1、安徽农业科学，Journal of Anhui A Sci2014，42(9)：26112612 责任编辑陈玉敏责任校对况玲玲 新药长毒试验动物血液生化检验过程中的影响因素及解决对策 樊静，李春燕 (成都大学四川抗菌素工业研究所，药物安全评价中心，四川成都610051) 摘要血液生化指标检验是新药长毒动物试验中一类常用的检测技术，对于评价受试药物对动物的安全性有重要意义。但在血液生化 指标检验过程中常存在多种因素影响结果的准确性，可能导致药物评价机构对某些新药毒理学性质的误判，甚至造成严重后果。对血 液生化检验中常见的影响因素进行了总结，并制定了相关解决对策，以提升血液生化指标检验的准确性，为
2、药物的动物安全评价试验提 供更为可靠的数据。 关键词药物安全评价；血液生化检验；影响因素；解决对策 中图分类号S859 文献标识码A 文章编号o5176611(2014)090261102 在新药研发过程中，药物安全性评价是新药研究开发的 重要前提，而长期毒性试验又是安全性评价试验中的重中 之重。长毒试验需要检测的血液生化指标包括：丙氨酸氨 基转移酶、门冬氨酸氨基转碱性磷酸酶移酶和总胆红素等l0 余项指标，是评判受试药物对实验动物肝、肾等重要脏器功 能损伤的重要指标。生化指标检测的准确性对于新药的安 全性评价至关重要，而采血、离心、保存及检测等的各环节均 可能影响结果的准确性 。 只有对采样前
3、后影响血液生化检验的各种因素进行有 效控制，才能使检测结果具有可靠的参考价值，如果血生化 检测结果不可靠，会导致人们对受试药物的毒理学性质造成 误判，甚至造成严重后果 。因此，笔者对从血样采集到实 验室检查的各个环节中的影响因素进行了总结，并制定了有 效的解决方案，从而提升检验结果的准确性，以更好地为新 药的安全性评价提供可靠的依据。 1血液生化检验过程中的影响因素 11采血过程中的影响因素 111应激。动物生理状态受到年龄、性别、人员操作技术 等因素的影响。例如，在动物的捉取和保定过程中动作粗 鲁、落地摔伤、用力过猛等操作不当行为，则容易引起试验动 物的应激，造成血糖及乳酸的含量升高。 11
4、2饮食。采集血样时，实验动物应处于空腹状态，喂食 后食物中的色素、维生素等多种有效成分可能会对检测结果 造成干扰。喂食会增加血清中A 和AST等的水平。饲料 中维生素c可使实验动物血中乳酸脱氢酶含量降低 。 113溶血。造成标本溶血的因素有很多，包括采血针头 过细、抽吸用力过猛，剧烈振荡试管或采血管负压过大等均 可造成血样溶血。溶血标本中碱性磷酸酶、丙氨酸氨基转移 酶、乳酸脱氢酶、天门冬氨酸氨基转移酶和钾离子等的含量 会发生异常增高，对检验结果造成影响 。 12保存与检测中的影响因素 121血样的保存。因为血样采集后未及时进行检测，可 引起血液中化学物质的改变甚至可能发生病原菌污染，因 此采集
5、血样后应及时进行检测 6 J。 作者简介樊静(1983一)，女，四川成都人，研究实习员，从事实验动物 学的教学与研究工作。 收稿日期2014-02-24 122处理不当。血样应放置应在恒定温度的环境中，分 离血清时应在低温离心机中进行，气温过高等因素都有可能 造成血清化学成分变化，从而导致检测结果不准确。 123试剂盒选择。试剂盒种类、保存方法、有效期及操作 步骤等均可能对检验结果造成影响，如试剂盒保存不当或超 过有效期等也可对检验结果造成误差。 124检测仪器。血液生化检验中一般使用全自动血生化 分析仪进行检测，仪器的维护保养及工作状态均对血生化指 标的检测产生影响，如长时间未清洗造成污染、
