1、实 时 荧 光 定 量 !“# 技 术 的 原 理 及 其 应 用 研 究 进 展赵 焕 英 $ 包 金 风!( 首 都 医 科 大 学 北 京 神 经 科 学 研 究 所 , 北 京 市 神 经 再 生 修 复 重 点 实 验 室 , 教 育 部 神 经 变 性 病 重 点 实 验 室 , 北 京 $ %:=8: ;64? A: B9:;:)$ $ 自 从 %(C/ 年 D?E; 发 明 聚 合 酶 链 式 反 应( ) : 以 !“# 反 应 的 前 %-个 循 环 的 荧 光 信 号 作 为 荧 光 本 底 信 号 , 一 般 荧 光 域值 定 义 为 / Q %- 个 循 环 的 荧
2、光 信 号 的 标 准 偏 差 的%64 。 “G 值 是 指 样 品 管 的 荧 光 信 号 达 到某 一 固 定 阈 值 的 !“# 反 应 循 环 数 。 在 !“# 循 环 过程 中 , 即 荧 光 信 号 开 始 由 本 底 进 入 指 数 增 长 阶 段 的拐 点 所 对 应 的 循 环 次 数 。 在 实 际 操 作 中 , 这 个 时 刻也 就 是 每 个 反 应 管 内 的 荧 光 信 号 到 达 设 定 的 域 值 的时 刻 , 可 见 “G 值 取 决 于 阈 值 。 #$#=: 是 指 模 板)*+ 的 起 始 拷 贝 数 ( 图 % 所 示 ) 。 经 数 学 证 明
3、 , “G值 与 模 板 )*+ 的 起 始 拷 贝 数 ( $#=) 成 反 比 。 典型 的 !“# 分 R 给 阶 段 ( 图 .) 。图 %$ 实 时 荧 光 定 量 !“# 几 个 重 要 参 数JEIS %$ 36: E7NO 9AX ! 45675. $,X P! 45675. 7+* A,# S! 4) 。常 用 的 荧 光 基 团 有 5=? 和 8(+A 6(B 。图 C 分 子 信 标5DE“ C ?-(7 ;-(7 ;-(7 ;-(7 ;-(7 ;-(: 等 确 定 了 实 时 定 量 !“# 的 技 术 条 件 ,利 用 两 种 发 光 探 针 及 适 当 的 循 环
4、 域 值 , 扩 增 一 个 转移 后 的 基 因 和 一 个 对 照 基 因 , 以 分 析 转 基 因 鼠 的 接合 性 +?。 同 型 结 合 的 和 异 质 接 合 的 动 物 交 配 后 其子 代 中 转 基 因 的 传 递 情 况 符 合 孟 德 尔 遗 传 规 律 , 通过 实 时 定 量 !“# 检 测 , 该 方 法 为 转 基 因 动 物 的 同型 结 合 及 异 质 接 合 提 供 了 明 确 的 鉴 定 结 果 。 这 项 技术 在 转 基 因 动 物 繁 育 及 基 因 剂 量 功 能 效 应 实 验 中 将有 很 大 用 途 。0?!“# 检 测 方 法 。 可 实
5、 现 大量 样 本 同 时 检 测 , 并 节 省 大 量 试 验 时 间 和 反 应 成本 , 为 基 因 定 量 检 测 和 准 确 定 量 疾 病 相 关 基 因 的 表达 提 供 了 有 效 的 技 术 手 段 ; 同 时 实 现 对 人 类 和 动 物疾 病 的 早 期 诊 断 与 基 因 分 期 、 分 型 , 以 及 对 人 类 肿瘤 转 移 的 早 期 发 现 及 预 后 判 断 56。 因 此 ?!“#技 术 将 成 为 未 来 分 子 生 物 学 实 验 室 必 备 的 研 究 工具 , 在 临 床 上 将 有 更 加 广 阔 的 应 用 前 景 。参 A 考 A 文 A
6、献 ( “B-CC #D1 BEF.-9+-G+- .-9FG8G+- -G-.CH /.8G9I-.1 “EJKLG 3LF/-+MGFB, (44=, N( () : (62(6 5 DL,8-B O%, PF9- D%, D8./LG 3, -/ 8B1 QM- .-8B/L!“#) IF. /M- .8KLR RL8CGF9-9 FIWL.8B 8G/LC-G9 8GR K8/MFBFCL+ K.F/-LG91 DFB-+EB8. %9K-+/9FI D-RL+LG-, 566N, 5): 550!5=2 56 -LB P, LY9FG1 QM- E9- FI .-8B/LJose M
