菌种保藏

1、真空冷冻干燥保藏菌种,1、安瓿管准备选取规格约直径为8mm，高100mm的中性玻璃安瓿管，先用2%盐酸浸泡810h，再经自来水冲洗多次，用蒸馏水涮洗23次，烘干；在每管内放入打好菌号及日期的标签，字面朝向管壁，管口塞好脱脂棉塞，121下高压灭菌20分钟，备用。2、保护剂的选择和准备选取新鲜牛奶作为保护剂，牛奶要先脱脂，用离心方法去除上层油脂， 115下高压蒸汽灭菌25min，备用。,3、冻干样品的准备 菌种准备及分装菌种要求为生长良好的纯种，菌龄以处于稳定期为好，孢子是新鲜的。每支长好的斜面加23ml保护剂，用接种环将菌苔轻轻刮起(注。

2、203菌种保藏与管理第一节 概述一、菌种的定义菌种是从事微生物学及生命科学研究的基本材料，也是与微生物有关的生产部门的重要生产资料。本文所指的菌种，包括可以培养的有一定科学意义或实用价值的细菌、真菌、病毒、细胞等代表株。二、菌种保藏的意义微生物具有生命活力，其世代时间（generation time）一般很短，在传代过程中易发生变异甚至死亡。因此，菌种保藏是一项重要的基础工作，是进行微生物学研究和微生物育种工作的重要组成部分。它既是保护微生物资源的一种手段，又为持久而有效的利用微生物资源提供了保证，受到世界各国的。

3、菌种保藏技术进展微生物的生长周期短，能用工业生产，但是人为的不断传代伴随而来的缺陷是容易引起遗传变异。因此，从 30 年代开始就有菌种保藏的研究报告，并探索出了很多方法。许多国家都已建立了专门的菌种保藏机构，如美国标准菌种收藏所（ATCC） 、英国的国立标准菌种收藏所（NCTC） 、*大阪发酵研究所（ LFO） ，还有全球性的世界微生物保存联盟（WFCC） 。这些机构都出售和交换菌种并出版菌种目录。全世界的菌种保藏机构在 300 个以上。我国在 1979 年成立了中国微生物菌种保藏委员会（CCCCM） ，制订了组织和管理条件并设立 6 个。

4、,菌种的保藏和管理杜平华,菌种保藏的重要性,菌种保藏是微生物检验工作中的一项常规技术科学保藏和管理关系到检验结果的正确性.,菌种的2015版指导原则,原则： 应来自认可的国内或国外菌种保藏机构的标准菌株，或使用与标准菌株所有相关特性等效的商业派生菌株。,使用菌种来源,菌种编号 2015版CMCC 中国医学菌种保藏中心CMCC（F）真菌 CMCC（B）细菌协调案ATCC 美国标准菌种收藏中心NCIMB 英国食品工业与海洋菌种保藏中心NBRC 日本技术评价研究所生物资源中心CIP 法国巴斯德研究所菌种保藏中心,菌种保藏的中心任务,- 广泛收集。- 选择最适宜。

5、第八章 菌种的保藏,第一节 菌种的衰退和复壮一、菌种的衰退二、菌种的复壮第二节 菌种的保藏一、菌种保藏的目的二、菌种保藏的原理三、菌种保藏的方法,性状稳定的菌种是微生物工作最重要的基本要求，否则生产或科研都无法正常进行。,影响微生物菌种稳定性的因素：a）变异；b）污染；c）死亡,第一节 菌种的衰退和复壮,在微生物的基础研究和应用研究中，选育一株理想的菌株是一件艰苦的工作，而欲使菌种始终保持优良性状的遗传稳定性，便于长期使用，还需要做很多日常的工作。实际上，由于各种各样的原因，要使菌种永远不变是不可能的，菌种。

6、,菌种的传代与保藏,菌种是从事微生物学及生命科学研究的基本材料，在医学领域中，诊断制品的制备，菌苗的生产、微生物致病性研究，药物的抑菌试验及药品微生物检验等都有一套完整的菌种.微生物具有生命活力，在传代过程中易发生变异甚至死亡，因此菌种保藏是一项重要的基础工作，是微生物学基础工作的一项重要内容，也是药品微生物工作中的一项常用技术。,一、菌种保藏的意义,如药品中的控制菌检查使用的阳性对照菌须防止因多次传代而使阳性对照菌的典型生物学特征发生变化及菌株的死亡，保证达到菌种长期正确的形态；,如药品微生物学检验。

