1、 论 著 凝 血 因 子 和 凝 血 因 子 活 性 检 测 影 响 因 素 的 分 析王 甜 甜，王 杰，程 彦，张 雪 芹，洪 永 盛，孙 忠 良，张 心 声，房 云 海 山 东 省 血 液 中 心，济 南；上 海 凌 先 医 药 科 技 有 限 公 司，上 海 摘 要：目 的 验 证 离 心 力 对 凝 血 因 子（）活 性 和 凝 血 因 子（）活 性 检 测 的 影 响。方 法 用 全自 动 血 凝 分 析 仪 测 定 室 温、和、离 心 以 及 离 心，不 同离 心 力 条 件 下 即 刻 和 冷 冻 后 和 的 活 性 并 进 行 数 据 统 计 分 析。结 果 种 不 同 离
2、心 方 法 得 到 的 血 浆，不管 是 立 即 检 测 还 是 冻 存 后 检 测，和 的 活 性 水 平 在 不 同 离 心 力 条 件 下 没 有 显 著 性 差 异（），同 一 离 心 力条 件 下 冷 冻 后 活 性 水 平 跟 即 刻 检 测 结 果 有 统 计 学 差 异（），同 一 离 心 条 件 下 活 性 在 即 刻 和 冷 冻 后 检 测结 果 无 统 计 学 差 异（）。结 论 从 离 心 机 类 型、离 心 力 转 速 到 离 心 时 间 和 离 心 温 度 多 方 面 分 析，在 一 定 离 心 力范 围 内 不 同 离 心 力 对 活 性 和 活 性 检 测 的
3、影 响 不 大，冻 融 会 影 响 凝 血 因 子 活 性 水 平 检 测，凝 血 因 子 活 性检 测 不 受 冻 融 影 响。关 键 词：离 心 力；凝 血 因 子 活 性；凝 血 因 子 活 性；实 验 室 检 查 中 图 分 类 号 文 献 标 识 码 文 章 编 号（）：基 金 项 目：山 东 省 医 药 卫 生 科 技 发 展 计 划 项 目（）通 讯 作 者：房 云 海，：，；，：（，），（）（），（），：；血 栓 与 止 血 学 年 第 卷 第 期 血 友 病 是 一 种 隐 性 遗 传 性 凝 血 障 碍 性 疾 病，分为 血 友 病 和 血 友 病，前 者 缺 乏 凝 血
4、因 子（，），后 者 缺 乏 凝 血 因 子（，），血 友 病 的 精 确 诊 断 和 分 型 对 于 临 床 对 症 治 疗 至 关 重要，和 的 活 性 水 平 检 测 是 血 友 病 诊 断 和 分 型的 重 要 依 据。目 前，虽 然 取 得 了 一 些 进 展，但 对于 血 友 病 的 治 疗 方 式 主 要 还 是 凝 血 因 子 替 代 治 疗，和 活 性 检 测 在 血 友 病 患 者 用 药 后 疗 效 观 察 及围 手 术 期 因 子 水 平 的 检 测、抑 制 物 风 险 评 估 及 指导 下 的 个 体 化 治 疗 中 均 发 挥 着 关 键 作 用。凝 血 因 子 的
5、 活 性 检 测 是 将 全 血 离 心 分 离 后，对上 层 乏 血 小 板 血 浆 进 行 的 检 测。根 据 血 浆 凝 固 实 验血 液 标 本 的 采 集 及 处 理 指 南 要 求：在 分 离 血 浆 时，将装 有 标 本 的 带 盖 试 管 在 规 定 的 速 度 和 时 间 条 件 下（室 温、不 少）离 心，以 得 到 乏 血 小 板血 浆（血 小 板 计 数），离 心 机 应 使 用 甩 平式 转 头 以 减 少 血 浆 和 血 小 板 的 重 新 混 合。但 实际 操 作 中，各 实 验 室 的 离 心 条 件 可 能 有 差 异。为 了验 证 不 同 条 件 下 离 心
6、 力 对 和 活 性 检 测 的 影响，特 设 计 本 实 验。资 料 与 方 法 一 般 资 料随 机 选 取 健 康 志 愿 者 人，经 伦 理 委 员 会 同 意（伦 理 审 批 号：鲁 血 伦 审 字 号）并 填 写 知 情同 意 书 后，用 一 次 性 塑 料 注 射 器，采 静 脉 血，分 装 到 个 枸 橼 酸 钠 抗 凝 管 和 个 抗凝 管，每 管。枸 橼 酸 钠 抗 凝 管 血 样 和 抗 凝 剂 比例 为，用 于 检 测 不 同 离 心 力 条 件 下 的 凝 血 因 子活 性。分 装 后 的 血 样 立 即 轻 轻 颠 倒 混 匀 次，混 匀时 避 免 产 生 泡 沫。