7、A;Martin B The real-time polymerase chain reaction 20063.Jones C D;Yeung C;Zehnder J L Comprehensive validation of a real-time quantitative PCR assay forclinical laboratory use 2003(01)4.Wolfgang K;Jonathan N;Karas S Fluorogenic primers for real-time PCR 2003(07)5.Wittwer CT;Reed GH;Gundry CN High-r
8、esolution genotyping by amplicon melting analysis using LCGreen 2003(06)6.Zimmermann B;Holzgreve W;Wenzel F Novel real-time quantitative PCR test for trisomy 2002(02)7.Galbiati S;Smid M;Gambini D Fetal DNA detection in maternal plasma throughout gestation 2005(2-3)8.Robert M W;Stella L;Michael G Mea
9、surement of Epstein barr virus DNA loads in whole blood andplasma by Taq Man PCR and in peripheral blood lymphocytes by competitive PCR 20039.Magnus L;Charles H Dynamic range and reproducibility of hepatitis B virus (HBV) DNA detection andquantification by cobas Taqman HBV,a real-time semiautomated
10、assay 200510.Nathalie D;Axelle D;Vronique S Quantification of Human immunodeficiency virus type 1 proviralload by a TaqMan real-time PCR assay 200111.Hwa HL;Ko TM;Yen ML;Chiang YL Fetal gender determination using real-time quantitative polymerasechain reaction analysis of maternal plasma.外文期刊 2004(5
11、)12.刘敬忠,闫梅,王立荣,王战勇,周艳,肖白 实时荧光聚合酶链反应结合融解曲线分析在-地中海贫血基因诊断中的价值期刊论文-中华检验医学杂志 2005(8)13.Ueno H;Yoshida K;Hirai T;Kono F;Kambe M;Toge T Quantitative detection of carcinoembryonic antigenmessenger RNA in the peritoneal cavity of gastric cancer patients by real-time quantitative reversetranscription polymera
12、se chain reaction.外文期刊 2003(2C)14.Nieuwenhuis E J;Jaspars L H;Castelijns J A Quantitative molecular detection of minimal residualhead and neck cancer in lymph node aspirates 2003(02)15.Liew M;Pryor R;Palais R;Meadows C;Erali M;Lyon E;Wittwer C Genotyping of single-nucleotidepolymorphisms by high-res