7、,第二章 菌种的退化、复壮与保藏,第一节 菌种的退化和复壮,一、菌种的退化（一）原因 菌种保藏不妥 菌种生长的条件要求没有得到满足 自身突变和自发突变,（二）菌种退化的表现,生产性状劣化，遗传标记丢失，原有的典型性状变得不典型。 菌落及细胞形态的改变； 生长速度缓慢，产孢子越来越小； 代谢产物生产能力下降； 抗不良环境条件（抗噬菌体，抗低温）能力减弱,总之，退化是发生在群体细胞中的一个从量变到质变的逐步演变过程，由于个别突变细胞表现生长优势，导致在群体中最后数量占优势。,（三）菌种退化的防治,从菌种选育方面考虑1。

8、美国典型微生物菌种保藏中心, American Type Culture Collection(ATCC)网址：www.atcc.orgATCC 主要从事农业、遗传学、应用微生物、免疫学、细胞生物学、工业微生物学、菌种保藏方法、医学微生物学、分子生物学、植物病理学、普通微生物学、分类学、食品科学等的研究。 该中心保藏有藻类111株，细菌和抗生素 16865株，细胞和杂合细胞 4300株，丝状真菌和酵母 46000株，植物组织 79株，种子 600株，原生动物 1800株，动物病毒、衣原体和病原体 2189株，植物病毒 1563种。另外，该中心还提供菌种的分离、鉴定及保藏服务。该中心保藏的菌种可。

9、菌种保藏方法中国工业微生物菌种保藏管理中心微生物菌种保藏对于微生物菌种的研究和利用至关重要。以下是中国工业微生物菌种保藏管理中心整理的目前国际国内常用的菌种保藏方法，包括：定期移植法、液体石蜡法、沙土管法、真空冷冻干燥法、80 冰箱冻结法、液氮超低温冻结法，各种菌种保藏方法都有详细的步骤说明。定期移植法亦称传代培养保藏法，包括斜面培养、穿刺培养、液体培养等。是指将菌种接种于适宜的培养基中，最适条件下培养，待生长充分后，于 4 6进行保存并间隔一定时间进行移植培养的菌种保藏方法。操作步骤如下：1 培养基制。

10、菌种的传代、保藏 及菌液制备,标准菌种的概念及其管理,标准菌种是指由国家授权机构制备的具有稳定的生物学特性并用妥善方法保藏的菌种。 我国的标准菌种统一由中国菌种保藏管理委员会（CCCCM）管理，涉及药品微生物检验的菌种由医学微生物菌种保藏管理中心（CMCC）提供,菌种的名称,铜绿假单胞菌（） 生孢梭菌（） 大肠埃希菌（） 金黄色葡萄球菌（） 沙门菌（） 枯草芽孢杆菌（） 白色念珠菌（） 黑曲霉（）,微生物菌种的使用、保存与管理、验证。,一.制定菌种使用保藏管理程序 （1）做好菌种的来源登记，确保溯源性清楚. （2）菌种的接收。

11、菌种保藏和使用技术,马鞍山丰原制药有限公司胡益宏,药品无菌及微生物检验常用标准菌株菌种的采购菌种的复苏菌种的传代菌种的保藏及应用菌种的使用和销毁,药品微生物检验常用标准菌株枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis CMCC（B）63 501金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus CMCC（B）26 003生孢梭菌 Clostridium sporogenes CMCC（B）64 941铜绿假单胞菌 Pseudomonas aeruginosa CMCC（B）10 104大肠埃希菌 Escherichia coli CMCC（B）44 102白色念珠菌 Candida albicans CMCC（F）98 001黑曲霉 Aspergillus niger CMCC（F）98 003,菌种编号。

12、【教育类精品资料】,工业微生物菌种的退化和保藏,菌种退化的原因,基因突变引起菌种退化 连续移代引起菌种退化 环境条件的影响,基因突变引起菌种退化,菌体本身的修复机制 突变发生在DNA单链上,随着复制两股DNA各自形成子细胞.,连续移代引起菌种退化,链霉素生产菌传代退化情况,环境条件的影响,基因的表达在一定环境条件下才能完成. 不同的培养基会影响不同类型细胞的数量.,如何防止菌种退化,尽量少传代 菌种纯化 采用良好的培养基和培养条件,菌种纯化,优良菌种:去处个别低产或不纯细胞. 已衰退菌种:找出其中还存在的高产菌株.,菌种保藏,目的。

13、菌种保藏与复壮,一、菌种保藏 （一）保藏目的及原理 （二）常用保藏法 （三）保藏注意 二、菌种复壮 (一）菌种的衰退 （二）复壮方法 （三）防衰措施,返回本章,学习情景2-4,一、菌种保藏,（一）保藏目的及原理,目的,返回本节,返回本节,（二）常用保藏法,以母种形式保藏,1.斜面低温法 斜面菌种置46冰箱中（36个月）,返回本节,返回本节,2.矿油保藏法,无菌检验 ？,返回本节,返回本节,3.自然基质保藏法,返回本节,返回本节,二、菌种的复壮,（一）菌种的衰退,返回本节,（二）复壮法,1.繁殖交替法,2. 经常改变培养条件 3.转管时只取尖端菌丝,返回。

