牛磺酸对苯扎氯铵损伤大鼠眼角膜内皮细胞无保护作用_葛健.pdf

1、DOI:10.12300/j.issn.1674-5817.2022.034实验动物与比较医学 Laboratory Animal and Comparative Medicine Feb.2023,43(1)牛磺酸对苯扎氯铵损伤大鼠眼角膜内皮细胞无保护作用葛 健1,孙静芬1,吴永杰2(1.上海交通大学医学院附属瑞金医院眼科,上海 200025;2.上海交通大学医学院附属瑞金医院,上海市高血压研究所,上海市高血压重点实验室,上海 200025)摘要 目的观察 2%牛磺酸对苯扎氯铵损伤大鼠眼角膜内皮细胞的保护作用。方法取 3 只 SPF 级 SD 大鼠（共6 只眼），每只眼制备 6 块角膜内皮层

2、和后弹力层组织片，随机分为 3 组。用组织块培养法培养大鼠眼角膜内皮细胞1 d 后，对照组仅加入 2%牛磺酸溶液，实验组在加入 2%牛磺酸溶液后再注入质量分数分别为 0.01%和 0.03%的苯扎氯铵溶液。继续培养 1、2、4、5、6、8 d 后倒置显微镜下观察各组大鼠眼角膜内皮细胞的生长情况，并用 Wright染色后光学显微镜下观察内皮细胞形态。结果用 0.01%苯扎氯铵和 2%牛磺酸处理 1 d 的实验组大鼠眼角膜组织块边缘出现多角形的内皮细胞，胞体透明；2 d 后多角形细胞增多，但没有出现细胞间的融合生长现象；3 d 后多角形细胞减少，内皮细胞未见核分裂象；4 d 后可见内皮细胞核着色加

3、深，多角形细胞少见；5 d 后内皮细胞数量减少，出现细胞体固缩死亡现象。用 0.03%苯扎氯铵和 2%牛磺酸处理 1 d 的实验组未观察到内皮细胞生长，胞体稀少散在。仅用 2%牛磺酸处理的对照组 1 d 后组织块边缘出现多角形内皮细胞和少数类内皮多边形细胞；3 d 后组织块边缘多角形细胞增多，而且有逐渐融合生长的现象；5 d 后内皮细胞个数增多，而且细胞外形多呈六角形；8 d 后内皮细胞形成大片状，胞体呈六角形或类圆形，出现细胞核分裂象。左右眼角膜内皮细胞生长均匀，在 0.01%和 0.03%苯扎氯铵处理的实验组以及对照组内左右眼内皮细胞形态均无明显差别。结论2%牛磺酸对被不同浓度的苯扎氯铵液

4、损伤的大鼠眼角膜内皮细胞无保护作用。关 键 词 牛磺酸；苯扎氯铵；眼角膜内皮细胞；组织培养；SD 大鼠中图分类号 R-332；R779.1 文献标志码 A 文章编号 1674-5817（2023）01-0039-05Taurine Has no Protective Effect on Rat Corneal Endothelial Cells Injured by Benzalkonium ChlorideGE Jian1,SUN Jingfen1,WU Yongjie2(1.Depavtment of Ophthalmology,RuiJin Hospital,Shanghai Jiao

5、Tong University Medical school,Shanghai 200025,China;2.Shanghai Institute of Hypertension,RuiJin Hospital,Shanghai Jiao Tong University Medical School,Shanghai 200025,China)Correspondence to:WU Yongjie,E-mail:ABSTRACT Objective To observe the protective effect of 2%taurine on corneal endothelial cel

6、ls injured by benzalkonium chloride in rats.Methods Six piece of corneal endodermis and elastic layer tissue slices were prepared from 6 eyes of 3 SPF SD rats and randomly divided into three groups.The corneal endothelial cells of rats were cultured by tissue block culture for 1 day,then the control

7、 group cells were added with 2%taurine solution,while the experimental group cells were added with 2%taurine solution and 0.01%or 0.03%benzalkonium chloride solution.After 1,2,4,5,6 and 8 days of continuous culture,the growth of corneal endothelial cells in each group was observed under an inverted