6、长时间未校 准等均可影响检验结果的准确性 。 2采取的解决对策 21血样采集时的注意事项要求试验动物采集血样前 禁食禁水。防止动物在检查前受到外界环境或人为的剧 烈刺激，导致其受到惊吓并避免剧烈的活动。这些因素均可 导致应激，引起体内激素分泌过多，血液中化学成分发生变 化，从而影响检验结果 。提高采血人员的静脉穿刺操作 水平，防止由于操作不当而造成的溶血或凝血等影响血样质 量的情况出现。前壁头静脉采血时，避免结扎的止血带过 紧，结扎后1 min内将穿刺工作完成，结扎太久会导致采血部 位血液循环不良，血液中成分发生变化。采取有效手段防 止血样发生溶血。按照操作规则合理使用抗凝剂，采样前检 测抗凝
7、剂的抗凝效果，及时淘汰抗凝效果不好的抗凝管；采 血过程中轻轻摇动采血管，使血液与抗凝剂成分充分混合； 尽量不要使用太细的针头采血且在采血时操作要迅速，避免 延迟，以免造成溶血；采血后禁止剧烈摇动采血管。另外，若 发现采集的血样出现溶血现象，应及时补采血样 。 22血样保存过程中的注意事项采集的血样应尽快进 行检测，避免因长时间放置血样而造成微生物的污染或血样 内化学物质的变化。对于未能及时检测的血样应做好保 存工作，可根据检测的指标及样本情况进行合理保存，通常 的方法是分离血清后进行保存，血液样本以2 0003 000 rmin，4离心下 1O min，分离上层血清后先暂时保存在4 冰箱中，检
8、测时再取出。样本尽量当天测完，特别是血糖、 乳酸脱氢酶、肌酸激酶及其同工酶、尿酸、钾离子等必须在当 Et检测完毕，否则存储24 h后血清生化指标会受到明显影 响 J。制定血样收验制度，严格审查血样标本的质量，对 于质量较差的血样特别是溶血血样应及时发现，并及时重新 2612 安徽农业科学 采集样本，提升检验准确性。对于检测结果异常的数据，及 时对该样本进行重新检测，并反复比对，及时校对由于个人 操作失误导致的检测结果误差。 23血样检测过程中的注意事项检验室的环境条件因 素可直接或间接影响检验结果的准确性，环境条件要符合标 准，湿度、温度等应控制在规定范围内，并注意定期消毒。 严格按照操作说明
9、使用仪器，每次检测前对仪器进行标准 品标定，并做好仪器的日常维护保养，加样时注意血清中是 否有蛋白凝集物形成，避免堵塞仪器。每次检测后要及时清 洗，避免因仪器污染或运转不正常造成结果上的误差 。 校准检验所需的临界值及背景参考值等，要求工作人员能够 对各种标准值进行核对，以便于更加准确地评估检测结果。 3小结 影响实验动物血液生化检验的因素很多，为进一步提高 新药长期毒性试验中实验动物血液生化指标检浸0结果的准 确性，对可能影响血生化检查结果的常见因素进行了分析， 并制定了可靠的方案，有效防止了影响血清生化指标的大部 (上接第2607页) 程设施、排水地区的重要程度、经济发展水平及承受能力等
10、有关，该研究采用适应性治涝标准办法，分片选取除涝标准。 淮北平原河道来水面积大、比降平缓，据初步估算，如按 10年一遇排涝标准进行治理，扩挖河道土方工程量约8 亿In ，且大多堤防需重新修筑，桥涵等配套建筑物的规模均 需相应扩大，占地及工程投资巨大。根据工程现状及实际治 理效果分析，治淮初期保麦及一般年份保秋的治涝标准明显 偏低。目前淮北地区的骨干河道一般按5年一遇排涝标准 进行治理较为合理；对洪涝矛盾较大，提高治理标准工程量 过大的地区，近期可根据有关规划按3年一遇左右的标准进 行治理；对穿越城区等重要河道(段)，且提高标准后工程量 又不过大时，可将排涝标准提高到10年一遇。防洪标准采 用1
11、020年一遇。对于近年已治理但排涝标准仍不足5年 一遇的洪河、奎濉河、怀洪新河本干、包浍河等支流河道，由 于提高到5年一遇的工程量较大(土方约3亿m )，占压地 较多，近期暂不考虑进一步提高，远期除涝标准提高到5年 一遇。淮北支流低洼地的抽排标准采用5年一遇 。 淮河干流沿岸洼地，由于地形平坦，地势低洼，汛期遇淮 河中小洪水，水位即高出洼地地面，且时间长达23个月， 有些长达5个多月，当地降雨无法自流外排，常形成“关门 淹”，内部涝水主要靠兴建排涝站抽排。随着社会经济的发展， 该地区受灾损失将越来越大。结合现有排涝站情况，沿淮洼地 抽排标准一般采用5年一遇，结合行蓄洪区调整规划，对于方 邱湖、