14、任务1-7 菌种的保藏,一、菌种保藏的目的菌种存活，不丢失，不污染 防止优良性状丧失 随时为生产、科研提供优良菌种,二、菌种保藏的原理：,首先，选用优良的纯种（最好是休眠体，如分生孢子、芽胞等）其次，创造微生物代谢不活波，生长繁殖受抑制，难以发生突变的环境条件（其环境要素是干燥、低温、缺氧、缺营养 以及添加保护剂等） 再次，添加保护剂或酸碱中和剂，避免保藏过程中细胞受伤。,三、菌种保藏的方法,斜面保藏法 穿刺保藏法 沙土管干燥保藏法 真空冷冻保藏法 液氮保藏法 低温保藏法,斜面低温保藏法方法：接种适宜斜面培养基 培。

15、菌种的传代与保藏 内蒙自治区药品检验所,菌种是从事微生物学及生命科学研究的基本材料，在医学领域中，诊断制品的制备，菌苗的生产、微生物致病性研究，药物的抑菌试验及药品微生物检验等都有一套完整的菌种.微生物具有生命活力，在传代过程中易发生变异甚至死亡，因此菌种保藏是一项重要的基础工作，是微生物学基础工作的一项重要内容，也是药品微生物工作中的一项常用技术。,一、菌种保藏的意义,如药品中的控制菌检查使用的阳性对照菌须防止因多次传代而使阳性对照菌的典型生物学特征发生变化及菌株的死亡，保证达到菌种长期正确的形态。

16、菌种保藏与复壮,一、菌种保藏 （一）保藏目的及原理 （二）常用保藏法 （三）保藏注意 二、菌种复壮 (一）菌种的衰退 （二）复壮方法 （三）防衰措施,返回本章,学习情景2-4,一、菌种保藏,（一）保藏目的及原理,目的,返回本节,返回本节,（二）常用保藏法,以母种形式保藏,1.斜面低温法 斜面菌种置46冰箱中（36个月）,返回本节,返回本节,2.矿油保藏法,无菌检验 ？,返回本节,返回本节,3.自然基质保藏法,返回本节,返回本节,二、菌种的复壮,（一）菌种的衰退,返回本节,（二）复壮法,1.繁殖交替法,2. 经常改变培养条件 3.转管时只取尖端菌丝,返回。

17、微生物实验菌种保藏方案一、石蜡油低温保藏法 本方法的原理是在长好的斜面菌上覆盖灭菌的液体石蜡，达到菌体与空气隔绝，使菌处于生长和代谢停止状态，同时石蜡油还防止水分蒸发，在低温下达到较长期的保藏菌种的目的。保藏温度要求在-44下。液体石蜡法适用于不产孢子的菌种。具体操作是：菌种为斜面培养菌种，斜面不宜过长；选择纯净优质石蜡油，置三角烧瓶中经过 121高压蒸汽灭菌 12h，将其放烘箱中(160左右)干热处理，去除灭菌时渗入的水分，待石蜡油变得清澈透明后冷却即可加入斜面，斜面上不能出现气泡，液蜡添加量以高出斜面顶部约1。

18、第二章 菌种的保藏与复壮,菌种衰退的基本原因是变异，变异是不可避免的，而减缓变异速度则是可能的。变异速度与菌种所处的环境有密切的关系，不良环境条件能促进变异，频繁或过多传代也是造成衰退变异的重要原因。为菌种创造良好条件，减缓菌种衰退，这就是菌种保藏与复壮工作。,第二章 菌种的保藏与复壮,一、菌种保藏 二、菌种的提纯与复壮,一、菌种保藏,工业微生物菌种保藏与其他目的的菌种保藏要求有所不同。工业微生物菌种保藏，是要使菌种生产能力和与生产工艺相适应的优良性状保持稳定，当然做不到绝对不变，只是力求把这种衰退现象。

19、菌种保藏,一、菌种保藏目的,保证菌种生命的延续 保持遗传性状稳定/保持活力的稳定 保证纯种 方便研究、使用、交换,不死亡,不变异,不污染,二、菌种保藏原理,根据微生物生命活动必需的各种条件（营养、环境）采取相应的措施，使其新陈代谢减缓或停止，生长繁殖受到抑制而处于（半）休眠状态。 措施： 缺乏营养 干燥 低温 缺氧 避光,三、菌种保藏方法,各种微生物由于遗传特性不同，因此适合采用的保藏方法也不一样。一种良好有效的保藏方法，首先应能保持原菌种的优良性状长期不变，同时还须考虑方法的通用性、操作的简便性和设备的普及性。,。