1、外科学(骨科)专业优秀论文 骨髓间充质干细胞与髓核细胞共培养的实验研究关键词：椎间盘退变 髓核细胞 骨髓间充质干细胞 共培养摘要：背景介绍：椎间盘退变(intervertebral disc degeneration，IDD)导致的腰椎间盘突出症和慢性腰腿痛是骨科常见疾患，其具体机制不明。临床上常采用手术切除突出椎间盘组织或行椎体间融合术等以缓解症状，但术中不可避免地会破坏椎间盘和椎体附件的正常结构，引起继发的脊柱不稳或加速相邻椎间盘的退变，所以其远期疗效并不理想。组织工程学的发展为解决这一难题提供了一种新的选择，通过组织工程学的方法修复或复建退变椎间盘组织是目前国内外进行的一项热点研究工作。
2、Nishimura 等发现通过早期移植自体髓核细胞可减缓甚至有逆转 IDD 发生的可能。髓核是乏细胞组织，而且髓核细胞体外培养表现出增殖缓慢，因此如何在体外培养时促进髓核细胞增殖并维持其表型成为细胞移植治疗研究 IDD 首先要解决的问题。 骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells，bMSCs)是骨髓内除造血干细胞(hematopoietic stem cells，HSCs)之外的另一类干细胞，是骨髓造血微环境的重要组成部分，由于它们来自骨髓的支持结构，并作为滋养层支持造血干细胞的生长，因此也被称为骨基质细胞(bone marrow
3、stromalcells，bMSCs)。随着组织工程学的发展，bMSCs 作为一种具有多种分化潜能的种子细胞越来越受到人们的关注和研究。但实际上，人们认识 bMSCs 的功能是从对造血组织的支持和调控造血的作用开始的，近年来研究发现该类细胞在体内、外对共培养的其它组织和细胞也有支持和辅助作用。 纤维环及移行区的组织均来源于间充质，采用比纤维环分化更早期的间充质干细胞与髓核细胞共培养理论上也存在上调髓核细胞活性的可能，本研究拟通过建立共培养模型探讨骨髓间充质干细胞对髓核细胞活性的影响。 目的：建立髓核细胞与骨髓间充质干细胞共培养的模型，研究体外共培养条件下骨髓间充质干细胞对髓核细胞活性的影响，以
4、探讨一种在体外培养条件下安全、简便的提高髓核细胞的活性方法。 方法：将术中取获取的成人骨髓标本分离出 bMSCs 经过传代、纯化、取Plt;,3gt;代 bMSCs 按每孔 110lt;#39;4gt;接种于 transwell 插入式共培养皿(6 孔板)底层，共 12 孔；再将术中获取的成人髓核标本分离出髓核细胞，按每孔 110lt;#39;4gt;接种于共培养皿上层，重复 12 孔作为实验组；另按 110lt;#39;4gt;接种髓核细胞于普通 6 孔培养板，重复 12 孔作为对照组。培养过程中观察共培养条件下髓核细胞形态变化，待共培养皿中髓核细胞融合后，分别计数实验组与对照组中髓核细胞，
5、同时用酶联免疫吸附剂测定法(enzyme-linked immunosobnent assay，ELISA)方法检测培养上清液中蛋白多糖含量变化，并进行比较。 结果：经过共培养后 8 天实验组中的髓核细胞达到 90融合，而对照组中的髓核细胞只在局部有少量融合，大部分细胞仍然呈散在分布。细胞计数显示实验组髓核细胞的增殖速度及 ELISA 法测定的实验组蛋白多糖合成均较对照组明显提高(Plt;0.01)。 结论：成功建立骨髓间充质干细胞与髓核细胞共培养模型，与骨髓间充质干细胞共培养后髓核细胞增殖速度增加、活性上调。正文内容背景介绍：椎间盘退变(intervertebral disc degener
6、ation，IDD)导致的腰椎间盘突出症和慢性腰腿痛是骨科常见疾患，其具体机制不明。临床上常采用手术切除突出椎间盘组织或行椎体间融合术等以缓解症状，但术中不可避免地会破坏椎间盘和椎体附件的正常结构，引起继发的脊柱不稳或加速相邻椎间盘的退变，所以其远期疗效并不理想。组织工程学的发展为解决这一难题提供了一种新的选择，通过组织工程学的方法修复或复建退变椎间盘组织是目前国内外进行的一项热点研究工作。Nishimura 等发现通过早期移植自体髓核细胞可减缓甚至有逆转 IDD 发生的可能。髓核是乏细胞组织，而且髓核细胞体外培养表现出增殖缓慢，因此如何在体外培养时促进髓核细胞增殖并维持其表型成为细胞移植治疗