7、方 法枸 橼 酸 钠 抗 凝 管 按 照 表 不 同 离 心 力 方 法 进 行离 心。离 心 后 每 名 志 愿 者 的 血 浆 一 起 上 机 检 测，以减 少 批 次 间 的 差 异。检 测 后 分 离 血 浆 标 本 冻 存 在 冰 箱，留 作 采 血 后 检 测。采 血 后，取 出 冻 存 血 浆，在 恒 温 水 浴 箱 快 速 融 化，检 测 和 的 活 性 水 平。检 测 仪 器、试 剂全 自 动 血 凝 分 析 仪 购 自 日 本 希 森 美 康株 式 会 社，乏 凝 血 因 子 血 浆、乏 凝 血 因 子 血 浆 试剂 均 为 西 门 子 原 装 进 口 试 剂。统 计 学
8、处 理用 软 件 进 行 数 据 处 理 与 分 析。按 照即 刻 检 测 和 冻 融 检 测 两 种 情 况 分 别 分 析，描 述 不 同离 心 方 式 检 测 活 性 和 活 性 的 均 数、标 准 差、中 位 数 以 及 四 分 位 间 距；采 用 方 差 分 析 检 验 不 同 离心 方 法 检 测 活 性 的 差 异 和 活 性 的 差 异 性，不 同 离 心 方 法 的 两 两 比 较 采 用 方 法；按照 不 同 的 离 心 方 法 分 别 进 行 分 析 时，采 用 检 验 分析 即 刻 检 测 和 冻 融 检 测 活 性 的 差 异 和 活性 的 差 异，为 差 异 有 统
9、 计 学 意 义。同 时，通过 每 份 标 本 不 同 处 理 方 法 与 指 南 推 荐 处 理 方 法 检测 结 果 的 偏 差 图，进 行 分 析 比 较。结 果 由 本 验 证 实 验 各 组 实 验 结 果 可 知：即 刻 检 测 时：各 离 心 方 式 精 密 度 在 之 间。冻 融 检 测 时：各 离 心 方 式 精 密 度 在 之 间；即 刻 检 测 时：各 离 心 方 式 精 密 度 在 之 间。冻 融 检 测 时：各 离 心 方 式精 密 度 在 之 间。综 上，以 上 验 证 的 不同 离 心 方 式 对 血 浆 样 本 检 测 的 结 果，其 精 密 度 均 符合 国
10、家 标 准，结 果 可 靠（详 见 表）。表 不 同 离 心 方 法 分 组分 组 离 心 机 型 号 离 心 力 转 速 离 心 时 间 离 心 温 度方 法 型 医 用 离 心 机（）室 温方 法 离 心 机（）方 法 离 心 机（）方 法 离 心 机（）室 温方 法 湘 仪 离 心 机（）室 温方 法 离 心 机（）血 栓 与 止 血 学 年 第 卷 第 期 表 即 刻 检 测 时 不 同 离 心 方 法 测 凝 血 因 子 活 性 指 标 与 标 准 检 测 的 差 异 性 分 析指 标 离 心 方 法即 刻 检 测（）（，）与 标 准 检 测 相对 偏 差 百 分 比（）标 准 检
11、测（，）方 法（，）方 法（，）方 法（，）方 法（，）方 法（，）注：标 准 检 测 采 用 离 心 方 法；为 差 值 的 样 本 均 数，为 差 值 的 样 本 标 准 差表 冻 融 检 测 时 不 同 离 心 方 法 测 凝 血 因 子 活 性 指 标 与 标 准 检 测 的 差 异 性 分 析指 标 离 心 方 法冻 融 检 测（）（，）与 标 准 检 测 相对 偏 差 百 分 比（）标 准 检 测（，）方 法（，）方 法（，）方 法（，）方 法（，）方 法（，）注：标 准 检 测 采 用 离 心 方 法；为 差 值 的 样 本 均 数，为 差 值 的 样 本 标 准 差表 即 刻
12、检 测 时 不 同 离 心 方 法 测 凝 血 因 子 活 性 指 标 与 标 准 检 测 的 差 异 性 分 析指 标 离 心 方 法即 刻 检 测（）（，）与 标 准 检 测 相对 偏 差 百 分 比（）标 准 检 测（，）方 法（，）方 法（，）方 法（，）方 法（，）方 法（，）注：标 准 检 测 采 用 离 心 方 法；为 差 值 的 样 本 均 数，为 差 值 的 样 本 标 准 差表 冻 融 检 测 时 不 同 离 心 方 法 测 凝 血 因 子 活 性 指 标 与 标 准 检 测 的 差 异 性 分 析指 标 离 心 方 法冻 融 检 测（）（，）与 标 准 检 测 相对 偏