13、olution melting of small amplicons.外文期刊 2004(7)16.Piet A;van Rijn;GerardJ W Detection of economically important viruses in boar semen byquantitative Real Time PCR technology 200417.Andersen CL;Jensen JL;Orntoft TF Normalisation of real-time quantitative reverse transcription-PCR data:a model-based v
14、ariance estimation approach to identify genes suited fornormalisation,applied to bladder and colon cancer data sets 200418.Pont-Kingdon G;Lyon E Direct molecular haplotyping by melting curve analysis of hybridisationprobes:beta 2-adrenergic receptor hapotypes as an example 200519.Janet Barletta Appl
15、ications of real-time immuno-polymerase chain reaction (rt-IPCR) for the rapiddiagnoses of viral antigens and pathologic proteins 200620.Neil J;Gibson The use of real-time PCR methods in DNA sequence variation analysis 2006本文读者也读过(9条)1. 尹兵 实时荧光定量PCR的原理及应用研究进展期刊论文-科技信息2010,2(17)2. 周晓丽.朱国坡.李雪华.王艳玲.刘兴友
16、.ZHOU Xiao-li.ZHU Guo-po.LI Xue-hua.WANG Yan-ling.IAU Xing-you 实时荧光定量PCR技术原理与应用期刊论文-中国畜牧兽医2010,37(2)3. 廉红霞.高腾云.傅彤.孙宇.李改英.LIAN Hong-xia.GAO Teng-yun.FU Tong.SUN Yu.LI Gai-ying 实时荧光定量PCR定量方法研究进展期刊论文-江西农业学报2010,22(10)4. 丁晓东.马国文.DING Xiao-dong.MA Guo-wen 实时荧光定量PCR技术研究进展及其应用期刊论文-内蒙古民族大学学报(自然科学版)2006,21(6
17、)5. 邓文星.张映.Deng Wenxing.Zhang Ying 实时荧光定量PCR技术综述期刊论文-生物技术通报2007(5)6. 陈旭.齐凤坤.康立功.李景富.CHEN Xu.QI Fengkun.KANG Ligong.LI Jingfu 实时荧光定量PCR技术研究进展及其应用期刊论文-东北农业大学学报2010,41(8)7. 薛霜.独军政.高闪电.常惠芸 实时荧光定量PCR技术研究进展及其在兽医学中的应用期刊论文-中国农学通报2010,26(7)8. 张蓓.沈立松 实时荧光定量PCR的研究进展及其应用期刊论文-国外医学(临床生物化学与检验学分册)2003,24(6)9. 刘小荣.张
18、笠.王勇平.Liu Xiao-rong.Zhang Li.Wang Yong-ping 实时荧光定量PCR技术的理论研究及其医学应用期刊论文-中国组织工程研究与临床康复2010,14(2)引证文献(122条)1.韩惠瑛,石丽瑞,张艳红 实时荧光定量PCR技术的应用期刊论文-中国畜禽种业 2014(03)2.刘萌,董亮 实时荧光定量PCR技术的原理、流程以及应用期刊论文-中国血液流变学杂志 2014(04)3.孙傲雪,徐凤花,刘洋,郭慧娟,曹艳花,张晓霞 实时荧光定量PCR在固氮酶基因检测中的应用期刊论文-生物技术通报 2011(03)4.兰静,李秋根 实时荧光定量PCR技术理论研究及其在医学方
