1、第三章 药物的杂质检查,Test for Impurity,中国药科大学 药分教研室,第三章 药物的杂质检查 Test for Impurity,概 述,一般杂质检查,特殊杂质检查,一、概 述,1. 纯度纯度：药物纯净程度，反映药物质量的优劣杂质是影响药物纯度的主要因素 杂质：任何影响药物纯度的物质无治疗作用，对人体健康有害的物质本身无毒副作用，但影响药物的稳定性和疗效的物质,药物的杂质检查是控制药物纯度的重要方面，药物的纯度检查（Test for purity）也可称为杂质检查（Test for Impurity） 。“纯”是相对的，纯度以及对杂质的认识是不断 发展的药品的纯度应符合药用规格
2、,2.杂质（impurity）,杂质的来源： 生产过程引入：原料、中间体、副产物、试剂、溶剂、器皿、管道 贮藏过程引入：水解、氧化、异构化等,二、杂质来源与种类 source and sorts of impurities,1. 制备过程中产生,酸度：水解试剂带入乙醇中不溶物：水解中间体(糊精)可溶性淀粉：水解不完全,对映异构体-肾上腺素起效为左旋体，则生产过程中产生的右旋体为其杂质。多晶型-氯霉素B晶型为有效晶型，则生产过程中产生的A晶型为其杂质。,2.贮藏过程中产生,外界条件影响：日光、空气、温度、湿度、微生物等引起药物产生,例如： 麻醉乙醚 醛及有毒的 过氧化物,(1)一般杂质：在多种药
3、物中普遍存在的杂质。 (Cl- SO42- Pb As Fe)(2)特殊杂质：个别药物的生产及贮藏中引入的杂质。有害杂质 ( Pb As ) 信号杂质 （Cl- SO42-）：考察生产工艺，反映药物的纯度水平,杂质的种类,杂质的限量：药物中所含杂质的最大允许量。限量表示(g/g) ：百分之几（%）百万分之几（10-6）限量检查：检查所含杂质是否超过杂质限量的规定， 通常不要求测定其准确含量。,3、杂质的限量检查（limit test）,杂质限量检查方法-对照法,取一定量 (CV) 与被检杂质相同的纯品或对照品配成对照品溶液，与一定量(S)药物供试溶液在相同条件下处理后，比较反应结果，以确定杂质
4、含量是否超过规定。,对照液浊度 供试液浊度,杂质限量的计算：,式中：L 杂质的限度（%） C 对照液浓度 （g/ml） V 对照液的加入体积（ml) S 供试品的量(g) 注意: 单位统一,例 1 ： 对葡萄糖中氯化物的检查：取样品 0.6g 溶于6.0ml水中，按法测定，与标准NaCl溶液(含Cl- 10g/ml) 6ml对照液相比，不得更深。（0.01%）C= 10g/ml V=6.0 mlS= 0.6 g,灵敏度法：供试品在一定试剂和反应条件下，不得有正反应出现。如不得有沉淀反应产生。比较法：供试品依法检查，测定特定待检杂质的参数（如吸光度），与规定限量比较，不得更大。,其它杂质的限量检
5、查方法,例 2 ：,肾上腺素中检查肾上腺酮的方法为：取本品，加盐酸溶液制成2mg/ml的溶液，于310nm测定，吸收度不得过0.05。已知肾上腺酮在310处百分吸收系数为453，肾上腺素在该波长无吸收。则肾上腺酮的限量为多少？(5分),第二节 一般杂质检查方法,条件：硝酸酸性条件（稀硝酸10ml） 反应试剂：硝酸银试液 1.0ml / 50ml 杂质对照：NaCl (10g/ml，5080 g / 50ml 讨论：选择稀硝酸反应条件的意义。,一 、氯化物（Chloride ）检查 原理：,比浊方法：同置于黑色背景上，自上向下观察。 平行操作原则。 3. 若供试品有色，需经处理后方可检查。,注
6、意：,）干扰及排除,（1）外消色法：如高锰酸钾中氯化物的检查，可先加乙醇适量，使其还原褪色后再依法检查。,（2）内消色法：倍量法,供试品有色处理方法,二 、重金属（Heavy Metals ）的检查,1、第一法 硫代乙酰胺法 适用对象：溶于水、稀酸和乙醇的药物原 理：Pb2+ + 醋酸盐缓冲液 + 硫代乙酰胺(CH3CSNH2) PbS (黄棕黑) 条件：介质：醋酸盐缓冲液 (pH 3.0-3.5) 2ml 试剂：硫代乙酰胺 (CH3CSNH2) 2ml杂质对照液： PbNO3 (1020 g / 25ml)比浊方法：同置于白色背景上，自上向下观察。,注意：供试品如有色，需经处理后方可检查。,
7、1. 外消色法：在对照管中加稀焦糖溶液或其他无干扰的有色溶液。 2. 内消色法。 3. 改用第四法，微孔滤膜过滤法。,第二法：炽灼后的硫代乙酰胺法 适用对象：含芳环或杂环的有机药物如苯佐卡因、甲硝唑 第三法: 硫化钠法 适用对象：溶于碱的药物或在稀酸产生沉淀的药物如磺胺类、巴比妥类,第四法： 铅斑法,三、砷 盐 (arsenic),第一法 古蔡氏法 Gutzeit第二法 Ag-DDC法白田道夫法 Bettendorff 次磷酸法,国内外常用方法：,古蔡氏法(砷斑法):,原理:As3+3Zn+3H+3Zn2+AsH3 AsH3+3HgBr3HBr+As(HgBr)3 装置： 操作：安装装置 加入