7、研究 IDD 首先要解决的问题。 骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells，bMSCs)是骨髓内除造血干细胞(hematopoietic stem cells，HSCs)之外的另一类干细胞，是骨髓造血微环境的重要组成部分，由于它们来自骨髓的支持结构，并作为滋养层支持造血干细胞的生长，因此也被称为骨基质细胞(bone marrow stromalcells，bMSCs)。随着组织工程学的发展，bMSCs 作为一种具有多种分化潜能的种子细胞越来越受到人们的关注和研究。但实际上，人们认识 bMSCs 的功能是从对造血组织的支持和调控造血的
8、作用开始的，近年来研究发现该类细胞在体内、外对共培养的其它组织和细胞也有支持和辅助作用。 纤维环及移行区的组织均来源于间充质，采用比纤维环分化更早期的间充质干细胞与髓核细胞共培养理论上也存在上调髓核细胞活性的可能，本研究拟通过建立共培养模型探讨骨髓间充质干细胞对髓核细胞活性的影响。 目的：建立髓核细胞与骨髓间充质干细胞共培养的模型，研究体外共培养条件下骨髓间充质干细胞对髓核细胞活性的影响，以探讨一种在体外培养条件下安全、简便的提高髓核细胞的活性方法。 方法：将术中取获取的成人骨髓标本分离出 bMSCs 经过传代、纯化、取Plt;,3gt;代 bMSCs 按每孔 110lt;#39;4gt;接种
9、于 transwell 插入式共培养皿(6 孔板)底层，共 12 孔；再将术中获取的成人髓核标本分离出髓核细胞，按每孔 110lt;#39;4gt;接种于共培养皿上层，重复 12 孔作为实验组；另按 110lt;#39;4gt;接种髓核细胞于普通 6 孔培养板，重复 12 孔作为对照组。培养过程中观察共培养条件下髓核细胞形态变化，待共培养皿中髓核细胞融合后，分别计数实验组与对照组中髓核细胞，同时用酶联免疫吸附剂测定法(enzyme-linked immunosobnent assay，ELISA)方法检测培养上清液中蛋白多糖含量变化，并进行比较。 结果：经过共培养后 8 天实验组中的髓核细胞达
10、到 90融合，而对照组中的髓核细胞只在局部有少量融合，大部分细胞仍然呈散在分布。细胞计数显示实验组髓核细胞的增殖速度及 ELISA 法测定的实验组蛋白多糖合成均较对照组明显提高(Plt;0.01)。 结论：成功建立骨髓间充质干细胞与髓核细胞共培养模型，与骨髓间充质干细胞共培养后髓核细胞增殖速度增加、活性上调。背景介绍：椎间盘退变(intervertebral disc degeneration，IDD)导致的腰椎间盘突出症和慢性腰腿痛是骨科常见疾患，其具体机制不明。临床上常采用手术切除突出椎间盘组织或行椎体间融合术等以缓解症状，但术中不可避免地会破坏椎间盘和椎体附件的正常结构，引起继发的脊柱不
11、稳或加速相邻椎间盘的退变，所以其远期疗效并不理想。组织工程学的发展为解决这一难题提供了一种新的选择，通过组织工程学的方法修复或复建退变椎间盘组织是目前国内外进行的一项热点研究工作。Nishimura 等发现通过早期移植自体髓核细胞可减缓甚至有逆转 IDD 发生的可能。髓核是乏细胞组织，而且髓核细胞体外培养表现出增殖缓慢，因此如何在体外培养时促进髓核细胞增殖并维持其表型成为细胞移植治疗研究 IDD 首先要解决的问题。 骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells，bMSCs)是骨髓内除造血干细胞(hematopoietic stem ce
12、lls，HSCs)之外的另一类干细胞，是骨髓造血微环境的重要组成部分，由于它们来自骨髓的支持结构，并作为滋养层支持造血干细胞的生长，因此也被称为骨基质细胞(bone marrow stromalcells，bMSCs)。随着组织工程学的发展，bMSCs 作为一种具有多种分化潜能的种子细胞越来越受到人们的关注和研究。但实际上，人们认识 bMSCs 的功能是从对造血组织的支持和调控造血的作用开始的，近年来研究发现该类细胞在体内、外对共培养的其它组织和细胞也有支持和辅助作用。 纤维环及移行区的组织均来源于间充质，采用比纤维环分化更早期的间充质干细胞与髓核细胞共培养理论上也存在上调髓核细胞活性的可能，