19、面的应用期刊论文-南昌大学学报(医学版)2011(10)5.李静,王晓平,肖慧霞,王福锐 荧光定量PCR诊断肾结核的临床应用价值期刊论文-宁夏医学杂志 2011(10)6.刘小荣,张笠,王勇平 实时荧光定量PCR技术的理论研究及其医学应用期刊论文-中国组织工程研究与临床康复2010(02)7.陈柳军,秦景新,邹碧,余钧池,蒙晓辉 Real-time PCR技术在食物中毒副溶血性弧菌快速检测中的应用期刊论文-中国热带医学 2010(11)8.高永维 牛羊口蹄疫免疫期补充微量元素对免疫力的影响期刊论文-中国畜牧兽医文摘 2011(02)9.高永维 不同的免疫接种方法接种牛羊口蹄疫双价灭活苗对妊娠畜
20、安全性和免疫效果的影响期刊论文-青海畜牧兽医杂志 2011(02)10.高永维 进行牛羊口蹄疫双价灭活苗免疫前后补充微量元素对其口蹄疫抗体水平及安全性的影响期刊论文-草业与畜牧 2011(09)11.高永维 牛羊口蹄疫双价灭活苗免疫效果试验期刊论文-山东畜牧兽医 2011(04)12.高永维 夏季不同时段免疫接种对牛羊口蹄疫抗体水平及安全性的影响期刊论文-中国草食动物 2011(03)13.汪学荣,彭祥伟 PCR技术检测肉中食源性病原菌的研究进展期刊论文-肉类工业 2010(07)14.李鹏,刘文忠,栗艳 三种获取目的基因的PCR方法期刊论文-乳业科学与技术 2008(04)15.张宇,白豆,
21、朱乃硕 Taqman多重实时荧光定量PCR检测裸鼠肿瘤转移模型中肿瘤转移率方法的建立期刊论文-中国生物工程杂志 2015(04)16.王林 在医学检验中应用实时荧光定量PCR技术的研究进展期刊论文-当代医药论丛 2015(03)17.王大涛,郭倩倩,朱宏伟,刘振,王桂武,李春义 以梅花鹿P21基因为模板比较相对和绝对荧光定量PC R的准确性期刊论文-特产研究 2013(04)18.王伟平 96孔实时荧光定量PCR检测系统的开发学位论文硕士 201119.李小燕,卓超,金光耀,黎晓强,肖书念,钟南山 铜绿假单胞菌oprD2基因突变及表达量改变与碳青霉烯类耐药的关系期刊论文-中华微生物学和免疫学杂
22、志 2010(11)20.李耀华 聚合酶链反应核酸扩增类体外诊断试剂的体系设置要求期刊论文-中华检验医学杂志 2015(10)21.魏春花,曾文炉,周启星,谢秀杰 荧光定量PCR技术在环境领域的应用期刊论文-中国环境监测 2012(04)22.廖景光,李小燕,李敏研,梁艳容,黎敏,吴庆欢 耐亚胺培南铜绿假单胞菌相关耐药基因的检测期刊论文-中国微生态学杂志 2011(05)23.崔玉娟,任淑敏,苏东霞 2010年北京市延庆县首批流感病例样的实验室病原学检测期刊论文-首都医药2011(18)24.钟江华,张光萍,柳小英 实时荧光定量PCR技术的研究进展与应用期刊论文-氨基酸和生物资源 2011(0
23、2)25.王建波,任杰,张映 实时荧光定量PCR在猪肺炎支原体检测中的应用期刊论文-生物技术通报 2009(07)26.徐小刚,刘雅婷 实时荧光定量PCR在植物病害中的应用期刊论文-中国农学通报 2009(07)27.李明珠,麦康森,何艮,艾庆辉,徐玮,张文兵 实时荧光定量PCR检测皱纹盘鲍5脂肪酸去饱和酶基因表达方法的建立及应用期刊论文-水生生物学报 2014(02)28.郑兰兰,金钺,李明凤,郭显坡,陈红英,崔保安,魏战勇 猪细小病毒与猪伪狂犬病毒二重SYBR Green 实时荧光PCR方法的建立与检测期刊论文-中国兽医学报 2014(05)29.吴婷,陈金梅,李莹 实时荧光定量PCR技术
24、研究进展及应用期刊论文-大家健康(下旬版) 2014(02)30.韦南仕,黄强 实时荧光定量聚合酶链反应对不典型肺结核的诊断价值期刊论文-中国保健营养(上旬刊)2013(04)31.林铭,胡鸿,杜永臣,高建昌,王孝宣,国艳梅 番茄黄化曲叶病毒的实时荧光定量PCR检测期刊论文-中国蔬菜2013(02)32.吴昆仑,邓晓青,姚晓华 裸大麦PKABA1基因实时荧光定量PCR方法的建立期刊论文-江苏农业科学 2012(12)33.贾俊涛,崔鹤,马云,曾静,姜英辉,李正义 应用Taqman荧光定量PCR快速检测宠物食品中的沙门氏菌期刊论文-安徽农业科学 2012(30)34.沈言虎,张鹏,丁铁林,杨泉泉
25、,颜秉秉,孙东旭 高效提取肠道菌群总DNA方法的建立期刊论文-安徽农业科学2011(18)35.胡慧,高晓平,孟韩冰,王亚宾,陈丽颖,张红英,辛银川,崔保安 利用荧光定量PCR方法研究猪繁殖与呼吸综合征病毒在Marc-145细胞中的增殖规律期刊论文-中国农学通报 2009(21)36.杜秀然,李幸彬,陈素丽,刘锐,李振生 实时荧光定量聚合酶链反应对结核性胸膜炎的诊断价值期刊论文-河北医药 2008(12)37.余楠,杨菁,徐望明,方健叶,郭悦 中药助孕方对小鼠着床窗期子宫内膜整合素3及血管内皮生长因子表达的影响期刊论文-微循环学杂志 2013(04)38.王永芬,郑鸣,边传周 环介导间接PCR
