菌种的复壮与保藏

1、菌种保藏冷冻干燥管的制备,河北科技大学生物科学与工程学院 河北省发酵工程技术研究中心 徐亲民,2,水分在冰冻状态下直接升华而干燥 冷冻干燥的三要素： 真空降低水的蒸汽压以加速水分的蒸发 冷冻使水蒸气冷凝以减轻真空泵负荷,加速干燥 温度达到进一步加速干燥的目的 冷冻干燥的优点： 对微生物的生物活性影响小 所得干粉疏松，溶解性好 水分含量低 由于同时满足干燥和真空两个菌保要素,因而保存时间长,保存过程不易失活和退化,冷冻干燥原理,3,取质地均匀、厚实(壁厚1 mm)、无毛点、无气泡的硬质玻璃专用菌种冷冻管（图1），清洗干净后在。

2、1,第 六 章 发酵工业生产菌种的制备,2,本章内容,第三节 菌种保藏与复壮,第一节 孢子制备过程与质量控制,第二节 种子制备过程与质量控制,3,发酵工程最重要的就是菌种，发酵水平的高低与菌种的性能、质量、数量有直接关系。 目前工业规模的发酵罐容积已达到几百立方米甚至上千立方米，如按510%接种量计算，就要投入几十立方米或几百立方米的种子，种子液还要有一定的菌浓和其它质量要求。 要从保藏在试管中的微生物菌种逐级扩大为生产用种子是一个由实验室制备到车间生产的过程。,4,这就是菌种扩大培养(简称菌种培养)： 是指将保存在砂土管。

3、1,第 六 章 发酵工业生产菌种的制备,2,本章内容,第三节 菌种保藏与复壮,第一节 孢子制备过程与质量控制,第二节 种子制备过程与质量控制,3,发酵工程最重要的就是菌种，发酵水平的高低与菌种的性能、质量、数量有直接关系。 目前工业规模的发酵罐容积已达到几百立方米甚至上千立方米，如按510%接种量计算，就要投入几十立方米或几百立方米的种子，种子液还要有一定的菌浓和其它质量要求。 要从保藏在试管中的微生物菌种逐级扩大为生产用种子是一个由实验室制备到车间生产的过程。,4,这就是菌种扩大培养(简称菌种培养)： 是指将保存在砂土管。

4、04 菌种保藏的原理和方法,04 菌种保藏的原理和方法,一、菌种保藏的目的,保存、不退化,二、菌种保藏的原理,DNA复制时自发突变是造成菌种退化的原因，因此要创造代谢不活泼的状态 。,休眠态（孢子、芽孢） 代谢不活泼的状态 环境（干燥、低温、缺氧、缺营养）,斜面保藏法和穿刺保藏法 沙土管干燥保藏法 真空冷冻干燥保藏法 液氮保藏法 悬液保藏法 低温保藏法,三、菌种保藏的方法,一种良好的菌种保藏方法，首先应保持原菌优良性状长期稳定，同时还应该考虑方法的通用性、操作的简便性和设备的普及性。具体的方法很多，现把多种方法按类排列后。

5、第一节 工业生产常用的微生物一、工业生产常用的微生物* 从自然界中分离出来就能被利用； 对野生菌株进行人工诱变，得到突变株才能被利用。 使用重组DNA技术改造的菌株目前育种总趋势从野生菌转向变异菌自然选育转向代谢育种从诱发基因突变转向基因重组的定向育种。,第二章 生物工业菌种与种子的扩大培养,由于发酵工程本身的发展以及遗传工程的介入，藻类（alga）、病毒（virus）等也正在逐步地变为工业生产用的生物。尽管如此，目前人们对微生物的认识还是十分不够的。已经初步研究的不超过自然界微生物总量的10%左右。微生物的代谢产物。

6、微生物菌种保藏的原理与方法,菌种保藏基本原则,保藏菌种时首先要选择它们的休眠体，如分生孢子、芽孢等，并创造一个低温、干燥、缺氧、避光和缺少营养的环境条件，以利于休眠体能较长时间维持其休眠状态。 对于不产孢子的微生物，也要使其新陈代谢处于最低水平，又不会死亡，从而达到长期保藏的目的。,常用菌种保藏方法,1 常用的简易保藏法： 斜面传代保藏法、半固体穿刺保藏法（适用于细菌和酵母菌）、石蜡油封法 2 甘油保藏法 3 干燥保藏法 4 真空冷冻干燥保藏法 5 液氮超低温保藏法,1 简易保藏法,基本原理：利用低温来抑制微生物生命活。