13、本研究拟通过建立共培养模型探讨骨髓间充质干细胞对髓核细胞活性的影响。 目的：建立髓核细胞与骨髓间充质干细胞共培养的模型，研究体外共培养条件下骨髓间充质干细胞对髓核细胞活性的影响，以探讨一种在体外培养条件下安全、简便的提高髓核细胞的活性方法。 方法：将术中取获取的成人骨髓标本分离出 bMSCs 经过传代、纯化、取Plt;,3gt;代 bMSCs 按每孔 110lt;#39;4gt;接种于 transwell 插入式共培养皿(6 孔板)底层，共 12 孔；再将术中获取的成人髓核标本分离出髓核细胞，按每孔 110lt;#39;4gt;接种于共培养皿上层，重复 12 孔作为实验组；另按 110lt;#
14、39;4gt;接种髓核细胞于普通 6 孔培养板，重复 12 孔作为对照组。培养过程中观察共培养条件下髓核细胞形态变化，待共培养皿中髓核细胞融合后，分别计数实验组与对照组中髓核细胞，同时用酶联免疫吸附剂测定法(enzyme-linked immunosobnent assay，ELISA)方法检测培养上清液中蛋白多糖含量变化，并进行比较。 结果：经过共培养后 8 天实验组中的髓核细胞达到 90融合，而对照组中的髓核细胞只在局部有少量融合，大部分细胞仍然呈散在分布。细胞计数显示实验组髓核细胞的增殖速度及 ELISA 法测定的实验组蛋白多糖合成均较对照组明显提高(Plt;0.01)。 结论：成功建立
15、骨髓间充质干细胞与髓核细胞共培养模型，与骨髓间充质干细胞共培养后髓核细胞增殖速度增加、活性上调。背景介绍：椎间盘退变(intervertebral disc degeneration，IDD)导致的腰椎间盘突出症和慢性腰腿痛是骨科常见疾患，其具体机制不明。临床上常采用手术切除突出椎间盘组织或行椎体间融合术等以缓解症状，但术中不可避免地会破坏椎间盘和椎体附件的正常结构，引起继发的脊柱不稳或加速相邻椎间盘的退变，所以其远期疗效并不理想。组织工程学的发展为解决这一难题提供了一种新的选择，通过组织工程学的方法修复或复建退变椎间盘组织是目前国内外进行的一项热点研究工作。Nishimura 等发现通过早期
16、移植自体髓核细胞可减缓甚至有逆转 IDD 发生的可能。髓核是乏细胞组织，而且髓核细胞体外培养表现出增殖缓慢，因此如何在体外培养时促进髓核细胞增殖并维持其表型成为细胞移植治疗研究 IDD 首先要解决的问题。 骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells，bMSCs)是骨髓内除造血干细胞(hematopoietic stem cells，HSCs)之外的另一类干细胞，是骨髓造血微环境的重要组成部分，由于它们来自骨髓的支持结构，并作为滋养层支持造血干细胞的生长，因此也被称为骨基质细胞(bone marrow stromalcells，bMSC
17、s)。随着组织工程学的发展，bMSCs 作为一种具有多种分化潜能的种子细胞越来越受到人们的关注和研究。但实际上，人们认识 bMSCs 的功能是从对造血组织的支持和调控造血的作用开始的，近年来研究发现该类细胞在体内、外对共培养的其它组织和细胞也有支持和辅助作用。 纤维环及移行区的组织均来源于间充质，采用比纤维环分化更早期的间充质干细胞与髓核细胞共培养理论上也存在上调髓核细胞活性的可能，本研究拟通过建立共培养模型探讨骨髓间充质干细胞对髓核细胞活性的影响。 目的：建立髓核细胞与骨髓间充质干细胞共培养的模型，研究体外共培养条件下骨髓间充质干细胞对髓核细胞活性的影响，以探讨一种在体外培养条件下安全、简便
18、的提高髓核细胞的活性方法。 方法：将术中取获取的成人骨髓标本分离出 bMSCs 经过传代、纯化、取Plt;,3gt;代 bMSCs 按每孔 110lt;#39;4gt;接种于 transwell 插入式共培养皿(6 孔板)底层，共 12 孔；再将术中获取的成人髓核标本分离出髓核细胞，按每孔 110lt;#39;4gt;接种于共培养皿上层，重复 12 孔作为实验组；另按 110lt;#39;4gt;接种髓核细胞于普通 6 孔培养板，重复 12 孔作为对照组。培养过程中观察共培养条件下髓核细胞形态变化，待共培养皿中髓核细胞融合后，分别计数实验组与对照组中髓核细胞，同时用酶联免疫吸附剂测定法(enz
19、yme-linked immunosobnent assay，ELISA)方法检测培养上清液中蛋白多糖含量变化，并进行比较。 结果：经过共培养后 8 天实验组中的髓核细胞达到 90融合，而对照组中的髓核细胞只在局部有少量融合，大部分细胞仍然呈散在分布。细胞计数显示实验组髓核细胞的增殖速度及 ELISA 法测定的实验组蛋白多糖合成均较对照组明显提高(Plt;0.01)。 结论：成功建立骨髓间充质干细胞与髓核细胞共培养模型，与骨髓间充质干细胞共培养后髓核细胞增殖速度增加、活性上调。背景介绍：椎间盘退变(intervertebral disc degeneration，IDD)导致的腰椎间盘突出症和