8、microscope,and the morphology of endothelial cells was observed under an optical microscope after Wright staining.Results Treated with 0.01%benzalkonium chloride and 2%taurine for 1 day,polygonal endothelial cells appeared on the edge of corneal tissue mass,and the cells were transparent.After 2 day

9、s,the number of 人类疾病动物模型：药学专题 Animal Model of Human Disease:Pharmacology第一作者 葛 健（1964），男，副主任医师，研究方向：眼表疾病的临床和机制研究。E-mail：；孙静芬（1967），女，博士，副主任医师，研究方向：青光眼的临床和视神经保护机制研究。E-mail：通信作者 吴永杰（1967），男，副研究员，研究方向：动物实验和实验动物研究。E-mail：39实验动物与比较医学 Laboratory Animal and Comparative MedicineFeb.2023,43(1)polygonal cells

10、 increased,and there was no fusion growth between cells.After 3 days,the number of polygonal cells decreased and no mitotic signs were observed in endothelial cells.After 4 days,the endothelial nuclei were deeply stained and polygonal cells were rare.After 5 days,the number of endothelial cells decr

11、eased,and cell body shrinkage and death occurred.In the experimental group treated with 0.03%benzalammonium chloride and 2%taurine for 1 day,no endothelial cell growth was observed and the cells were sparsely-scattered.In control group,polygonal endothelial cells and a few endothelium-like polygon c

12、ells appeared at the edge of tissue blocks after 1 day.After 3 days,the number of polygonal cells at the edge of tissue blocks increased,and there was a phenomenon of gradual fusion growth.After 5 days,the number of endothelial cells increased,and the cells were mostly hexagonal.After 8 days,the end

13、othelial cells formed large sheets,the cell bodies were hexagonal or round,and the nuclei were divided.The growth of corneal endothelial cells in the left and right eyes was uniform,and there was no significant difference in the morphology of the left and right eye endothelial cells in the 0.01%and

14、0.03%benzalammonium chloride treatment groups and the control group.Conclusion 2%taurine had no protective effect on corneal endothelial cells injured by benzalammonium chloride.Key words Taurine;Benzalkonium chloride;Corneal endothelial cells;Tissue culture;SD rats对 于 眼 结 膜 和 角 膜 疾 病 及 部 分 内 眼 疾 病，

15、目 前 最主 要 的 用 药 治 疗 方 式 是 眼 药 水 滴 用。很 大 部 分 眼 药 水都 添 加 防 腐 剂，其 中 苯 扎 氯 铵 是 被 广 泛 使 用 的 防 腐 剂之 一。苯 扎 氯 铵 是 一 种 具 有 阳 离 子 表 面 活 性 的 广 谱 杀菌 剂，能 改 变 菌 体 细 胞 膜 的 通 透 性，使 菌 体 细 胞 质 内的 物 质 外 渗，阻 碍 菌 体 细 胞 代 谢，从 而 起 到 灭 菌 作 用。因 为 在 低 浓 度 时 有 较 好 的 安 全 性 和 有 效 性，苯 扎 氯 铵一 直 以 低 浓 度 形 式 被 用 作 滴 眼 液 的 防 腐 剂，至 今

16、已 有近 70 年历史 1。近 年 来，临 床 上 广 泛 使 用 含 有 苯 扎 氯 铵 的 眼 科 药物，其 对 角 膜 和 结 膜 的 潜 在 损 害 也 逐 渐 引 起 人 们 的 重视。临 床 上 时 常 可 以 观 察 到 眼 科 药 物 造 成 的 细 点 状 的角 膜 上 皮 炎，或 者 因 长 期 用 药 造 成 的 角 膜 组 织 糜 烂 和眼 内 外 眦 皮 肤 溃 烂，以 及 使 用 眼 药 水 造 成 的 眼 结 膜 长期 充 血 和 眼 干 涩、刺 痛 等 临 床 表 现。研 究 发 现，低 浓度 的 苯 扎 氯 铵 对 角 膜 细 胞、角 膜 神 经 有 损 伤，