7、1,微生物菌种鉴定与保藏,柳志强,浙江工业大学生物工程研究所,20087,microliugmail.com 13486118463,2,内容 菌种筛选 菌种鉴定 菌种保藏,3,微生物代谢产物的平板检测方法,4,5,6,7,影印法,8,显微镜第一代 第二代 第三代,9,细菌的形态和结构观察,在显微镜下观察细菌个体的形态,细菌形态受培养时间、培养基成分、浓度、培养温度、培养时间等发生变化。,10,细菌菌落大多表面光滑湿润，有光泽，一般菌落较小，质地颜色均匀，同培养基结合不紧密。菌落特征与组成菌落的细胞结构、生长状况、排列方式、好气性和运动性直接相关。,11,细菌个体微小，。

8、,菌种的保藏和管理杜平华,菌种保藏的重要性,菌种保藏是微生物检验工作中的一项常规技术科学保藏和管理关系到检验结果的正确性.,菌种的2015版指导原则,原则： 应来自认可的国内或国外菌种保藏机构的标准菌株，或使用与标准菌株所有相关特性等效的商业派生菌株。,使用菌种来源,菌种编号 2015版CMCC 中国医学菌种保藏中心CMCC（F）真菌 CMCC（B）细菌协调案ATCC 美国标准菌种收藏中心NCIMB 英国食品工业与海洋菌种保藏中心NBRC 日本技术评价研究所生物资源中心CIP 法国巴斯德研究所菌种保藏中心,菌种保藏的中心任务,- 广泛收集。- 选择最适宜。

9、第八章 菌种的保藏,第一节 菌种的衰退和复壮一、菌种的衰退二、菌种的复壮第二节 菌种的保藏一、菌种保藏的目的二、菌种保藏的原理三、菌种保藏的方法,性状稳定的菌种是微生物工作最重要的基本要求，否则生产或科研都无法正常进行。,影响微生物菌种稳定性的因素：a）变异；b）污染；c）死亡,第一节 菌种的衰退和复壮,在微生物的基础研究和应用研究中，选育一株理想的菌株是一件艰苦的工作，而欲使菌种始终保持优良性状的遗传稳定性，便于长期使用，还需要做很多日常的工作。实际上，由于各种各样的原因，要使菌种永远不变是不可能的，菌种。

10、,菌种的传代与保藏,菌种是从事微生物学及生命科学研究的基本材料，在医学领域中，诊断制品的制备，菌苗的生产、微生物致病性研究，药物的抑菌试验及药品微生物检验等都有一套完整的菌种.微生物具有生命活力，在传代过程中易发生变异甚至死亡，因此菌种保藏是一项重要的基础工作，是微生物学基础工作的一项重要内容，也是药品微生物工作中的一项常用技术。,一、菌种保藏的意义,如药品中的控制菌检查使用的阳性对照菌须防止因多次传代而使阳性对照菌的典型生物学特征发生变化及菌株的死亡，保证达到菌种长期正确的形态；,如药品微生物学检验。

11、菌种的传代、保藏 及菌液制备,标准菌种的概念及其管理,标准菌种是指由国家授权机构制备的具有稳定的生物学特性并用妥善方法保藏的菌种。 我国的标准菌种统一由中国菌种保藏管理委员会（CCCCM）管理，涉及药品微生物检验的菌种由医学微生物菌种保藏管理中心（CMCC）提供,菌种的名称,铜绿假单胞菌（） 生孢梭菌（） 大肠埃希菌（） 金黄色葡萄球菌（） 沙门菌（） 枯草芽孢杆菌（） 白色念珠菌（） 黑曲霉（）,微生物菌种的使用、保存与管理、验证。,一.制定菌种使用保藏管理程序 （1）做好菌种的来源登记，确保溯源性清楚. （2）菌种的接收。

12、任务1-7 菌种的保藏,一、菌种保藏的目的菌种存活，不丢失，不污染 防止优良性状丧失 随时为生产、科研提供优良菌种,二、菌种保藏的原理：,首先，选用优良的纯种（最好是休眠体，如分生孢子、芽胞等）其次，创造微生物代谢不活波，生长繁殖受抑制，难以发生突变的环境条件（其环境要素是干燥、低温、缺氧、缺营养 以及添加保护剂等） 再次，添加保护剂或酸碱中和剂，避免保藏过程中细胞受伤。,三、菌种保藏的方法,斜面保藏法 穿刺保藏法 沙土管干燥保藏法 真空冷冻保藏法 液氮保藏法 低温保藏法,斜面低温保藏法方法：接种适宜斜面培养基 培。

13、【教育类精品资料】,工业微生物菌种的退化和保藏,菌种退化的原因,基因突变引起菌种退化 连续移代引起菌种退化 环境条件的影响,基因突变引起菌种退化,菌体本身的修复机制 突变发生在DNA单链上,随着复制两股DNA各自形成子细胞.,连续移代引起菌种退化,链霉素生产菌传代退化情况,环境条件的影响,基因的表达在一定环境条件下才能完成. 不同的培养基会影响不同类型细胞的数量.,如何防止菌种退化,尽量少传代 菌种纯化 采用良好的培养基和培养条件,菌种纯化,优良菌种:去处个别低产或不纯细胞. 已衰退菌种:找出其中还存在的高产菌株.,菌种保藏,目的。