20、慢性腰腿痛是骨科常见疾患，其具体机制不明。临床上常采用手术切除突出椎间盘组织或行椎体间融合术等以缓解症状，但术中不可避免地会破坏椎间盘和椎体附件的正常结构，引起继发的脊柱不稳或加速相邻椎间盘的退变，所以其远期疗效并不理想。组织工程学的发展为解决这一难题提供了一种新的选择，通过组织工程学的方法修复或复建退变椎间盘组织是目前国内外进行的一项热点研究工作。Nishimura 等发现通过早期移植自体髓核细胞可减缓甚至有逆转 IDD 发生的可能。髓核是乏细胞组织，而且髓核细胞体外培养表现出增殖缓慢，因此如何在体外培养时促进髓核细胞增殖并维持其表型成为细胞移植治疗研究 IDD 首先要解决的问题。 骨髓间充
21、质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells，bMSCs)是骨髓内除造血干细胞(hematopoietic stem cells，HSCs)之外的另一类干细胞，是骨髓造血微环境的重要组成部分，由于它们来自骨髓的支持结构，并作为滋养层支持造血干细胞的生长，因此也被称为骨基质细胞(bone marrow stromalcells，bMSCs)。随着组织工程学的发展，bMSCs 作为一种具有多种分化潜能的种子细胞越来越受到人们的关注和研究。但实际上，人们认识 bMSCs 的功能是从对造血组织的支持和调控造血的作用开始的，近年来研究发现该类细胞在体内、
22、外对共培养的其它组织和细胞也有支持和辅助作用。 纤维环及移行区的组织均来源于间充质，采用比纤维环分化更早期的间充质干细胞与髓核细胞共培养理论上也存在上调髓核细胞活性的可能，本研究拟通过建立共培养模型探讨骨髓间充质干细胞对髓核细胞活性的影响。 目的：建立髓核细胞与骨髓间充质干细胞共培养的模型，研究体外共培养条件下骨髓间充质干细胞对髓核细胞活性的影响，以探讨一种在体外培养条件下安全、简便的提高髓核细胞的活性方法。 方法：将术中取获取的成人骨髓标本分离出 bMSCs 经过传代、纯化、取Plt;,3gt;代 bMSCs 按每孔 110lt;#39;4gt;接种于 transwell 插入式共培养皿(6
23、 孔板)底层，共 12 孔；再将术中获取的成人髓核标本分离出髓核细胞，按每孔 110lt;#39;4gt;接种于共培养皿上层，重复 12 孔作为实验组；另按 110lt;#39;4gt;接种髓核细胞于普通 6 孔培养板，重复 12 孔作为对照组。培养过程中观察共培养条件下髓核细胞形态变化，待共培养皿中髓核细胞融合后，分别计数实验组与对照组中髓核细胞，同时用酶联免疫吸附剂测定法(enzyme-linked immunosobnent assay，ELISA)方法检测培养上清液中蛋白多糖含量变化，并进行比较。 结果：经过共培养后 8 天实验组中的髓核细胞达到 90融合，而对照组中的髓核细胞只在局部
24、有少量融合，大部分细胞仍然呈散在分布。细胞计数显示实验组髓核细胞的增殖速度及 ELISA 法测定的实验组蛋白多糖合成均较对照组明显提高(Plt;0.01)。 结论：成功建立骨髓间充质干细胞与髓核细胞共培养模型，与骨髓间充质干细胞共培养后髓核细胞增殖速度增加、活性上调。背景介绍：椎间盘退变(intervertebral disc degeneration，IDD)导致的腰椎间盘突出症和慢性腰腿痛是骨科常见疾患，其具体机制不明。临床上常采用手术切除突出椎间盘组织或行椎体间融合术等以缓解症状，但术中不可避免地会破坏椎间盘和椎体附件的正常结构，引起继发的脊柱不稳或加速相邻椎间盘的退变，所以其远期疗效并
25、不理想。组织工程学的发展为解决这一难题提供了一种新的选择，通过组织工程学的方法修复或复建退变椎间盘组织是目前国内外进行的一项热点研究工作。Nishimura 等发现通过早期移植自体髓核细胞可减缓甚至有逆转 IDD 发生的可能。髓核是乏细胞组织，而且髓核细胞体外培养表现出增殖缓慢，因此如何在体外培养时促进髓核细胞增殖并维持其表型成为细胞移植治疗研究 IDD 首先要解决的问题。 骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells，bMSCs)是骨髓内除造血干细胞(hematopoietic stem cells，HSCs)之外的另一类干细胞，是骨