17、对 眼 表组 织 有 毒 性 反 应 2；在 结 膜 囊 内 滴 用 含 苯 扎 氯 铵 的 眼药 水 后，药 物 和 苯 扎 氯 铵 都 能 以 渗 透 压 梯 度 和 主 动 运输 方 式 进 入 眼 球 内，从 而 对 球 内 组 织 产 生 作 用，其 中苯 扎 氯 铵 可 能 会 损 伤 眼 组 织。因 此，如 何 减 少 和 抑 制眼药水中防腐剂对眼组织的损害就显得尤为重要。牛 磺 酸 又 称 氨 基 乙 磺 酸，最 早 从 牛 黄 中 分 离 得到 3。牛 磺 酸 广 泛 存 在 于 动 物 的 心 肌、骨 骼 肌、神 经组 织 和 眼 组 织 中，尤 以 大 脑 和 心 肌 中

18、 的 浓 度 最 高。牛磺 酸 能 抑 制 神 经 递 质 的 传 导，维 持 神 经 细 胞 膜 的 稳 定性 4-5，也 能 帮 助 钠、钾、钙 在 细 胞 内 外 运 动，并 且在 眼、血 管 和 胆 囊 中 具 有 解 毒 和 抗 氧 化 作 用 6-8。本研 究 拟 通 过 使 用 质 量 分 数 为 2%的 牛 磺 酸，观 察 其 对 苯扎氯铵损害的大鼠眼角膜内皮细胞生长有无保护作用。由 于 临 床 上 常 使 用 的 眼 药 水 一 般 含 质 量 分 数 为0.003%0.03%的 苯 扎 氯 铵，因 此 本 研 究 设 计 用 0.01%和 0.03%的 苯 扎 氯 铵 溶

19、液 损 伤 大 鼠 眼 角 膜，同 时 加 入含 2%牛 磺 酸 溶 液 的 大 鼠 眼 角 膜 内 皮 细 胞 培 养 液，以 此观 察 角 膜 内 皮 细 胞 的 生 长 情 况，从 而 判 断 牛 磺 酸 是 否对 日 常 使 用 浓 度 的 苯 扎 氯 铵 损 伤 的 眼 角 膜 内 皮 细 胞 有保护作用。1材料与方法1.1实验动物SPF 级 SD 大 鼠 3 只，10 周 龄，1 雌 2 雄，体 质 量250280 g，购 自 浙 江 维 通 利 华 实 验 动 物 技 术 有 限 公司 SCXY（浙）2019-0001。大 鼠 饲 养 于 上 海 交 通 大学 医 学 院 附 属

20、 瑞 金 医 院 的 实 验 动 物 设 施 SYXK（沪）2011-0113 内。本 研 究 中 动 物 实 验 方 案 经 上 海 交 通 大学 医 学 院 附 属 瑞 金 医 院 动 物 实 验 伦 理 委 员 会 审 核 批 准 R.J.（Z）2019011，动物实验操作遵循3R 原则。1.2主要试剂EDTA/F12 混 合 培 养 液（体 积 比 为 11）、4-羟 乙基 哌 嗪 乙 磺 酸（HEPES）和 胎 牛 血 清 购 自 美 国 Gibco 公司；牛 磺 酸 结 晶 购 自 永 安 药 业 股 份 有 限 公 司（批 号：20200512），使 用 时 按 照 质 量 比

21、为 2100 溶 于 蒸 馏 水，配 制 成 2%的 牛 磺 酸 溶 液；苯 扎 氯 铵 购 自 运 佳 黄 浦 制 药有限公司（批号：200801），使用时按照质量比为0.01 100 和 0.03100 溶 于 蒸 馏 水，配 制 成 0.01%和 0.03%的苯扎氯铵溶液。1.3眼角膜组织制备用 3%苯 巴 比 妥 溶 液，按 1 mL/kg 剂 量，经 尾 静 脉40实验动物与比较医学 Laboratory Animal and Comparative Medicine Feb.2023,43(1)注 射 麻 醉 大 鼠；无 菌 条 件 下 摘 除 大 鼠 眼 球，用 灭 菌 生理 盐