13、差 百 分 比（）标 准 检 测（，）方 法（，）方 法（，）方 法（，）方 法（，）方 法（，）注：标 准 检 测 采 用 离 心 方 法；为 差 值 的 样 本 均 数，为 差 值 的 样 本 标 准 差 血 栓 与 止 血 学 年 第 卷 第 期 采 用 种 不 同 离 心 方 法 得 到 的 血 浆，不 管 是 即刻 检 测 还 是 冻 存 后 检 测，和 的 活 性 水 平 无 统计 学 意 义（）。因 为 从 采 血 到 冻 存 血 样 超 过，冻 融 后 检 测，的 活 性 要 低 于 即 刻 检 测 的 凝 血因 子 活 性（），而 的 活 性 在 即 刻 检 测 和 冻融 检
14、 测 两 组 没 有 差 异（）。这 是 因 为 在 室 温条 件 下，的 稳 定 性 较 好，而 的 稳 定 性 较 差，详见 表。下 经 两 两 比 较 分 析 发 现，不 同 离 心 力 条 件 下 和 的 活 性 检 测 均 没 有 统 计 学 差 异（），详见 表。通 过 对 不 同 离 心 条 件 下 检 测 和 的 活 性结 果 均 值 比 较 发 现，结 果 无 统 计 学 意 义，详 见 图。不 同 处 理 方 法 与 指 南 推 荐 处 理 方 法 检 测 结 果的 偏 差 图 分 析 即 刻 检 测 值 普 遍 高 于 冻 融 检 测 法，除 用 离心 法 及 时 检 测
15、 外 其 余 检 测 方 法 和 离 心 法 的 搭 配 均低 于 标 准 的 及 时 检 测 法 配 合 离 心 法。及 时 检测 时，其 他 离 心 法 检 测 值 均 低 于 标 准 的 离 心 法 检测 值。采 用 冻 融 检 测 法 时，离 心 法、离 心 法、离 心 法、离 心 法 的 检 测 值 稍 低，离 心 法 的 检 测值 稍 高。冻 融 检 测 的 值 普 遍 高 于 及 时 检 测 法，但 冻融 检 测 法 配 合 离 心 法 的 检 测 值 极 低。及 时 检测 时，离 心 法、离 心 法、离 心 法 的 检 测 值 稍 低，离 心 法、离 心 法 的 检 测 值 稍
16、 高。冻 融 检 测时，离 心 法、离 心 法、离 心 法、离 心 法 的 检 测值 稍 低，离 心 法 的 检 测 值 稍 高。讨 论凝 血 因 子 检 测 是 出 凝 血 实 验 室 检 查 的 重 要 组 成部 分，能 够 协 助 临 床 做 出 正 确 诊 断 和 制 定 合 理 的 治疗 方 案，在 很 多 疾 病 的 诊 疗 中 发 挥 着 重 要 作用。和 的 活 性 检 测 对 于 血 友 病 患 者 尤为 重 要，在 血 友 病 患 者 的 诊 断、治 疗、围 手 术 期 处 理、康 复 理 疗、药 代 动 力 学 指 导 的 个 体 化 治 疗 等 方 面 均发 挥 着 关
17、 键 作 用。本 验 证 实 验 采 用 种 离 心 机、种 不 同 离 心 方法，离 心 机 有：型 医 用 离 心 机、离 心 机、湘 仪 离 心 机，离心 力 分 别 为：、（组）、。其 中 方 法 和 方 法 分 别 用 的 离 心力 下 和 常 温 条 件 为 标 准 离 心 方 法。依 据 版 中 国 药 典 要 求，、的 活 性 的 检 测 精 密 度 应满 足 的 标 准。由 本 验 证 实 验 各 组 实 验 结 果 可知 以 上 验 证 的 不 同 离 心 方 式 对 血 浆 样 本 检 测 的 结果，其 精 密 度 均 符 合 国 家 标 准。表 即 刻 检 测 与 冻
18、融 检 测 以 及 不 同 离 心 方 法 测 和 的 差 异 性 分 析指 标离 心方 法即 刻 检 测（）（，）冻 融 检 测（）（，）值 值 方 法（，）（，）方 法（，）（，）方 法（，）（，）方 法（，）（，）方 法（，）（，）方 法（，）（，）值 值 方 法（，）（，）方 法（，）（，）方 法（，）（，）方 法（，）（，）方 法（，）（，）方 法（，）（，）值 值 血 栓 与 止 血 学 年 第 卷 第 期 表 不 同 离 心 方 法 测 凝 血 因 子、活 性 的 两 两 比 较 结 果指 标离 心 方 法对 比 组 别即 刻 检 测（）离 心 方 法 对 比 组 别 冻 融 检