26、髓造血微环境的重要组成部分，由于它们来自骨髓的支持结构，并作为滋养层支持造血干细胞的生长，因此也被称为骨基质细胞(bone marrow stromalcells，bMSCs)。随着组织工程学的发展，bMSCs 作为一种具有多种分化潜能的种子细胞越来越受到人们的关注和研究。但实际上，人们认识 bMSCs 的功能是从对造血组织的支持和调控造血的作用开始的，近年来研究发现该类细胞在体内、外对共培养的其它组织和细胞也有支持和辅助作用。 纤维环及移行区的组织均来源于间充质，采用比纤维环分化更早期的间充质干细胞与髓核细胞共培养理论上也存在上调髓核细胞活性的可能，本研究拟通过建立共培养模型探讨骨髓间充质干
27、细胞对髓核细胞活性的影响。 目的：建立髓核细胞与骨髓间充质干细胞共培养的模型，研究体外共培养条件下骨髓间充质干细胞对髓核细胞活性的影响，以探讨一种在体外培养条件下安全、简便的提高髓核细胞的活性方法。 方法：将术中取获取的成人骨髓标本分离出 bMSCs 经过传代、纯化、取Plt;,3gt;代 bMSCs 按每孔 110lt;#39;4gt;接种于 transwell 插入式共培养皿(6 孔板)底层，共 12 孔；再将术中获取的成人髓核标本分离出髓核细胞，按每孔 110lt;#39;4gt;接种于共培养皿上层，重复 12 孔作为实验组；另按 110lt;#39;4gt;接种髓核细胞于普通 6 孔培
28、养板，重复 12 孔作为对照组。培养过程中观察共培养条件下髓核细胞形态变化，待共培养皿中髓核细胞融合后，分别计数实验组与对照组中髓核细胞，同时用酶联免疫吸附剂测定法(enzyme-linked immunosobnent assay，ELISA)方法检测培养上清液中蛋白多糖含量变化，并进行比较。 结果：经过共培养后 8 天实验组中的髓核细胞达到 90融合，而对照组中的髓核细胞只在局部有少量融合，大部分细胞仍然呈散在分布。细胞计数显示实验组髓核细胞的增殖速度及 ELISA 法测定的实验组蛋白多糖合成均较对照组明显提高(Plt;0.01)。 结论：成功建立骨髓间充质干细胞与髓核细胞共培养模型，与骨
29、髓间充质干细胞共培养后髓核细胞增殖速度增加、活性上调。背景介绍：椎间盘退变(intervertebral disc degeneration，IDD)导致的腰椎间盘突出症和慢性腰腿痛是骨科常见疾患，其具体机制不明。临床上常采用手术切除突出椎间盘组织或行椎体间融合术等以缓解症状，但术中不可避免地会破坏椎间盘和椎体附件的正常结构，引起继发的脊柱不稳或加速相邻椎间盘的退变，所以其远期疗效并不理想。组织工程学的发展为解决这一难题提供了一种新的选择，通过组织工程学的方法修复或复建退变椎间盘组织是目前国内外进行的一项热点研究工作。Nishimura 等发现通过早期移植自体髓核细胞可减缓甚至有逆转 IDD
30、发生的可能。髓核是乏细胞组织，而且髓核细胞体外培养表现出增殖缓慢，因此如何在体外培养时促进髓核细胞增殖并维持其表型成为细胞移植治疗研究 IDD 首先要解决的问题。 骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells，bMSCs)是骨髓内除造血干细胞(hematopoietic stem cells，HSCs)之外的另一类干细胞，是骨髓造血微环境的重要组成部分，由于它们来自骨髓的支持结构，并作为滋养层支持造血干细胞的生长，因此也被称为骨基质细胞(bone marrow stromalcells，bMSCs)。随着组织工程学的发展，bMSCs 作
31、为一种具有多种分化潜能的种子细胞越来越受到人们的关注和研究。但实际上，人们认识 bMSCs 的功能是从对造血组织的支持和调控造血的作用开始的，近年来研究发现该类细胞在体内、外对共培养的其它组织和细胞也有支持和辅助作用。 纤维环及移行区的组织均来源于间充质，采用比纤维环分化更早期的间充质干细胞与髓核细胞共培养理论上也存在上调髓核细胞活性的可能，本研究拟通过建立共培养模型探讨骨髓间充质干细胞对髓核细胞活性的影响。 目的：建立髓核细胞与骨髓间充质干细胞共培养的模型，研究体外共培养条件下骨髓间充质干细胞对髓核细胞活性的影响，以探讨一种在体外培养条件下安全、简便的提高髓核细胞的活性方法。 方法：将术中取
