基因扩增技术

1、 临床基因扩增检验实验室技术验收报告一、 、临床基因扩增检验实验室基本情况（一）实验室所属法人单位名称： 地址： 邮编： 法定代表人： 实验室负责人： 联系人： email： 电话： 传真： （二）接受现场技术验收的实验室代表姓名及职务：二、验收依据：卫生部下发文临床基因扩增检验实验室管理暂行办法和临床基因扩增检验实验室工作规范三、验收时间： 年 月 日 四、验收评审地点： 五、技术验收结论：合格，建议授予验收合格证书；商存在 项一般缺陷。 基本合格，尚存在某些缺陷，缺陷为 项，限期改进，改进后授予验收合格证书； 不合。

2、临床基因扩增检验实验室技术验收申请表初次验收 换证验收一、基因扩增检验实验室基本情况（一）实验室所属法人单位名称： 地址： 邮编： 法定代表人： 实验室负责人： 联系人： Email： 电 话： 传真： （二）实验室总人数： 名 （其中初级职称人员 名，占 %；中级职称人员 名，占 %；副高级职称人员 名，占 %；高级职称人员 名，占 %；）其中已获培训上岗证人员 名。（三） （换证验收需填写此项）上次验收时间： 年 月 日 上次验收合格证书编号： 原证书有效期至： 年 月 日 二、提供资料状况 （一） 医疗机构执业许可证复印件；（二）。

3、一、标准名称：基因扩增实验室的设置及技术要求二、提出单位：上海市畜牧业标准化技术委员会三、起草单位：上海市动物疫病预防控制中心四、立项理由：随着近年来动物疫病流行的复杂性，传统的血清学等方法已不能完全满足动物疫病预测预警的需要。而基因扩增检测技术，诸如聚合酶链反应（PCR）检测技术，以具有特异性强,敏感性高的特点，并且可以掌握其病毒变异规律、分析评估传播方式和规律等优势，已在动物疫病检测中逐步得到广泛的应用。尤其是，近年来国家对省、市级兽医实验室具备开展病原学检测能力提出了明确要求，因此，基因扩增实。

4、1临床基因扩增检验实验室技术审核申请表一、基因扩增验实验室基本情况（一）实验室所属法人单位名称： 地址： 邮编： 法定代表人： 实验室负责人： 联系人： E-mail： 电 话： 传 真： （二）实验室人数： 名（其中初级职称人员 名，占 %；中级职称人员 名，占 %；副高级职称人员 名，占 %；高级职称人员 名，占 %）二、提供资料状况（一） 医疗机构执业许可证复印件；（二）拟设置基因扩增检验实验室医院的医疗卫生资源状况、对临床基因扩增检验的需求情况以及实验室运行的预测分析：（三）拟设基因扩增检验实验室的设置平面图；（四）实。

5、实验四、五：目的基因的PCR扩增、 PCR产物的琼脂糖凝胶检测与 聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,一、实验目的,1. 教学目的：PCR反应、产物检测的基本原理与实验技术 2.能力目标：具有PCR扩增体系设计、参数设置基本能力，掌握扩增产物检测方法,二、实验原理,1.PCR(聚合酶链式反应（polymerase chain reaction)原理:体外快速扩增特定基因或DNA序列,PCR动画,聚丙烯酰胺凝胶有效分离笵围取决于用于灌胶的聚丙烯酰胺的浓度和交联度。在没有交联剂的情况下聚合的丙烯酰胺形成毫无价值的粘稠溶液，而经双丙烯酰胺交联后凝胶的刚性和抗张强度都有所增加，。

6、卫生部临床检验中心 李金明,定 义,质量保证(Quality Assurance,QA) 为一产品或服务满足特定质量要求提供充分可信性所必要的有计划的和系统的措施。 室内质量控制（Internal Quality Control,IQC) 由实验室工作人员，采取一定的方法和步骤，连续评价本实验室工作的可靠性程度，旨在监测和控制本实验室工作的精密度，提高本室常规工作中批内、批间样本检验的一致性，以确定测定结果是否可靠、可否发出报告的一项工作。,定 义,室间质量评价 （External Quality Assessment, EQA） 为客观比较一实验室的测定结果与靶值的差异，由外单位机构，。