22、 水 冲 洗 3 次，在 超 净 工 作 台 内 用 眼 科 剪 刀 在 放 大镜 下 取 大 鼠 眼 角 膜，放 入 含 100 U/mL 青 霉 素 和 100 g/mL 链霉素的 D-PBS 溶液中，漂洗3 次后备用。1.4角膜内皮细胞培养液制备用 体 积 比 为 11 的 EDTA/F12 混 合 液 培 养 大 鼠 眼角 膜 组 织，内 含 10 mmol/L HEPES、200 mL/L 胎 牛 血清、100 mL/L 链 霉 素、100103 U/L 青 霉 素 和 2.5 mg/L两性霉素B，调整pH 值为7.27.4。1.5眼角膜内皮细胞培养和药物处理在 超 净 工 作 台

23、内，用 显 微 镜 镊 子 在 显 微 镜 下 撕 下大 鼠 眼 角 膜 的 内 皮 层 和 后 弹 力 层，每 只 眼 制 备 6 块 组织 片。将 撕 取 的 每 一 块 组 织 片 的 内 皮 细 胞 层 面 朝 上，平 放 于 12 孔 培 养 板 的 一 孔 内，每 行 以 3 孔 排 列。3 只 大鼠 的 左 右 眼 组 织 均 分 开 放 在 两 块 培 养 板 上，使 每 行 组织 都 是 取 自 同 一 只 大 鼠 的 眼 角 膜，而 每 一 列 组 织 均 分属 3 只 不 同 大 鼠 的 同 侧 眼 角 膜。先 将 每 块 角 膜 组 织 置于 37 培 养 箱 中 干

24、燥 15 min，然 后 加 入 已 制 备 的 角 膜内 皮 细 胞 培 养 液，继 续 放 置 在 37、5%CO2培 养 箱 内培 养；1 d 后，在 更 换 培 养 液 时，左 右 每 只 眼 的 角 膜 内皮 细 胞 按 列 分 别 一 次 性 加 入 2%牛 磺 酸 溶 液（第 1 列，作 为 对 照 组）、2%牛 磺 酸 溶 液 和 0.01%苯 扎 氯 铵 溶 液（第 2 列，作为实验组 1）、2%牛磺酸溶液 和 0.03%苯扎氯 铵 溶 液（第 3 列，作 为 实 验 组 2），更 换 培 养 液 后 调整 pH 值为7.4。此后，培养液每天换1 次，共培养8 d。1.6细胞

25、观察和拍照角 膜 组 织 培 养 12 h 后，每 天 用 倒 置 显 微 镜 观 察 角膜 内 皮 细 胞 的 生 长 情 况。在 加 药 培 养 后 的 第 1、2、4、5、6、8 天，分 别 吸 取 部 分 角 膜 内 皮 细 胞，用 40 g/L 多聚 甲 醛 溶 液 固 定，然 后 行 Wright 染 色，在 光 学 显 微 镜（40 倍）下观察细胞形态，并摄片记录。2结果2%牛 磺 酸 溶 液+0.01%苯 扎 氯 铵 液 处 理 的 实 验 组 1中，第 1 天 组 织 块 边 缘 均 出 现 多 角 形 的 内 皮 细 胞，胞体 透 明；第 2 天 可 见 多 角 形 细 胞

26、 继 续 增 多，但 未 出 现细 胞 间 融 合 现 象；第 3 天 出 现 多 角 细 胞 减 少，内 皮 细胞 未 见 核 分 裂 象；第 4 天 可 见 内 皮 细 胞 核 着 色 加 深，多角 形 细 胞 少 见；第5 天 内 皮 细 胞 数 量 减 少，并 出 现 细 胞体 固 缩 死 亡 现 象（图1A C）。2%牛 磺 酸 溶 液+0.03%苯 扎 氯 铵 溶 液 处 理 的 实 验组 2 中，第 1 天 及 以 后 均 未 观 察 到 有 内 皮 细 胞 生 长，细胞体稀少散在（图 1D）。只 含 2%牛 磺 酸 而 未 加 苯 扎 氯 铵 的 对 照 组 中，第 1天 组