32、获取的成人骨髓标本分离出 bMSCs 经过传代、纯化、取Plt;,3gt;代 bMSCs 按每孔 110lt;#39;4gt;接种于 transwell 插入式共培养皿(6 孔板)底层，共 12 孔；再将术中获取的成人髓核标本分离出髓核细胞，按每孔 110lt;#39;4gt;接种于共培养皿上层，重复 12 孔作为实验组；另按 110lt;#39;4gt;接种髓核细胞于普通 6 孔培养板，重复 12 孔作为对照组。培养过程中观察共培养条件下髓核细胞形态变化，待共培养皿中髓核细胞融合后，分别计数实验组与对照组中髓核细胞，同时用酶联免疫吸附剂测定法(enzyme-linked immunosobn
33、ent assay，ELISA)方法检测培养上清液中蛋白多糖含量变化，并进行比较。 结果：经过共培养后 8 天实验组中的髓核细胞达到 90融合，而对照组中的髓核细胞只在局部有少量融合，大部分细胞仍然呈散在分布。细胞计数显示实验组髓核细胞的增殖速度及 ELISA 法测定的实验组蛋白多糖合成均较对照组明显提高(Plt;0.01)。 结论：成功建立骨髓间充质干细胞与髓核细胞共培养模型，与骨髓间充质干细胞共培养后髓核细胞增殖速度增加、活性上调。背景介绍：椎间盘退变(intervertebral disc degeneration，IDD)导致的腰椎间盘突出症和慢性腰腿痛是骨科常见疾患，其具体机制不明。
34、临床上常采用手术切除突出椎间盘组织或行椎体间融合术等以缓解症状，但术中不可避免地会破坏椎间盘和椎体附件的正常结构，引起继发的脊柱不稳或加速相邻椎间盘的退变，所以其远期疗效并不理想。组织工程学的发展为解决这一难题提供了一种新的选择，通过组织工程学的方法修复或复建退变椎间盘组织是目前国内外进行的一项热点研究工作。Nishimura 等发现通过早期移植自体髓核细胞可减缓甚至有逆转 IDD 发生的可能。髓核是乏细胞组织，而且髓核细胞体外培养表现出增殖缓慢，因此如何在体外培养时促进髓核细胞增殖并维持其表型成为细胞移植治疗研究 IDD 首先要解决的问题。 骨髓间充质干细胞(bone marrow-deri
35、ved mesenchymal stem cells，bMSCs)是骨髓内除造血干细胞(hematopoietic stem cells，HSCs)之外的另一类干细胞，是骨髓造血微环境的重要组成部分，由于它们来自骨髓的支持结构，并作为滋养层支持造血干细胞的生长，因此也被称为骨基质细胞(bone marrow stromalcells，bMSCs)。随着组织工程学的发展，bMSCs 作为一种具有多种分化潜能的种子细胞越来越受到人们的关注和研究。但实际上，人们认识 bMSCs 的功能是从对造血组织的支持和调控造血的作用开始的，近年来研究发现该类细胞在体内、外对共培养的其它组织和细胞也有支持和辅助作
36、用。 纤维环及移行区的组织均来源于间充质，采用比纤维环分化更早期的间充质干细胞与髓核细胞共培养理论上也存在上调髓核细胞活性的可能，本研究拟通过建立共培养模型探讨骨髓间充质干细胞对髓核细胞活性的影响。 目的：建立髓核细胞与骨髓间充质干细胞共培养的模型，研究体外共培养条件下骨髓间充质干细胞对髓核细胞活性的影响，以探讨一种在体外培养条件下安全、简便的提高髓核细胞的活性方法。 方法：将术中取获取的成人骨髓标本分离出 bMSCs 经过传代、纯化、取Plt;,3gt;代 bMSCs 按每孔 110lt;#39;4gt;接种于 transwell 插入式共培养皿(6 孔板)底层，共 12 孔；再将术中获取的
37、成人髓核标本分离出髓核细胞，按每孔 110lt;#39;4gt;接种于共培养皿上层，重复 12 孔作为实验组；另按 110lt;#39;4gt;接种髓核细胞于普通 6 孔培养板，重复 12 孔作为对照组。培养过程中观察共培养条件下髓核细胞形态变化，待共培养皿中髓核细胞融合后，分别计数实验组与对照组中髓核细胞，同时用酶联免疫吸附剂测定法(enzyme-linked immunosobnent assay，ELISA)方法检测培养上清液中蛋白多糖含量变化，并进行比较。 结果：经过共培养后 8 天实验组中的髓核细胞达到 90融合，而对照组中的髓核细胞只在局部有少量融合，大部分细胞仍然呈散在分布。细胞