19、 测（）离 心 方 法 对 比 组 别（，）（，）（，）（，）（，）（，）（，）（，）（，）（，）（，）（，）（，）（，）（，）（，）（，）（，）（，）（，）（，）（，）（，）（，）（，）（，）（，）（，）（，）（，）（，）（，）（，）（，）（，）（，）（，）（，）（，）（，）（，）（，）（，）（，）（，）（，）（，）（，）（，）（，）（，）（，）（，）（，）（，）（，）（，）（，）（，）（，）注：表 格 中 三 行 数 字 分 别 表 示 均 数 差 值、均 数 差 值 置 信 区 间 及 值 在 凝 血 因 子 检 测 中，标 本 处 理 不 当 会 影 响 检 测结 果，例 如 采 样
20、量 不 当；使 用 非 规 定 的 抗 凝 剂；抗 凝 剂 的 浓 度、用 量 不 准 确；有 凝 块、脂 血、溶 血 等 不合 格 样 品；标 本 剧 烈 混 匀 或 混 匀 不 当；血 细 胞 比 容 高于；急 性 炎 症 反 应 期；贮 存 不 合 格 等。因 此，在实 验 室 检 测 中 应 标 准 化、统 一 离 心 力 和 离 心 时 间。由 于 不 同 离 心 机 的 差 异，相 同 的 离 心 力 是 不 一样 的，因 此 应 采 用 作 为 单 位 来 设 置 离 心 力，如 不 能用 作 单 位，也 应 计 算 出 所 对 应 的 值。为 获 得 乏 血 小 板 血 浆（血
21、 小 板 计 数），凝 血 因 子 活 性 测 定 技 术 标 准 推 荐 的 离 心 速 度 和 离 心时 间 为 室 温、不 少 于 来 分 离 血 浆。通过 本 试 验 数 据 证 实 离 心 力 在 以 上 分 离 的 血浆，对 于 和 检 测 结 果 是 可 信 的。通 过 提 高离 心 力，缩 短 离 心 时 间，得 到 的 检 测 结 果 也 是 可 信的。本 试 验 中 血 小 板 计 数 未 达 到 标 准 要 求 时，和 活 性 检 测 结 果 无 明 显 差 异，说 明 血 小 板 因 素对 和 活 性 检 测 影 响 不 大。有 研 究 认 为 冻 融后 血 小 板 破
22、 损 释 放 出 来 的 物 质 会 影 响 凝 血 因 子 活 性检 测，我 们 对 冻 融 后 的 血 样 进 行 检 测，证 明 破 损 的 血 血 栓 与 止 血 学 年 第 卷 第 期 85 90 95 100B.冻 融 D ifferen ces for alp h a=0.1N ot sign ifican t S ign ifican t D ifferen ces for alp h a=0.1N ot sign ifican t S ign ifican t 105 110 115 120A.即 刻 120115110105100959085图 不 同 离 心 方 法 检
23、测 结 果 均 值 比 较 图小 板 对 和 活 性 检 测 影 响 不 大。种 不 同 机 型、种 不 同 离 心 力 条 件 下 分 别 对 和 的 活 性 进 行 检 测，结 果 显 示 的 活 性 在即 刻 与 冷 冻 后 有 显 著 性 差 异（），而 的 活 性 在 即 刻 和 冷 冻 后 无 统 计 学 意 义（）。种 不 同 离 心 机 型、种 不 同 离 心 力 条 件 下检 测 和 的 活 性 并 进 行 两 两 比 较，结 果 均 没有 统 计 学 意 义（）。虽 然 不 同 的 检 测 方 法 与指 南 推 荐 的 标 准 方 法 偏 差 图 有 不 同 程 度 差 异