26、检测方法的建立期刊论文-生物技术通报 2012(08)39.刘素娜,张艳,张晶敏,韩立,江金花,周玉冰,王庆端 FQ-PCR检测小鼠肝癌模型中Cyclin E mRNA方法的建立期刊论文-河南医学研究 2012(02)40.王伟平 实时荧光定量PCR检测系统的研究期刊论文-硅谷 2010(22)41.吴家红,程金芝,陈璐,孙宇 白纹伊蚊-actin基因实时荧光定量RT-PCR方法的建立期刊论文-四川动物2010(05)42.蔡惠芬,史进方,顾国浩 叉头转录因子1质粒标准品的构建期刊论文-中国组织工程研究与临床康复 2009(07)43.李小燕,吴爱武 产AmpC酶铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药机制
27、的研究期刊论文-中国感染与化疗杂志 2008(06)44.谭彩霞,封超年,郭文善,朱新开,李春燕,彭永欣 小麦淀粉合成酶基因实时荧光定量PCR 检测方法的建立及其应用期刊论文-金陵科技学院学报 2014(03)45.梁洪军,李晶,王永山,魏德江,陈琼,周东明,唐雨德 应用荧光定量PCR检测食品中沙门菌期刊论文-东南国防医药 2013(03)46.杨春华,周延,孙思扬,钟毅,王川庆 猪细环病毒PCR-DHPLC检测技术的建立及应用期刊论文-畜牧兽医学报2012(09)47.麻粉莲,郑文芝,魏田力,张骞,崔红,郑丽舒 人多瘤病毒7 TaqMan探针实时定量PCR检测方法的建立期刊论文-生物技术通讯
28、 2015(02)48.商晓桂,郭伟,杨莲茹,杨志彪,华修国,朱建国,崔立 猪星状病毒SYBR Green 实时荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用期刊论文-畜牧兽医学报 2010(08)49.陈亮,孙毅凡,陈涛,李海成,江振友,周琳,钟球 佛波酯诱导THP-1细胞分化条件的优化及自噬模型的建立期刊论文-中国防痨杂志 2013(12)50.郭庆,王忠跃,孔繁芳,武艳霞 实时荧光定量PCR在植物害虫研究中的应用期刊论文-江西植保 2011(02)51.杨春华,胡慧,钟毅,韩志涛,祝建新 检测猪繁殖与呼吸综合征病毒SYBR Green I实时荧光定量PCR方法的建立及初步应用期刊论文-浙江农业学
29、报 2010(06)52.周朋,余乃通,章绍延,胡加谊,刘志昕 应用实时荧光定量PCR研究BBTV DNA1在香蕉不同组织中的含量期刊论文-热带作物学报 2014(7)53.赵子年 基因扫描在ALL中的应用期刊论文-医学信息(下旬刊) 2013(15)54.何宣,王白羽,张晓磊,任丽彤,孔广超 盐胁迫下小黑麦碳酸酐酶基因表达及其酶活性分析期刊论文-新疆农业科学 2012(07)55.魏锁成,何丽 犬轮状病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立期刊论文-中国动物检疫 2009(05)56.杨春华,祝建新,钟毅,孙思扬,沈艳,陈庆富,王川庆 猪繁殖与呼吸综合征病毒PCR-DHPLC检测新技术的建立及
30、应用期刊论文-中国兽医学报 2012(02)57.杨林,武延格,孙学峰,王正,Stephan Korom,纪玲 同种异体大鼠移植肺中转录因子T-bet和GATA结合蛋白3的定量表达期刊论文-中国组织工程研究与临床康复 2008(40)58.倪娜,张智勇,李国瑞,夏春丽,李华,郭闯 实时荧光定量PCR技术在转基因食品检测中的应用研究进展期刊论文-内蒙古民族大学学报(自然科学版) 2013(01)59.吴永彬,肖维威,马文丽 实时荧光定量PCR技术在转基因食品检测领域中的应用期刊论文-生物技术通讯2011(04)60.胡薇,孟星宇,田玉华,刘宁 梅花鹿IGF1全长cDNA克隆及在鹿茸组织的表达期刊