38、计数显示实验组髓核细胞的增殖速度及 ELISA 法测定的实验组蛋白多糖合成均较对照组明显提高(Plt;0.01)。 结论：成功建立骨髓间充质干细胞与髓核细胞共培养模型，与骨髓间充质干细胞共培养后髓核细胞增殖速度增加、活性上调。背景介绍：椎间盘退变(intervertebral disc degeneration，IDD)导致的腰椎间盘突出症和慢性腰腿痛是骨科常见疾患，其具体机制不明。临床上常采用手术切除突出椎间盘组织或行椎体间融合术等以缓解症状，但术中不可避免地会破坏椎间盘和椎体附件的正常结构，引起继发的脊柱不稳或加速相邻椎间盘的退变，所以其远期疗效并不理想。组织工程学的发展为解决这一难题提供
39、了一种新的选择，通过组织工程学的方法修复或复建退变椎间盘组织是目前国内外进行的一项热点研究工作。Nishimura 等发现通过早期移植自体髓核细胞可减缓甚至有逆转 IDD 发生的可能。髓核是乏细胞组织，而且髓核细胞体外培养表现出增殖缓慢，因此如何在体外培养时促进髓核细胞增殖并维持其表型成为细胞移植治疗研究 IDD 首先要解决的问题。 骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells，bMSCs)是骨髓内除造血干细胞(hematopoietic stem cells，HSCs)之外的另一类干细胞，是骨髓造血微环境的重要组成部分，由于它们来自骨
40、髓的支持结构，并作为滋养层支持造血干细胞的生长，因此也被称为骨基质细胞(bone marrow stromalcells，bMSCs)。随着组织工程学的发展，bMSCs 作为一种具有多种分化潜能的种子细胞越来越受到人们的关注和研究。但实际上，人们认识 bMSCs 的功能是从对造血组织的支持和调控造血的作用开始的，近年来研究发现该类细胞在体内、外对共培养的其它组织和细胞也有支持和辅助作用。 纤维环及移行区的组织均来源于间充质，采用比纤维环分化更早期的间充质干细胞与髓核细胞共培养理论上也存在上调髓核细胞活性的可能，本研究拟通过建立共培养模型探讨骨髓间充质干细胞对髓核细胞活性的影响。 目的：建立髓核
41、细胞与骨髓间充质干细胞共培养的模型，研究体外共培养条件下骨髓间充质干细胞对髓核细胞活性的影响，以探讨一种在体外培养条件下安全、简便的提高髓核细胞的活性方法。 方法：将术中取获取的成人骨髓标本分离出 bMSCs 经过传代、纯化、取Plt;,3gt;代 bMSCs 按每孔 110lt;#39;4gt;接种于 transwell 插入式共培养皿(6 孔板)底层，共 12 孔；再将术中获取的成人髓核标本分离出髓核细胞，按每孔 110lt;#39;4gt;接种于共培养皿上层，重复 12 孔作为实验组；另按 110lt;#39;4gt;接种髓核细胞于普通 6 孔培养板，重复 12 孔作为对照组。培养过程中
42、观察共培养条件下髓核细胞形态变化，待共培养皿中髓核细胞融合后，分别计数实验组与对照组中髓核细胞，同时用酶联免疫吸附剂测定法(enzyme-linked immunosobnent assay，ELISA)方法检测培养上清液中蛋白多糖含量变化，并进行比较。 结果：经过共培养后 8 天实验组中的髓核细胞达到 90融合，而对照组中的髓核细胞只在局部有少量融合，大部分细胞仍然呈散在分布。细胞计数显示实验组髓核细胞的增殖速度及 ELISA 法测定的实验组蛋白多糖合成均较对照组明显提高(Plt;0.01)。 结论：成功建立骨髓间充质干细胞与髓核细胞共培养模型，与骨髓间充质干细胞共培养后髓核细胞增殖速度增加
43、、活性上调。背景介绍：椎间盘退变(intervertebral disc degeneration，IDD)导致的腰椎间盘突出症和慢性腰腿痛是骨科常见疾患，其具体机制不明。临床上常采用手术切除突出椎间盘组织或行椎体间融合术等以缓解症状，但术中不可避免地会破坏椎间盘和椎体附件的正常结构，引起继发的脊柱不稳或加速相邻椎间盘的退变，所以其远期疗效并不理想。组织工程学的发展为解决这一难题提供了一种新的选择，通过组织工程学的方法修复或复建退变椎间盘组织是目前国内外进行的一项热点研究工作。Nishimura 等发现通过早期移植自体髓核细胞可减缓甚至有逆转 IDD 发生的可能。髓核是乏细胞组织，而且髓核细胞