14、菌种的提纯与复壮,尤昌建,长期使用某一品种栽培，或对品种保存、管理不当，会造成该品种的退化和老化，因此对菌种必须进行经常的提纯复壮工作。 菌种的退化和老化有两种不同的含意。退化是指某一良种遗传性状发生改变，造成产量下降的现象。一个优良品种在长期栽培过程中，由于环境条件的逆境，病虫害的侵袭，化学药物的杀伤，管理不当，多次的转管造成人为的创伤的增多，影响菌种遗传性状的变异或突变，从而改变了菌种原有的遗传特性，造成退化现象；其次，在实践中往往是几个品种在同一环境下培养，它们之间的自然杂交率也是很高的，品。

15、菌种的保存与复壮,兰州市食品药品检验所周斌2013.05.25,一、菌种保藏,（一）菌种保藏的目的 菌种是国家的重要自然资源，菌种保藏是一项重要的微生物学基础工作。菌种保藏的目的是保证菌种能够保持其原来的生活能力，不发生变异，不被其他杂菌污染，不死亡，以便能够很好地研究和利用微生物。,（二）菌种保藏的原理,微生物菌种保藏技术很多，但原理基本一致。菌种保藏主要是根据微生物是生理、生化特性，创造条件使其代谢处于不活泼的休眠状态，生长繁殖受到抑制，从而降低菌种的变异率。从微生物本身来讲，菌种的保藏首先要选用优良的纯种。

16、微生物菌种及其复壮与保藏,2,2 微生物菌种及其复壮与保藏,现代微生物发酵工程研究的内容,3,2 微生物菌种及其复壮与保藏,微生物菌种及其复壮与保藏,4,2 微生物菌种及其复壮与保藏,工业生产常用的微生物及要求,1. 细菌: 分布最广，数量最多，单细胞原核，二分裂殖.枯草芽孢杆菌- 淀粉酶、蛋白酶嗜热乳杆菌-乳酸醋酸杆菌-醋酸棒状杆菌-氨基酸短杆菌-肌苷酸,工业生产常用的微生物,5,2 微生物菌种及其复壮与保藏,2.酵母菌: 单细胞真核，含糖，偏酸，腐生，出芽繁殖，假丝.啤酒酵母-酿酒、细胞色素C、单细胞蛋 白、 甘油、琥珀酸 假丝酵母-面包。

17、第十一章 工业微生物菌种复壮与保藏,第一节 菌种的退化与复壮 第二节 工业微生物菌种的保藏,退化的自发性：微生物菌种在传代繁殖中受环境条件的影响，多数情况下会出现退化。退化不是突然发生的，而是从量变到质变的逐步演变的过程。 退化的可延缓性：要求菌种永远不退化是不可能的，但积极采取措施，可使菌种优良特性延缓退化。 延缓退化的思路：在了解菌种退化原因后，减少传代，科学保藏，经常纯化分离。 保藏方法通常有两类： 一类保藏时间较短，如琼脂营养斜面等 另一类保藏时间较长，如沙土法等保藏方法的基本原理是抑制菌种的代谢。

18、菌种保藏与复壮,一、菌种保藏 （一）保藏目的及原理 （二）常用保藏法 （三）保藏注意 二、菌种复壮 (一）菌种的衰退 （二）复壮方法 （三）防衰措施,返回本章,学习情景2-4,一、菌种保藏,（一）保藏目的及原理,目的,返回本节,返回本节,（二）常用保藏法,以母种形式保藏,1.斜面低温法 斜面菌种置46冰箱中（36个月）,返回本节,返回本节,2.矿油保藏法,无菌检验 ？,返回本节,返回本节,3.自然基质保藏法,返回本节,返回本节,二、菌种的复壮,（一）菌种的衰退,返回本节,（二）复壮法,1.繁殖交替法,2. 经常改变培养条件 3.转管时只取尖端菌丝,返回。

19、,第二章 菌种的退化、复壮与保藏,第一节 菌种的退化和复壮,一、菌种的退化（一）原因 菌种保藏不妥 菌种生长的条件要求没有得到满足 自身突变和自发突变,（二）菌种退化的表现,生产性状劣化，遗传标记丢失，原有的典型性状变得不典型。 菌落及细胞形态的改变； 生长速度缓慢，产孢子越来越小； 代谢产物生产能力下降； 抗不良环境条件（抗噬菌体，抗低温）能力减弱,总之，退化是发生在群体细胞中的一个从量变到质变的逐步演变过程，由于个别突变细胞表现生长优势，导致在群体中最后数量占优势。,（三）菌种退化的防治,从菌种选育方面考虑1。