7、临床基因扩增实验室验收中技术人员的工作内容,孙余婕,验收内容： 现场考察 现场实验,试剂贮存和准备区,1.该区的功能：试剂及耗材的贮存，试剂的准备 2.主要的仪器： -20冰箱，加样枪一套，离心机，移动紫外消毒灯 3.主要文件：该区相关SOP文件 4主要表格：空白的实验流程表（环境温，湿度记录），试剂及耗材的质检记录表，冰箱温度记录表，紫外消毒记录表，耗材的高温消毒记录表,5.主要工作： 试剂质检 耗材质检 试剂存放 表格记录,6.重点关注： 试剂贮存 试剂性能质检内容：空白，阴性，高中低浓度，临界阳性，定量标准品，试剂的批间比。

8、临床基因扩增检验实验室技术验收临床基因扩增检验实验室主要应用把 PCR（聚合酶链反应）技术应用于疾病的诊断与治疗监测。PCR 技术发明是生物医学领域的一项革命性创举，具有深远历史意义，但在上世纪九十年代中国，在我国由于部分医部机构受利益的驱动，在缺乏技术、设备以及规范化管理的情况下，PCR 技术临床应用泛滥，出现大量假阳性和假阴性结果，甚至出现虚假检测报告，造成检验结果和临床意义应用十分混乱，严重扰乱正常医疗秩序，特别在性病基因检测方面，甚至还带来一系列道德伦理、家庭纠纷以及社会和法律问题。PCR 技术临床应用。

9、1附件 1：山东省临床基因扩增检验实验室技术审核申请书申 报 单 位 （ 盖 章 ） ： 申 报 日 期： 希 望 审 核 时 间 ： 山东省卫生厅印制二一一年三月十一日2山东省临床基因扩增检验实验室技术审核申报材料目录1.医疗机构设置临床基因扩增检验实验室正式申请；2.医疗机构执业许可证复印件；3.拟设基因扩增检验实验室的设置平面图；4.拟设置基因扩增检验实验室医院的医疗卫生资源状况、对临床基因扩增检验实验室的需求情况以及实验室运行的预测分析；5.检验报告样单（2 份）；6.实验室技术审核相关表格；7.实验室相关程序文件和标准操作程。

10、PCR扩增技术,李琛琛2012330300611月13日,一、PCR定义 二、PCR原理 三、PCR反应体系 四、PCR扩增条件 五、PCR结果,一、PCR的定义,PCR(Polymerase Chain Reaction),聚合酶链式反应,是一种在体外快速扩增特定基因或DNA序列的方法。,PCR是又称为基因的体外扩增法。,PCR是基因扩增技术的一次重大革新，它可将极微量的 靶DNA特异地扩增上百万倍。,二、PCR的原理,PCR(Polymerase Chain Reaction),变性：在加热或碱性条件下可使DNA双螺旋的氢键断裂，形成单链DNA。,三、反应体系,在0.5ml PCR管内配置25ul反应体系：,基因扩增仪,四、扩增条件,(1) 9。

11、临床基因扩增实验室的审核、监督评审及复审,四川省临床检验中心杜 琼2011、03、10,PCR实验室？,首先：经济利益驱使PCR实验室泛滥严重，扰乱正常医疗秩序，引起一系列社会问题。 其次：PCR技术内在要求 污染-假阳性 处理-假阴性,依 据,新的 医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法（卫办医政发2010194号） 附件医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则,审核对医疗机构的要求,二级以上医疗机构，或具备二级医疗机构要求的民营医院。 具备出具检验报告的机构或独立实验室。 采、供血机构实验室。 法律或主管部门要求的其他实验室。,同一医疗。

12、基因工程实验课,新乡医学院生命科学实验示范中心,办公电话：3029114,主讲人：王兴平 Email：nwsuafwxp163.com,PCR扩增制备目的基因,一、实验目的,熟悉PCR的基本原理 学会PCR操作的基本技术 制备目的基因,二、实验原理,三、实验器材、试剂,1.器材：旋涡混合器，微量移液取样器，移液器吸头，0.2ml PCR微量管，双面微量离心管架，PCR仪，台式离心机，琼脂糖凝胶电泳系统，1.5ml离心管（灭菌）、移液器吸头（灭菌）。,2.试剂：3U/l Taq DNA聚合酶，PCR缓冲液（10,MgCl2 free）,25mM MgCl2，dNTP，引物，模板质粒，无菌dd water。 dNTP混合液。

