1、基础生物学实验 C微生物学实验教学大纲课程编号：08207018 学时：25.5 学分：1.5开课对象：生物科学 课程类别：专业的必修课英文译名： Basic Biology Experiment ( C)一、教学任务和目的微生物实验是微生物学的重要组成部分，是生物专业的必修课。通过本实验的教学，应使学生掌握微生物学的基本技能，为曰后更深的研究打下基础，并能胜任初等中学的教学要求。要求学生掌握以无菌操作和纯种培养为重点的基本实验技术，了解微生物的生理生化鉴定特征，以及微生物育种的一般方法和微生物在工业、农业、医学、环境和日常生活中的某些应用。二、教学基本要求（一） 使学生掌握微生物实验的基本操
2、作技术，验证、理解并拓宽理论知识（二） 培养学生的综合能力，即观察、思考、分析、解决问题的能力（三） 在实验的过程中，培养学生在科学研究中的严肃的态度，严密的科学实验方法和严谨的工作作风为他们能适应未来更高层次的研究和胜任以后的工作岗位奠定了良好的基础三、教学内容（一）牛肉膏蛋白胨、高氏 1 号、马丁（链霉素、孟加拉红、去氧胆酸钠） 、豆芽汁葡萄糖培养基的配置、灭菌物品的准备及灭菌1、目的要求（1）了解培养基的配置原理（2）了解培养基配置的常规程序（3）学习和掌握牛肉膏蛋白胨、高氏 1 号、马丁（链霉素、孟加拉红、去氧胆酸钠） 、豆芽汁葡萄糖培养基的配置方法。（4）了解高压蒸汽灭菌的原理（5）
3、学习并掌握高压蒸汽灭菌的操作。2、材料用品牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、蒸馏水、可溶性淀粉、牛肉浸膏、 葡萄糖、 酵母浸膏、 磷酸氢二钾、七水硫酸镁、 磷酸二氢钾、 孟加拉红(1%)、链霉素、 黄豆芽、去氧胆酸钠、1NNaoH、1NHCl；三角瓶、培养皿、试管、1m吸管、棉花、纱布、剪刀、报纸、高压蒸汽灭菌锅、玻璃棒、大烧杯、试纸、量筒、天平、绳等。3、内容与方法（1）准备灭菌材料（2）配制牛肉膏蛋白胨、高氏 1 号、马丁、豆芽汁葡萄糖培养基（3）将包装后的灭菌物品用高压蒸汽灭菌锅灭菌（4）将装于试管的固体培养基摆斜面，其它准备材料妥善放置。（二） 、土壤中细菌、放线菌、酵母菌及霉菌计数、分
4、离与纯化1、目的要求（1）学习掌握细菌、放线菌、酵母菌及霉菌稀释分离技术、划线分离技术。（2）学习从样品中分离、纯化出所需菌株。（3）学习并掌握平板倾注法、涂布法和斜面接种技术，了解培养细菌、放线菌、酵母菌及霉菌四大类微生物的培养时间和培养条件。（4）学习平板菌落计数法。2、实验材料（1）土样取土样(如诸暨黑李果园)，铲去表土层 2-3cm 深土壤 10g，装入已灭过菌的广口瓶内，记录时间及环境。（2）培养基（平板及斜面）牛肉膏蛋白胨、高氏 1 号、马丁氏（链霉素、孟加拉红、去氧胆酸钠） 、豆芽汁葡萄糖（3）无菌水250ml 三角瓶装 99ml 无菌水 2 瓶，250ml 三角瓶装 95ml
5、无菌水（霉菌） ，每瓶装 10 粒玻璃珠。每组 5 支试管，装 4.5ml 无菌水（4）其它物品无菌培养皿、无菌移液管（5 支/组） 、 、无菌玻璃涂棒、称量纸、试管架、药勺、10%酚溶液 接种环、3、实验内容及方法（1）稀释各样品（2）牛肉膏蛋白胨培养基涂布法分离细菌、（3）豆芽汁葡萄糖培养基涂布法分离酵母菌、计数并挑取某个菌落做斜面划线培养。（4）高氏 1 号培养基倾注法分离放线菌、计数并挑取某个菌落孢子做平板培养。（5）马丁氏培养基倾注法法分离霉菌、计数并挑取某个菌落孢子做平板培养。（三） 、细菌的形态结构观察（菌落形态、革兰氏染色及个体形态）酵母菌的形态结构观察（菌落形态、美兰染色及死