27、织 块 边 缘 均 出 现 多 角 形 内 皮 细 胞 和 少 数 类 内 皮 多边 形 细 胞；第 2、3 天 可 见 组 织 块 边 缘 的 多 角 形 细 胞 增多，而 且 有 逐 渐 融 合 的 现 象；第 4 天 内 皮 细 胞 增 多，胞 体 规 则 且 多 为 六 角 形，内 皮 细 胞 成 片 状；第 5 天 内皮 细 胞 更 加 融 合 成 片，开 始 出 现 核 分 裂 现 象；第 8 天内 皮 细 胞 形 成 大 片 状，胞 体 呈 六 角 形 或 类 圆 形，细 胞核分裂象多见（图1E G）。无 论 实 验 组 还 是 对 照 组，左 右 眼 之 间 角 膜 内 皮 细

28、胞生长速度和细胞形态均相似，无明显差异。3讨论牛 磺 酸 是 一 种 含 硫 氨 基 酸，在 眼 科 临 床 上 被 用 于准 分 子 激 光 角 膜 切 削 术（photorefractive keratectomy，PRK）和 准 分 子 激 光 角 膜 原 位 磨 镶 术 手 术（laser-in situ keratomileusis，LASIK）后 的 保 护 药 液，能 抑 制 角膜 组 织 中 脂 质 过 氧 化 水 平，利 于 角 膜 伤 口 的 愈 合 9。另 外，牛 磺 酸 能 在 体 外 诱 导 脐 血 间 质 干 细 胞 向 感 光 细胞 和 表 达 视 紫 红 质 的

29、 细 胞 分 化 10。牛 磺 酸 在 眼 部 能 抑制 牛 晶 状 体 上 皮 细 胞 的 凋 亡 11；临 床 上 常 用 4%5%的 牛 磺 酸 治 疗 慢 性 结 膜 炎 和 白 内 障 12。安 全 剂 量 的 牛磺 酸 可 注 入 玻 璃 体 腔，增 加 眼 的 视 敏 度 13。故 而，一定浓度的牛磺酸对眼组织有益而无毒害。苯 扎 氯 铵 对 眼 角 膜 组 织 具 有 毒 性 损 伤，仅 在0.005%时 即 可 迅 速 破 坏 兔 眼 角 膜 上 皮 细 胞 的 屏 障 功能 14，0.1%时 甚 至 可 以 破 坏 眼 角 膜 内 皮 屏 障 15。苯扎 氯 铵 对 眼 组

30、 织 的 毒 性 损 害 与 其 浓 度（质 量 分 数）成正比，也和苯扎氯铵作用眼组织的时间成正比。本 实 验 中 使 用 苯 扎 氯 铵 的 一 个 质 量 分 数 为 0.01%，是 临 床 上 使 用 0.02%拉 坦 前 列 素 类 药 物 所 含 苯 扎 氯 铵浓 度 的 一 半。拉 坦 前 列 素 在 治 疗 青 光 眼 时 可 致 部 分 病人 的 角 膜 上 皮 细 胞 出 现 点 状 脱 落，造 成 角 膜 上 皮 损 伤而 停 止 使 用。另 外，0.1%玻 璃 酸 钠 滴 眼 液（国 内 生产）含 苯 扎 氯 铵 的 质 量 分 数 是 0.03%。因 此，本 研 究中

31、实验组选用两个浓度的苯扎氯铵是合适的。在 0.01%苯 扎 氯 铵+2%牛 磺 酸 的 实 验 组 中，前 2 d可 见 组 织 块 边 缘 出 现 多 角 形 的 内 皮 细 胞，胞 体 透 明，说 明 内 皮 细 胞 开 始 有 生 长 现 象；第 3 天，这 个 实 验 组出 现 多 角 内 皮 细 胞 减 少，此 时 内 皮 细 胞 已 开 始 停 止 生长；第 4 天，内 皮 细 胞 核 着 色 加 深，多 角 形 细 胞 少 见，内 皮 细 胞 数 量 减 少；第 5 天，出 现 内 皮 细 胞 胞 体 固 缩死 亡 现 象。由 此 可 见 0.01%苯 扎 氯 铵 对 所 培 养