13、,分子生物学实验 Experiments of molecular biology,实验四 PCR扩增目的基因,实验二 PCR扩增目的基因,【目的要求】 1掌握实验原理和实验基本过程； 2了解PCR引物设计原则；学会设计PCR引物 ； 3了解PCR的优化环节，学会如何优化PCR。了解PCR产物的保存方法；,【实验器材】PCR仪，台式离心机，微量移液器（10l、 100 l、 1000 l ）,150l Enpendorf管，电泳设备等【实验材料】pADH的PMD-20T质粒的模板，引物，4dNTP mix，Taq酶，10X PCR缓冲液、无菌水，琼脂糖，DNA染料，电泳缓冲液等。【实验内容】 PCR基础知识介绍； PCR的基本原理； PCR。

14、省卫生厅办公室关于印发江苏省临床基因扩增检验技术管理规范（试行）的通知苏卫办医201076 号 各市卫生局，厅直属有关医院：为贯彻落实医疗技术临床应用管理办法，规范临床基因扩增检验技术的临床应用，保证检验质量和医疗安全，我厅组织制定了江苏省临床基因扩增检验技术管理规范（试行），作为医疗机构、医务人员临床基因扩增检验技术临床应用能力审核、准入和监管的依据。现印发给你们，请遵照执行。二一年六月二十四日抄送：省医院协会、无锡市医管中心、中大医院、江大医院、省口腔医院。 附件： 江苏省临床基因扩增检验技术管理规范。

15、PCR技术原理及人SRY基因扩增,DNA的结构,DNA的复制,模板：基因组DNA 原料：游离的核苷酸A、G、C、T 催化剂：DNA聚合酶 需要的条件： 活细胞内的微观环境,DNA的复制,体内in vivo 体外in vitro,DNA的复制,PCR技术的发明,Kary B. Mullis,Californian highway,Khorana(1971)等提出在体外经DNA变性,与适当引物杂交,再用DNA聚合酶延伸,克隆DNA的设想。 1983年,Mullis发明了PCR技术,使Khorana的设想得到实现。 1988年Saiki等将耐热DNA聚合酶（Taq）引入了PCR技术。 1989年美国Science杂志列PCR 为十余项重大科学发明之首,比喻1989年为PCR爆炸年,Mu。

16、任务二 PCR扩增目的基因 一 实验目的 1 掌握PCR扩增DNA的技术与原理2 学习PCR扩增仪的使用 二 实验原理 聚合酶链式反应是一种体外DNA扩增技术 具有灵敏度高 特异性强 操作简便和应用广泛等特点 PCR工作原理类似于DNA的体。

17、利用PCR技术扩增目的基因,有些老师不理解“利用PCR技术扩增目的基因”为什么也是 获取目的基因的一种方法。 其实从PCR技术过程中，你能看到是可以得到目的基因的， 经过三轮复制后，就可以得到目的基因。随后，可以把目 的基因大量扩增。 下面，看动画和一个例题。希望给你一点帮助。,利用PCR技术扩增目的基因,变性 退火 延伸三步曲,例.“X基因”是DNA分子上一个有遗传效应的片段，若要用PCR技术特异性地拷贝“X基因”，需在PCR反应中加入两种引物(注：引物作用是与模板形成双链后在DNA聚合酶的作用下就可以继续链的延伸)，两种引物及其与。

18、全基因组扩增(whole gemome amplification，WGA)是一组对全部基因组序列进行非选择性扩增的技术，其目的是在没有序列倾向性的前提下大幅度增加 DNA 的总量。其基本原理为：采用的多重置换扩增（MDA）技术，能对基因组 DNA 进行稳定的扩增。利用随机六碱基引物在多个位点与模板 DNA 退火，接下来在高扩增效率和保真性的 Phi29 DNA 聚合酶在 DNA 的多个位点同时起始复制，它沿着 DNA 模板合成 DNA,同时取代模板的互补链。被置换的互补链又成为新的模板来进行扩增，因此最终我们可以获得大量高分子量的 DNA。全基因扩增中使用独特的 Phi 29 D。

19、Polymerase Chain Reaction聚合酶链反应（PCR）,Polymerase chain reaction又称无细胞分子克隆系统或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增法，在模板DNA，引物（模板两端的已知序列）和四种脱氧核苷酸存在的情况下，DNA聚合酶依赖的酶促合成反应。,PCR的定义,PCR技术是由Cetus公司和加利福利亚大学1985年联合创造的，主要贡献者为Kary B m。