12、洛河洼、石姚段行洪区抽排标准采用10年一遇。对于洼 地范围内局部具有自排条件的高岗地，实施高水高排，自排标 准淮河以北地区高排沟采用5年一遇，淮河以南地区撇洪沟由 于地形坡度相对较大，自排条件较好，一般可采用10年一遇。 防洪标准：万亩以下圩口为10年一遇，万亩以上圩口及万亩以 下居住人口较多的重要圩口为20年一遇。 分因素的干扰，减少了检测误差，提高了临床检验结果的准 确性，为评估新药的安全性提供了可靠依据。 参考文献 1齐云，蔡润兰，刘彬，等新药长毒试验动物血液生化测规范化研究系 列之五J中国比较医学杂志，2006，16(4)：193196 2齐云，菊闰兰，宋杨，等新药长毒试验动物血液生化
13、测定规范化研究 系列之一采血部位对血液生化值的影响J中国比较医学杂志， 20O6，16(2)：6568 3包玉龙，杜隹林，李显华，等不同存放时间对实验动物血清生化值影 响J实用中医内科杂志，201I，25(1O)：1O一12 4詹纯列，肖育华，李新春，等普通级、SPF级SD、Wistar大鼠血液生化 常值的测定与比较J中国比较医学杂志，2O04，14(2)：9496 5朱兆生探究血液生化检验过程中的影响因素及解决对策J中国实 用医药，2014，9(3)：247248 6李平浅谈化验前的准备J中外医学研究，20O9，7(9)：184185 7吕海燕临床生化检验测试的质量保证J实用医技杂志，201
14、0，17 (4)：373374 8李佳溶血对生化检验结果的影响J医学信息，2010，23(10)：3830 3831 9田越血生化俭验的影响因素J医学信息，201l，11(4)：16601661 1O丛玉隆临床实验室分析前质量管理及对策J中华检验医学，2O04， 27(8)：483487 对于面上排涝大沟，目前大多按5年一遇标准开挖。根 据各洼地现状情况分析，产生涝灾的一个重要原因是由于大 沟淤积严重，桥涵和面上中小沟不配套，堵坝较多引起的。 同时，由于大沟数量较多，经初步估算，如将大沟的排涝标准 由5年一遇提高到10年一遇，需增加土方2亿m ，面上中小 沟需相应提高标准，桥涵等配套建筑物的规
15、模也需相应扩 大，占地及工程投资巨大。因此，规划面上排涝大沟的除涝 标准采用5年一遇。对于沿淮洼地，遇超标准暴雨时，一般 均无自排机会，按5年一遇自排标准开挖的排水沟的过水能 力能够满足l0年一遇抽排站的排涝流量。 淮南支流河道，大都发源于山区或江淮丘陵区，降雨集 中，源短流急，汇流较快。洼地主要分布于各河流沿河两岸， 且沿河低洼地区大都筑有堤防，受地形的影响，圩堤堤线较 长，大多为沙质堤防，相当一部分堤防防洪标准很低，洪水期 间隐患较多，易出现破圩，因此防洪任务较重。沿岸圩区侧 面来水区域多为低山、丘岗区，地形变化大，汇流较为集中， 来水流量较大，常发生撇洪沟堤防溃破圩区受淹的情况。由 于地
16、形坡度相对较大，一般自排条件较好，亦有部分下游洼 地地势低洼，受淮河干流洪水的顶托影响，自排机会少，易形 成内涝灾害。因此，淮南支流河道洼地的除涝标准，抽排采 用5年一遇，自排及撇洪沟采用10年一遇。防洪标准，干流 堤防一般采用20年一遇；万亩以下、居住人口较少的圩口堤 防采用10年一遇 。 对种植蔬菜、果树、烟叶等高效经济作物区及城市等经 济相对发达地区，经经济技术论证后，排涝标准可适当提高。 参考文献 1安徽省淮北地区除涝水文计算办法s合肥：安徽省水利水电勘测设 计院，1981：18 2詹道江，叶守泽工程水文学M北京：水利水电出版社，2OOO：42 54 3潭维炎水文 常用图表M北京：水利出版社，1982：412 4刘光文水文分析与计算M北京：水利电力出版社，1989：9099
