PI染色

1、磷脂酰丝氨酸外翻分析（Annexin V 法）磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine, PS）正常位于细胞膜内侧，但在细胞凋亡早期，PS可从细胞膜内侧翻转到细胞膜表面，暴露在细胞外环境中。磷脂酰丝氨酸的转位发生在凋亡早期阶段，先于细胞核的改变、DNA 断裂、细胞膜起泡。体内的吞噬细胞可通过识别磷脂酰丝氨酸来清除凋亡细胞。Annexin-V（green）是一种分子量为 3536KD 的 Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与 PS 高亲和力特异性结合，细胞处于调亡或坏死时， Annexin-V 可为阳性（早期坏死细胞可能为阴性） ，是检测细胞早期凋亡的灵敏指标。将 Annexi。

2、protocol：PI 染色检测细胞周期1、收集细胞：胰酶（含 EDTA）消化收集对数生长期细胞（加热处理后损失多的组宜多收集细胞保证细胞有 0.5-210*6 个），吸取旧培养基到一个新离心管里；少量常温 PBS（根据培养皿大小决定量，PBS 洗可以保证消化效率）洗 2 次，清洗的 PBS 也要收集到上述离心管内【检测凋亡才需收集旧培养基及清洗的 PBS】；然后胰酶消化（注意一定要消化完全，显微镜下观察细胞呈单个，而不是成片脱落）后利用旧培养基中和胰酶；离心(1000r/300g 5min)收集细胞沉淀。2、用预冷的 PBS 清洗细胞两次。3、固定细胞：用 0.5ml 。

3、2008/11/09 09:55PI、Hoechst33342 均可与细胞核 DNA（或 RNA）结合。但是 PI 不能通过正常的细胞膜，Hoechst 则为膜通透性的荧光染料，故细胞在处于坏死或晚期调亡时细胞膜被破坏，这时可为 PI 着红色。正常细胞和中早期调亡细胞均可被 Hoechst 着色，但是正常细胞核的 Hoechst 着色的形态呈圆形，淡兰色，内有较深的兰色颗粒；而调亡细胞的核由于浓集而呈亮兰色，或核呈分叶，碎片状，边集。故 PI 着色为坏死细胞；亮兰色，或核呈分叶状，边集的 Hoechst 着色的为调亡细胞。电子天平准确称取 1mg 碘化丙啶（ propidium iodide，PI）溶于。

4、PI 单染色法流 式 细 胞 仪 检 测 细 胞 凋 亡 PI 单 染 色 法 基 本 原 理 其 原 理 主 要 是 根 据 细 胞 凋 亡 时 在 细 胞 、 亚 细 胞 和 分 子 水 平 上 所 发 生 的 特征 性 改 变 。 这 些 改 变 包 括 细 胞 核 的 改 变 、 细 胞 器 的 改 变 、 细 胞 膜 成 分 的 改 变和 细 胞 形 态 的 改 变 等 ， 其 中 细 胞 核 的 改 变 最 具 特 征 性 ， 主 要 包 括 以 下 几 个 方面 ： 1. 细 胞 核 的 改 变 ： 由 于 凋 亡 细 胞 核 的 改 变 ， 造 成 各 种 染 色 体 荧 光 染 料 对凋 亡 细 胞 DNA 可 染 性 发 生 改 变 。 研 。

5、PI 染色荧光染料 PI（碘化丙啶）是一种可对 DNA 染色的细胞核染色试剂，常用于细胞凋亡检测，英文全称是 Propidium Iodide。它是一种溴化乙啶的类似物，在嵌入双链 DNA 后释放红色荧光。尽管 PI 不能通过活细胞膜，但却能穿过破损的细胞膜而对核染色。PI 经常被用来与 Calcein-AM 或者 FDA 等荧光探针一起使用，能同时对活细胞和死细胞染色。PI-DNA 复合物的激发和发射波长分别为535 nm和615 nm。PI 可以用来进行活细胞、死细胞的双重染色 钙黄绿素-AM(Calcein-AM)和碘化丙啶(PI)溶液，它们分别可对活细胞和死细胞染色。Calcein -AM 的乙。