32、 的 大 鼠内 皮 细 胞 的 生 长 有 抑 制 作 用，同 时 2%牛 磺 酸 溶 液 对 受41实验动物与比较医学 Laboratory Animal and Comparative MedicineFeb.2023,43(1)损的内皮细胞无保护作用。在 未 加 苯 扎 氯 铵、仅 加 2%牛 磺 酸 的 对 照 组 中，第1 天 组 织 块 边 缘 出 现 多 角 形 内 皮 细 胞 和 少 数 类 内 皮 多 边形 细 胞；第 2、3 天 组 织 块 边 缘 多 角 形 内 皮 细 胞 增 多，而 且 有 逐 渐 融 合 的 现 象；第 4 天 内 皮 细 胞 增 多，而 且内 皮

33、细 胞 外 形 多 呈 六 角 形；到 第 8 天 内 皮 细 胞 形 成 大片 状，胞 体 呈 六 角 形 或 类 圆 形，出 现 细 胞 核 分 裂 象。对 照 组 中 大 鼠 眼 角 膜 内 皮 细 胞 能 够 正 常 生 长，这 和 之前 报 告 认 为 2%牛 磺 酸 对 大 鼠 内 皮 细 胞 的 生 长 有 益 是 相符 16。本 实 验 结 果 证 明 2%牛 磺 酸 对 大 鼠 的 眼 角 膜 内皮细胞生长有促进作用。实 验 过 程 中，对 各 组 大 鼠 在 所 选 择 实 验 观 察 和 记录 时 间 点 都 做 了 记 录，从 而 能 够 横 向 对 比。例 如，在未

34、加 苯 扎 氯 铵 的 对 照 组 中，第 4 天 的 组 织 块 边 缘 多 角形 内 皮 细 胞 增 多，而 且 逐 渐 融 合 成 片 生 长；而 在 加 有0.01%苯 扎 氯 铵 的 实 验 组 中，第 4 天 的 眼 角 膜 内 皮 细 胞核 着 色 加 深，多 角 形 细 胞 少 见，内 皮 细 胞 数 量 减 少。这 说 明 没 有 受 到 苯 扎 氯 铵 损 害 的 眼 角 膜 内 皮 细 胞 在 含有 2%牛 磺 酸 的 环 境 中 生 长 良 好，而 在 加 有 0.01%苯 扎氯 铵 后 眼 角 膜 内 皮 细 胞 出 现 生 长 停 止 的 现 象，提 示 2%牛 磺

35、 酸 本 身 对 眼 角 膜 细 胞 有 益 无 害，但 对 遭 受0.01%苯扎 氯 铵 损 害 的 眼 角 膜 内 皮 细 胞 并 没 能 提 供 足 够 的 保 护。本 实 验 中，另 外 设 置 有 0.03%苯 扎 氯 铵+2%牛 磺酸 的 实 验 组，在 第1 天 未 能 观 察 到 内 皮 细 胞 生 长，提 示较 高 浓 度 的 苯 扎 氯 铵 对 眼 组 织 的 损 害 作 用 更 强，而 且2%牛 磺 酸 不 能 帮 助 受 损 细 胞 充 分“解 毒”，因 此 这 些细 胞 失 去 了 正 常 生 长 能 力 而 死 亡。需 要 说 明，目 前 临床 上 眼 药 水 含

36、苯 扎 氯 铵 的 质 量 分 数 为 0.003%0.03%，今 后 的 研 究 中 可 进 一 步 设 置 更 低 的 苯 扎 氯 铵 浓 度，以得 出 更 加 严 谨 的 结 论，为 临 床 应 用 提 供 理 论 基 础。综 上，苯 扎 氯 铵 作 为 眼 科 药 物 的 防 腐 剂 以 低 浓 度形 式 在 眼 科 临 床 上 被 广 泛 使 用，其 对 眼 球 组 织 可 造 成一 定 的 损 伤，这 种 组 织 损 伤 具 有 使 用 时 间 和 剂 量 的 叠加 效 应，并 且 难 以 用 2%牛 磺 酸 防 治。因 此，在 临 床 上应 告 知 患 者 合 理 规 范 地 使