31、论文-东北林业大学学报2011(11)61.张婷,卫正国,高瑞娜,王瑞娴,赵国栋,李兵,沈卫德 芸香苷诱导家蚕谷胱甘肽-S-转移酶omega家族基因的表达变化期刊论文-蚕业科学 2011(02)62.胡薇,孟星宇,田玉华,刘宁 鹿茸顶端组织IGF1R基因的部分cDNA克隆及差异表达期刊论文-东北林业大学学报2011(09)63.刘妍 实时定量RT-PCR检测急性早幼粒细胞白血病PML-RAR融合基因及临床分析学位论文硕士 201064.余源,陈阳,葛爽,王洋,李巍伟,赵丽娜,刘阿倩,林志强,高雪,田喜凤 双氢青蒿素对 C2株蓝氏贾第鞭毛虫Alpha-7.3 giardin 基因 mRNA 表达
32、水平的影响期刊论文-中国人兽共患病学报 2014(07)65.张廷婷,李春娟,闫彩霞,孙兵,郑奕雄,单世华 荧光量PCR技术检测花生种皮抗黄曲霉基因表达强度期刊论文-山东农业科学 2012(05)66.李丽婷,许文涛,郭星,姚业成,黄昆仑 提取鼠肠道内微生物基因组DNA的方法研究期刊论文-中国粮油学报2010(01)67.王媛媛 非酒精性脂肪肝和药物对小鼠CYP2A5表达的影响学位论文硕士 201068.周雪美,原慧萍,吴东来,王雅,王卓 pLXSN-BDNF体外转染神经干细胞及其外源基因的表达期刊论文-中华微生物学和免疫学杂志 2009(09)69.刘妍,严智昌 急性早幼粒细胞白血病微小残留
33、病检测方法的研究进展期刊论文-亚太传统医药 2009(09)70.赵琳,顾国浩,史进方,蒋敏,陈永井,张光波 Taqman探针定量检测ICOS/ICOSL基因表达的方法期刊论文-中国组织工程研究与临床康复 2010(31)71.赵冬梅,杨志辉,徐进,朱杰华,朱丽丹 致病疫霉NLP家族基因PITG_10839的克隆和功能分析期刊论文-中国农业科学 2014(05)72.郑本川,张锦芳,李浩杰,柴靓,崔成,蒋俊,蒲晓斌,牛应泽,蒋梁材 甘蓝型油菜开花调控转录因子CONSTANS的表达分析期刊论文-中国农业科学 2013(12)73.赵琳 共刺激分子mRNA表达水平与衰老及肿瘤关系的研究学位论文硕士
34、 201074.史俊 环境微生物的荧光原位杂交技术检测方法的研究聚磷菌等杂交方法研究学位论文硕士 200975.刘阿倩,王洋,林志强,张亚粉,田喜凤,余源 双氢青蒿素对C2株蓝氏贾第鞭毛虫Delta giardin抑制作用的研究期刊论文-中国人兽共患病学报 2015(06)76.谢润欣,张崇淼,王晓昌,孙婷婷,李宪 城市污水中病原性大肠埃希氏菌毒力基因eaeA和rfbE的实时荧光定量PCR检测期刊论文-环境科学研究 2012(08)77.郑文芝 人多瘤病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及临床研究学位论文硕士 201278.江磊 常用烤瓷合金对细胞凋亡信号分子基因表达与蛋白表达的影响学位论文硕
35、士 201379.任晓宾 基于血浆游离DNA浓度和完整性的肺癌非侵入性诊断价值研究学位论文硕士 201080.曹喻 耐酸调控双组分系统调节基因的初步筛选学位论文硕士 201381.李小燕 耐亚胺培南铜绿假单胞菌的分子耐药机制研究学位论文硕士 200982.高琼 聚合酶链式反应(PCR)技术在环境监测中的应用期刊论文-安徽农业科学 2014(36)83.陈丽丽 玉米基因组DNA提取测定及转植酸酶基因检测方法的研究学位论文硕士 201184.任太军 印楝素对黑腹果蝇细胞凋亡基因的调控作用学位论文硕士 200985.赵亚娥,De Rojas Manuel 蠕形螨的系统学研究进展期刊论文-国际医学寄生
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37、栋 基因差异转录表达验证方法研究进展期刊论文-中国生物工程杂志 2015(05)93.黄铭珂 TritonX-100促进脂质体介导基因转染大鼠骨髓间充质干细胞及毒性的实验研究学位论文硕士 201394.李小琴 太湖水华优势藻的环境特性及藻-菌作用机制学位论文硕士 201095.刘洋 多重耐药铜绿假单胞菌的耐药危险因素调查及相关耐药机制研究学位论文硕士 201196.李金 茶树咖啡碱与可可碱含量、关键酶基因表达量及cSNP相关性分析学位论文硕士 201397.侯冬梅 嗜酸氧化亚铁硫杆菌中四个ABCtransporter基因的鉴定与分析学位论文硕士 201198.徐宇强 干旱胁迫下玉米自交系叶片木
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