44、体外培养表现出增殖缓慢，因此如何在体外培养时促进髓核细胞增殖并维持其表型成为细胞移植治疗研究 IDD 首先要解决的问题。 骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells，bMSCs)是骨髓内除造血干细胞(hematopoietic stem cells，HSCs)之外的另一类干细胞，是骨髓造血微环境的重要组成部分，由于它们来自骨髓的支持结构，并作为滋养层支持造血干细胞的生长，因此也被称为骨基质细胞(bone marrow stromalcells，bMSCs)。随着组织工程学的发展，bMSCs 作为一种具有多种分化潜能的种子细胞越来越受到
45、人们的关注和研究。但实际上，人们认识 bMSCs 的功能是从对造血组织的支持和调控造血的作用开始的，近年来研究发现该类细胞在体内、外对共培养的其它组织和细胞也有支持和辅助作用。 纤维环及移行区的组织均来源于间充质，采用比纤维环分化更早期的间充质干细胞与髓核细胞共培养理论上也存在上调髓核细胞活性的可能，本研究拟通过建立共培养模型探讨骨髓间充质干细胞对髓核细胞活性的影响。 目的：建立髓核细胞与骨髓间充质干细胞共培养的模型，研究体外共培养条件下骨髓间充质干细胞对髓核细胞活性的影响，以探讨一种在体外培养条件下安全、简便的提高髓核细胞的活性方法。 方法：将术中取获取的成人骨髓标本分离出 bMSCs 经过
46、传代、纯化、取Plt;,3gt;代 bMSCs 按每孔 110lt;#39;4gt;接种于 transwell 插入式共培养皿(6 孔板)底层，共 12 孔；再将术中获取的成人髓核标本分离出髓核细胞，按每孔 110lt;#39;4gt;接种于共培养皿上层，重复 12 孔作为实验组；另按 110lt;#39;4gt;接种髓核细胞于普通 6 孔培养板，重复 12 孔作为对照组。培养过程中观察共培养条件下髓核细胞形态变化，待共培养皿中髓核细胞融合后，分别计数实验组与对照组中髓核细胞，同时用酶联免疫吸附剂测定法(enzyme-linked immunosobnent assay，ELISA)方法检测培
47、养上清液中蛋白多糖含量变化，并进行比较。 结果：经过共培养后 8 天实验组中的髓核细胞达到 90融合，而对照组中的髓核细胞只在局部有少量融合，大部分细胞仍然呈散在分布。细胞计数显示实验组髓核细胞的增殖速度及 ELISA 法测定的实验组蛋白多糖合成均较对照组明显提高(Plt;0.01)。 结论：成功建立骨髓间充质干细胞与髓核细胞共培养模型，与骨髓间充质干细胞共培养后髓核细胞增殖速度增加、活性上调。背景介绍：椎间盘退变(intervertebral disc degeneration，IDD)导致的腰椎间盘突出症和慢性腰腿痛是骨科常见疾患，其具体机制不明。临床上常采用手术切除突出椎间盘组织或行椎体
48、间融合术等以缓解症状，但术中不可避免地会破坏椎间盘和椎体附件的正常结构，引起继发的脊柱不稳或加速相邻椎间盘的退变，所以其远期疗效并不理想。组织工程学的发展为解决这一难题提供了一种新的选择，通过组织工程学的方法修复或复建退变椎间盘组织是目前国内外进行的一项热点研究工作。Nishimura 等发现通过早期移植自体髓核细胞可减缓甚至有逆转 IDD 发生的可能。髓核是乏细胞组织，而且髓核细胞体外培养表现出增殖缓慢，因此如何在体外培养时促进髓核细胞增殖并维持其表型成为细胞移植治疗研究 IDD 首先要解决的问题。 骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem
49、cells，bMSCs)是骨髓内除造血干细胞(hematopoietic stem cells，HSCs)之外的另一类干细胞，是骨髓造血微环境的重要组成部分，由于它们来自骨髓的支持结构，并作为滋养层支持造血干细胞的生长，因此也被称为骨基质细胞(bone marrow stromalcells，bMSCs)。随着组织工程学的发展，bMSCs 作为一种具有多种分化潜能的种子细胞越来越受到人们的关注和研究。但实际上，人们认识 bMSCs 的功能是从对造血组织的支持和调控造血的作用开始的，近年来研究发现该类细胞在体内、外对共培养的其它组织和细胞也有支持和辅助作用。 纤维环及移行区的组织均来源于间充质，采用比纤维环分化更早期的间充质干细胞与髓核细胞共培养理论上也存在上调髓核细胞活性的可能，本研究拟通过建立共培养模型探讨骨髓间充质干细胞对髓核细胞活性的影响。 目的：建立髓核细胞与骨髓间充质干细胞共培养的模型，研究体外共培养条件下骨髓间充质干细胞对髓核细胞活性的影响，以探讨一种在体外培养条件下安全、简便的提高髓核细胞的活性方法。 方法：将术中取获取的成人骨髓标本分离出 bMSCs 经过传代、