6、活鉴别） 1、目的要求（1）识别细菌、酵母菌的菌落形态特征（观察细菌、酵母菌的菌落形态、大小、色泽、透明度和边缘特征。（2）掌握细菌涂片方法及革兰氏染色步骤，并在显微镜下观察细菌的形态。（3）酵母菌的细胞形态及出芽观察，并掌握区分酵母菌死活的染色方法。2、实验材料（1）药品0.05%的吕氏碱性美兰 结晶紫染液 卢戈氏碘液 95%乙醇 蕃红（复红） 香柏油 二甲苯（2）菌种金黄色葡萄球菌 大肠杆菌 自接菌种（可疑细菌和酵母） 待定菌种 酿酒酵母 （3）其它物品显微镜 擦镜纸 载玻片 吸水纸 盖玻片3、实验内容与方法（1）观察自接菌种（可疑细菌和酵母）的平板、斜面菌落或菌苔形态（2）革兰氏染色。（
7、3）观察大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、自接菌种（可疑细菌） 、待定菌种的细胞形态。（4）酵母菌的美兰染色及死活细胞的鉴别。（四）芽孢及荚膜染色1、目的要求学习几种细菌的特殊的染色方法，包括芽孢及荚膜染色。观察各染色特征2、实验材料（1）菌种枯草芽孢杆菌 大肠杆菌 自接菌种（可疑细菌）黄单胞菌（2）药物孔雀绿染液 0.5%的蕃红水溶液 绘图墨汁（上海墨水厂沪光绘图墨水）或荚膜染色掖 纯甲醇 （3）其它物品载玻片 盖玻片 无菌水3、实验内容（1）芽孢染色（2）荚膜染色法（五） 、放线菌、霉菌的形态结构观察1、目的要求掌握观察放线菌、霉菌的形态结构的基本方法，并观察放线菌、霉菌的形态特征。2、实验材料（
8、1）菌种自接放线菌平板和插片平板，自接霉菌平板（2）药物吕氏碱性美兰 乳酸石炭酸溶液（3）其它物品载玻片 盖玻片 接种铲3、实验内容（1）放线菌的形态观察（2）霉菌的形态观察（六） 、常见的生理生化试验1、目的要求了解细菌的各种生化反应的原理，掌握利用这些反应来鉴定细菌的方法。2、材料用品；大肠杆菌、枯草杆菌、黄单孢菌、金黄色葡萄球菌、自接细菌斜面；乳糖发酵管（内倒置小套管） 、葡萄糖蛋白胨水、柠檬酸铁铵培养基、蛋白胨水、淀粉培养基（装于平皿中） 、柠檬酸盐培养基（斜面） ；吲哚试剂、碘液、乙醚、甲基红试剂、40KOH、5-萘酚、6过氧化氢酶；接种环、酒精灯。3、内容与方法（1）糖发酵试验（2
9、）淀粉水解试验（3）吲哚试验（4）M-R 试验（5）V-P 试验 （6）柠檬酸盐利用试验（七） 、药物和生物因素对细菌生长的影响1、目的要求（1）了解药物对微生物生长的抑制效应。（2）了解生物因素对微生物生长的影响。2、材料用品大肠杆菌、枯草杆菌、黄单孢菌、金黄色葡萄球菌、自接细菌斜面 产黄青霉无菌水、无菌的培养皿、无菌的移液管、牛肉膏蛋白胨培养基、土霉素、新洁尔灭、结晶紫、青霉素、链霉素3、内容与方法（1）不同药物的杀菌试验（小圆纸片法）（2）霉菌的抗菌谱试验（八） 、紫外线对枯草芽孢杆菌产生淀粉酶的影响1、目的要求观察紫外线对枯草芽孢杆菌产生淀粉酶的诱变效应，学习掌握物理诱变育种的方法。
10、2、材料用品枯草杆菌 淀粉培养基平板 碘液 生理盐水 无菌水 无菌吸管 磁力搅拌器 离心机 灭菌的空培养皿 涂布棒3、内容与方法（1）菌悬液的制备（2）诱变处理（3）计算存活率和致死率（4）观察诱变效应（九） 水中大肠菌群的测定1、目的要求了解大肠菌群的数量在饮水中的重要性；学习测定水中大肠菌群数量的多管发酵法（GB） 。 2、材料用品：某生态中水样；乳糖蛋白胨发酵管（内倒置小套管） ，三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管（内倒置小套管） ，伊红美蓝琼脂平板，无菌水；革兰氏染色液；灭菌带玻璃塞瓶、灭菌吸管、显微镜、载玻片。3、内容与方法水中大肠菌群的测定（发酵法）1、 初发酵试验2、 固体培养3、 复发酵