37、 用 眼 科 药 物，尽 量 减 少 苯 扎氯铵对眼的伤害。注：AC，用 2%牛磺酸+0.01%苯扎氯铵处理的实验组 1 大鼠眼角膜内皮细胞：A 显示培养第 2 天，多角形细胞增多，但没有细胞间的融合现象；B 显示培养第 4 天，可见多角形细胞少，细胞固缩，内皮细胞稀少；C 显示培养第 5 天，内皮细胞数减少，出现细胞体固缩死亡现象。D，用 2%牛磺酸+0.03%苯扎氯铵处理的实验组 2 大鼠眼角膜内皮细胞，培养第 1 天，内皮细胞无生长。EG，用 2%牛磺酸（未加入苯扎氯铵）处理的对照组大鼠眼角膜内皮细胞：E 显示培养第 2 天，出现多量的多角形细胞，而且有细胞聚集生长现象；F 显示培养第

38、4 天，可见多量的多角细胞，内皮细胞增多，胞体规则且多呈六角形，内皮细胞成片状；G 显示培养第 5 天，可见细胞核染色质浓染，具核分裂象。Note：A-C,corneal endothelial cells of experimental group 1 treated with 2%taurine+0.01%benzalkonium chloride:A showed on the second day of culture,the number of polygonal cells increased,while there was no fusion growth between cel

39、ls;B showed on the 4th day of culture,polygonal cells pycnosis,the number of polygonal cells and corneal endothelial cells were rare;C showed after on the 5th day of culture,the number of endothelial cells decreased,and cell body shrinkage and death occurred;D,corneal endothelial cells of experiment

40、al group 2 treated with 2%taurine+0.03%benzalkonium chloride,after cultured 1 day,no endothelial cell growth was observed.E-G,corneal endothelial cells of control group treated with 2%taurine:E showed that on the second day of culture,a large number of polygonal cells appeared,and there was cell agg

41、regation and growth;F showed that on the 4th day of culture,a large number of polygonal cells and endothelial cells were observed,the cell body was regular and mostly hexagonal,and the endothelial cells were lamellar;G showed that on the 5th day of culture,the nuclear chromatin was heavily stained a

42、nd the mitotic phase was observed.图 1 大鼠眼角膜内皮细胞培养生长情况和细胞形态（Wright 染色，40）Figure 1 Growth and morphology of rat corneal endothelial cells（Wright staining，40）42实验动物与比较医学 Laboratory Animal and Comparative Medicine Feb.2023,43(1)医学伦理声明 Medical Ethics Statement本研究涉及的动物实验均已通过上海交通大学医学院附属瑞金医院伦理委员会审核批准No.R.J.

43、(Z)2019011。所有实验过程均遵照中国实验动物相关法律法规条例进行。All experimental animal protocols in this study were reviewed and approved by Experimental Animal Ethics Committee of RuiJin Hospital,Shanghai Jiao Tong University Medical school(Approval Letter No.R.J.(Z)2019011).All experimental procedures were performed in acc

44、ordance with the requirements of laws and regulations in China related to experimental animals,including Animal Management Regulations(01/03/2017),Laboratory Animal:Guideline for Ethical Review of Animal Welfare(GB/T 35892-2018),and so on.作者贡献 Author Contribution 葛健、孙静芬和吴永杰共同讨论确立议题，确定实验方法和对实验结果的分析，共

45、同讨论研究文章的修改工作；吴永杰主要负责动物实验；葛健完成文章写作和修改。利益声明 Declaration of Interest 所有作者均声明本文不存在利益冲突。参考文献 References1 陈祖基.眼科临床药理学M.2 版.北京:化学工业出版社,2011.CHEN Z J.Clinical pharmacology of ophthalmology M.2 ed.Beijing:Chemical Industry Press,2011.2 CHENG L,CHEN L,WEI X B,et al.NOD2 promotes dopaminergic degeneration regu

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47、test Medicine Information,2014(33)70-71.DOI:10.3969/j.issn.1671-3141.2014.33.045.4 NIU X L,ZHENG S M,LIU H T,et al.Protective effects of taurine against inflammation,apoptosis,and oxidative stress in brain injuryJ.Mol Med Report,2018:4516-4522.DOI:10.3892/mmr.2018.9465.5 JAKARIA M,AZAM S,HAQUE M E,e

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