大肠杆菌感受态细胞的制备 转化与鉴定 一 目的 把体外重组的DNA引入受体细胞 二 原理 一 遗传物质的传递 二 受体菌的选择与改造 三 感受态细胞的制备 氯化钙法 1 划平板培养菌种2 挑单菌落培养过夜3 菌体的扩大培养 以下步骤均在冰浴中进行 4 4 离心 4000rpm 10min 弃去上清 用冰浴的0 1MMgCl225ml悬浮30min5 4 离心 4000rpm 10min 弃去上清 加入冰浴的0 1MCaCl2 甘油溶液1ml悬浮 以100 l 管分装入1 5ml离心管中 70 冻存备用 四 感受态细胞的转化 1 取100 l贮存于 70 钙化菌 冰浴化开 2 加入适量连接产物 轻混匀 冰浴20min 3 于42 热休克90s 迅速转移至冰浴中 继续冰浴2 3min 4 加入LB液体培养基200 l 于37 缓摇孵育45min 5 将培养物适量涂于1 5 琼脂LB平板 根据质粒性质添加抗生素或 和X Gal IPTG 待胶表面没有液体流动时 37 温箱倒置培养12 16hr 五 重组子的筛选 1 耐药性基因2 蓝白斑筛选
