1、实验二 叶绿体的分离与观察一、 实验目的与原理,原理：采用差速离心分离细胞器 组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离细胞器的常用方法。一个颗粒在离心场中的沉降速率取决于颗粒的大小、形状和密度，也同离心力以及悬浮介质的粘度有关。在一给定的离心场中，同一时间内，密度和大小不同的颗粒其沉降速率不同。依次增加离心力和离心时间，就能使非均一悬浮液中的颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心管底部，分批收集即可获得各种亚细胞组分。 沉降顺序：核线粒体溶酶体与过氧化物酶体内质网与高尔基 体核蛋白体 叶绿体具有荧光现象，可利用荧光显微镜观察。 菠菜叶富含叶绿体，可采用徒手切片观察其形态和分布；,目的：1、
2、通过植物细胞叶绿体的分离，了解细胞器分离的一般原理与方法； 了解差速离心 （Differential centrifugation）特点与用途. 2、了解菠菜叶绿体的形态、分布与数量。,Low speed,High speed,Differential centrifugation,二、实验用品,1.材料：新鲜菠菜 2.器材：离心机，研钵，漏斗，试管架，纱布，显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、50ml烧杯2个、10ml刻度离心管20支 3.试剂: 0.35M 氯化钠溶液,三、实验步骤,（一）叶绿体的分离与观察 1.取新嫩菠菜叶，洗净檫干、去梗，称20g，分批放入研钵。 2.加入0.35mol/L氯
3、化钠溶液， 共20ml，研磨，制成匀浆； 3.将匀浆用层纱布过滤于烧杯中； 4.取过滤液ml，放入5ml离心管中，1000r/min离心min； 5.取上清液转入另一5ml离心管中，3000r/min离心min； 6.去上清，沉淀即为叶绿体（混有部分细胞核），加入0.35mol/L NaCl 溶液100ul悬浮沉淀； 7.取含有叶绿体悬液滴于载玻片上，加盖片，普通光镜下观察。 荧光显微镜下演示 （二）菠菜叶徒手切片观察 用刀片将新鲜的嫩菠菜叶切削出一斜面（片）置于载玻片上，加入0.35mol/L 氯化钠溶液滴，加盖片轻压，光镜下观察叶绿体在表皮细胞和保卫细胞中的分布。,四、实验结果 普通光镜下，可看到叶绿体为绿色橄榄形，在高倍镜下可看到叶绿体内部含有较深的绿色小颗粒，即基粒。,五、实验报告 1. 简述：叶绿体的分离原理和方法； 2. 绘图：菠菜叶肉细胞的形态，显示叶绿体。,
