脂 3.5 g 蒸馏水 1000 ml,制法 将上述成分加热混匀，调pH值7.2，分装小试管，121 ，15 min灭菌。李氏杆菌成伞状生长。,检样25g（ml）,EB增菌液225ml,LB1增菌液225ml,LB2增菌液10ml,选择性培养基（MMA）,TSI琼脂,
10、SIM动力培养基,TSA-YE培养基,30，48h,30，24h,30，24h,30，24h,25,2d5d（伞状）,革兰氏染色,MRVP试验,硝酸盐还原试验,过氧化氢酶试验,甘露醇,木醇,鼠李糖,七叶苷,溶血试验,小鼠致病力试验,0.1mL,产单核细胞李氏杆菌与猪丹毒杆菌的鉴别要点,李氏杆菌污染的预防,乳与乳制品，肉与肉制品以及生拌凉菜为常被本菌污染的食品，应予特别注意。在4本菌仍能生长。本菌对热的耐受力比一般无芽孢杆菌强。本菌对氯化钠耐受力很强，故对盐腌食品应加以注意。,病料的微生物学诊断,肝、脾、脑组织等涂片、革兰氏染色、镜检，可见G的呈字排列的小杆菌；病料乳剂接种在血液葡萄糖琼脂，可长出露滴状菌落，溶血；病料眼内接种家兔或豚鼠，1天后发生结膜炎，不久就发生败血症死亡；妊娠2周的动物被接种后可发生流产。,