11、试验（十） 、 噬菌体的分离与纯化1、目的要求学习分离、纯化噬菌体的基本原理和方法，观察噬菌斑。2、材料用品大肠杆菌斜面（培养 18 小时） ，阴沟污水；牛肉膏蛋白胨培养基固体、半固体、液体培养基。三角瓶装三倍浓缩液体培养基、试管液体培养基。固体琼脂平板。上层琼脂培养基（含琼脂 0.7，试管分装每管 4ml） ，底层琼脂平板（含培养基 10ml，琼脂 2） ；灭菌吸管、灭菌玻璃涂布器，灭菌细菌过滤器、灭菌三角瓶、恒温水浴箱、酒精灯、接种环、离心机。3、内容与方法（1）噬菌体分离（2）噬菌体的纯化（3）高效价噬菌体的制备（十一）酒精发酵 1、目的要求掌握酒精发酵的机理和工艺技术。2、材料用品黑曲
12、霉 Uv48，酵母菌南阳五号（1300）斜面；地瓜面、麸皮、麦芽汁培养基；温度计、酒度汁、恒温水浴箱、三角瓶、高压蒸汽灭菌锅、接种环、酒精灯等。3、内容与方法（1）糖化曲的制备（2）酵母培养（3）原料蒸煮（4）糖化（5）酒精发酵（6）蒸馏（7）测酒精度（十二） 、考试（笔试和操作） 1、目的要求1.使同学针对自己的薄弱环节进行练习，最后一次查漏补缺，巩固实验知识和技能。2.督促全面掌握微生物实验的知识，培养他们的综合能力。2、材料用品固体、半固体、液体牛肉膏蛋白胨培养基固体：三角瓶装、斜面、平板 半固体试管液体：三角瓶、试管 灭菌的移液管 9 支 枯草、大肠、金葡斜面3、内容与方法考试的形式分
13、笔试和操作两种。笔试的内容包括各实验中的难点、关键、基本原理、实验过程、结果分析和一些设计题等，要突出设计题和分析题；操作包括微生物的各种基本操作技术（如灭菌器皿的包扎、培养基的配制、灭菌技术，接种和制片技术，显微镜技术，微生物的分离和培养技术等）和一些综合实验，将每种操作技术的各要点分别定量计分。可将这些题编好号，采用抽签答题，抽到笔试和具体的技术的操作题要当场作答或当场进行，抽到综合实验操作题的可让学生设计好后再在规定时间独立完成。四、学时分配总学时 25.5 学时类别 实验名称 学时 开课学期 必做/选做1 牛肉膏蛋白胨、高氏 1 号、马丁、豆芽汁葡萄糖培养基的配置、灭菌物品的准备及灭菌
14、6 必做2 土壤中细菌、放线菌、酵母菌及霉菌计数、分离与纯化3 必做3 细菌的形态结构观察（菌落形态、革兰氏染色及个体形态）酵母菌的形态结构观察（菌落形态、美兰染色及死活鉴别）3 必做4 芽孢和荚膜染色 3 必做5 放线菌、霉菌的形态结构观察 3 必做6 常见的生理生化试验 3 必做7 药物和生物因素对细菌生长的影响 3 选做8 紫外线对枯草芽孢杆菌产生淀粉酶的影响 3 选做9 水中大肠菌群的测定 6 选做10 噬菌体的分离与纯化 6 选做11 酒精发酵 6 选做12 考试 1.5 必做六、考核方式笔试和操作七、教材和参考书微生物学实验，沈萍等编，高等教育出版社,2000微生物学实验,黄仪秀等编, 高等教育出版社,1999微生物学实验（第二版） ，范秀容等编，高等教育出版社，1989微生物学实验教程，钱存柔等编，北京大学出版社，1999八、说明从实验一到实验八是以某特殊土壤如“诸暨黑李”发生了穿孔病果园土壤的四大类微生物调查、培养和观察，某分离细菌的形态和生理生化鉴定以及某个分离菌的诱变育种为课题的综合设计性实验；实验九到实验十一为设计性实验。