24、，但 除 及 时 检 测 与 冻 融 检 测 有 较 大 差 异 外，总 体 差 别不 大。冻 融 会 影 响 活 性 水 平 检 测，活 性 检 测不 受 冻 融 影 响，本 试 验 进 一 步 印 证 了 的 不 稳 定D ifferen ces for alp h a=0.1N ot sign ifican t S ign ifican t 85.0 87.5 90.0 92.5 95.0 97.5D ifferen ces for alp h a=0.1N ot sign ifican t S ign ifican t 87.5 90.0 92.5 95.0 97.5 100.0B.冻
25、 融 A.即 刻 97.595.092.590.087.585.0100.097.595.092.590.087.5注：均 值 比 较 图 中，红 色 直 线 表 示 两 组 差 异 无 统 计 学 意 义，蓝色 实 线 表 示 两 组 差 异 有 统 计 学 意 义。（红 色 或 蓝 色 直 线）与（灰 色 水 平 线 与 灰 色 垂 直 线 的 交 点）相 交 时，该 条 直 线 表 示灰 色 水 平 线 指 向 的 组 与 灰 色 垂 直 线 指 向 的 组 相 比 较 的 结 果。图 不 同 离 心 方 法 检 测 结 果 均 值 比 较 图性，也 反 映 出 不 同 离 心 力 对
26、于 和 的 活 性检 测 在 一 定 离 心 力 范 围 内 影 响 不 大，为 有 效 缩 短 和 活 性 检 测 的 周 转 时 间（），对 提 高 离 心转 速 缩 短 离 心 时 间 是 否 可 行 作 了 验 证，对 紧 急 情 况下 快 速 检 测、紧 急 救 治 提 供 科 学 参 考，对 和 活 性 的 实 验 室 检 测 提 供 依 据。由 于 本 试 验 只 是 针 对 名 志 愿 者 进 行 了 研 究，后 续 还 需 大 量 数 据 进 行 验证，特 别 是 低 值 标 本 的 数 据 仍 需 进 一 步 分 析。血 栓 与 止 血 学 年 第 卷 第 期 作 者 贡
27、献 声 明 王 甜 甜 负 责 论 文 撰 写；王 杰、程 彦、张 雪 芹 负 责 实 验 操 作；洪 永 盛、孙 忠 良 负 责 数 据 处理；张 心 声、房 云 海 负 责 文 章 修 改利 益 冲 突 所 有 作 者 均 声 明 不 存 在 利 益 冲 突参 考 文 献 中 华 医 学 会 血 液 学 分 会 血 栓 与 止 血 学 组，中 国 血 友 病协 作 组 血 友 病 诊 断 与 治 疗 中 国 专 家 共 识（年版）中 华 血 液 学 杂 志，（）：中 华 医 学 会 血 液 学 分 会 血 栓 与 止 血 学 组，中 国 血 友 病协 作 组 血 友 病 治 疗 中 国 指
28、 南（年 版）中 华血 液 学 杂 志，（）：代 新 岳，张 磊 血 友 病 基 因 治 疗 研 究 进 展 中 华 血液 学 杂 志，（）：，（）：王 韵，施 小 凤，毛 建 华，等 靶 向 血 小 板 表 达 基 因 治疗 血 友 病 的 新 进 展 国 际 输 血 及 血 液 学 杂 志，（）：商 保 军，杨 世 伟，雷 平 冲，等 血 友 病 患 儿 凝 血 因 子 抑 制 物 相 关 临 床 研 究 中 华 血 液 学 杂 志，（）：王 健 琨，黄 锦 雄 血 友 病 诊 治 现 状 与 进 展 中 外 医学 研 究，（）：周 敏，唐 凌，吴 润 晖，等 中 国 儿 童 血 友 病
29、诊 断 现 状 多中 心 研 究 中 华 实 用 儿 科 临 床 杂 志，（）：冉 立，黎 承 平 药 代 动 力 学 与 血 友 病 的 个 体 化 预 防 治疗 临 床 与 病 理 杂 志，（）：成 斐，王 学 锋，周 文 宾，等 凝 血 因 子 和 实 验 室 检测 现 状 调 查 与 分 析 中 华 检 验 医 学 杂 志，（）：，（）：，（）：，：，：，（）：，（）：，（）：，：，（）：中 华 人 民 共 和 国 国 家 卫 生 健 康 委 员 会 凝 血 因 子 活性 测 定 技 术 标 准（）：，（）：蒋 桂 香，张 伟，洪 好 武，等 人 凝 血 因 子 制 品 稳 定 性的 研 究 进 展 中 国 生 物 制 品 学 杂 志，（）：（收 稿 日 期：）（本 文 编 辑：钱 婷 婷、张 洪 亮）血 栓 与 止 血 学 年 第 卷 第 期