8、试剂及样品/对照 加入Zn粒，立即密塞 水浴反应 比较砷斑,8cm,18cm,有孔玻璃旋塞,导气管,AsH3发生瓶,注意事项：,KI试液、酸性SnCl2 的作用:将As5+转化为As3+；加快AsH3 的生成；抑制Sb的干扰；均匀连续的发生氢气 醋酸铅棉花：吸收H2S,避免干扰；用量60mg（6080mm）,不同药物的干扰排除,硫化物、亚硫酸盐：先用硝酸氧化成硫酸盐 铁盐：用氯化亚锡还原成二价铁离子； 环状有机药物：先酸破坏或碱破坏 含锑药物：改用白田道夫法,Ag-DDC法,灵敏、准确，还可作微量砷的含量测定 原理： As3+3Zn+3H+ 3Zn2+AsH3 AsH3+6Ag(DDC)+3
9、As(DDC)3+6Ag +3 HDDC,二乙基二硫代氨基甲酸银，Ag-DDC,AsH3发生装置、操作同古蔡氏法； 吸收液：有机碱（吡啶、TEA氯仿等）； 目视比色或510nm处比色测定生成的红色胶态Ag,四 、 炽灼残渣,测定样品中非挥发性无机盐类 原理：灼烧破坏有机物，将其转化成硫酸盐，称重 操作：先恒重坩埚，称样品，炭化，加硫酸，700-800 灼烧至恒重 计算：炽灼残渣=(w1-w2)/w 100w1：残渣及坩埚重；w2：空坩埚重；w：样品重,五、干燥失重 （ loss on drying）,恒温干燥 减压干燥 干燥剂干燥 热分析法 thermal analysis,TA,干燥失重物主
10、要指水分 (结晶水或吸附水) 或挥发性物质,热分析法,热重分析法 thermal gravimetric analysis,TGA 差示热分析法 differential thermal analysis,DTA 差示扫描量热法differential scanning calorimetry, DSC,TGA：在程序控制温度下，测量物质的质量与温度关系的方法,草酸钙(CaC2O4H2O)的热重曲线,DTA：在程序控制温度下，测量供试品和惰性参比物之间的温度差与温度的关系,差示热分析仪主要结构简图,DSC：测量保持供试品和惰性参比物的温度相同, 系统所需输给供试品或参比物的能量差与温度的关系,
11、甲磺酸二氢麦角毒碱的DSC-TGA曲线,盐酸多巴酚丁胺的DTA-TGA曲线,DTA,196,233,97.2%,98.6%,标准品,不同纯度苯甲酸的DSC曲线,温度(),50 80 110 140 170 200 230 260 290,15.00,0.00,7.50,盐酸舍曲林晶型的DSC曲线,mcal/sec,温度(),50 80 110 140 170 200 230 260 290,5.00,0.00,2.50,mcal/sec,盐酸舍曲林晶型的DSC曲线,六、有机溶剂残留量测定,色谱系统与系统适用性试验 System Suitability Tests; SSTs 以直径为0.250
12、.18mm的二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球作为固定相，柱温为80170；并符合下列条件：用待测物的色谱峰计算的N应大于1000；内标物与待测物的两个色谱峰的R1.5；每个标准溶液进样5次，所得待测物与内标物峰面积之比的RSD5%；若以外标法测定，所得待测物峰面积的RSD10%,有机溶剂残留量测定法,有机溶剂 限度,% 限度,%苯 0.01 0.0002氯仿 0.005 0.006二氧六环 0.01 0.038二氯甲烷 0.01 0.06吡啶 0.01 0.02甲苯 0.01 0.089环氧乙烷 0.001 0.001 Ch.P(95) Ch.P(2000),有机溶剂残留量 检查药物在生产
13、过程中引入的有害有机溶剂 GC法测定 分为直接进样法、顶空进样法 色谱系统与系统适用性试验,酸碱性的差异 氧化还原性的差异 杂质的沉淀、显色、产生气体反应,化学性质上差异：,第三节 特殊杂质检查,例：阿司匹林中游离水杨酸检查,阿司匹林+Fe3+ 水杨酸+Fe3+ 紫色,嗅味及挥发性的差异 颜色的差异 溶解行为的差异 旋光性质的差异 吸附或分配性质的差异 色谱分析法 对光选择吸收性质的差异 光谱分析法,物理性质上差异：,旋光性质的差异,Ch.P规定黄体酮在乙醇中的比旋度为：186198黄体酮及其中间体的比旋度（溶剂：乙醇）化合物 浓度% 温度 D黄体酮 11.4 2025 +1934醋酸双烯醇酮
14、 0.9 20 -312醋酸妊娠烯醇酮 1 常温 +202,嗅味及挥发性的差异 颜色的差异 溶解行为的差异 旋光性质的差异 吸附或分配性质的差异 色谱分析法 对光选择吸收性质的差异 光谱分析法,物理性质上差异：,一、色谱分析法 薄层色谱法 TLC,利用样品吸附行为的差异进行分离。1。吸附剂：硅胶、氧化铝、聚酰胺、纤维素。 2。薄层涂布：无粘合剂：软板含粘合剂：硬板0.50.7%羧甲基纤维素钠水溶液 3。 点样：毛细管、微量注射器 4。展开。 5。显色。,比移值,常 用 方 法：,杂质对照品法：有杂质对照品。 供试品自身对照法 对照药物法,供试品10l N-甲基哌嗪10l 50mg/ml 50g
15、/ml,枸橼酸乙胺嗪 I2蒸气显色,常 用 方 法：,杂质对照品法：有杂质对照品。 供试品自身稀释对照法：无杂质对照品 对照药物法,其中有1个杂质点应不深于0.002%供试品的主斑点。,氨苯砜中检查“有关物质”规定：,0.01%供试品,100g/ml,1%供试品,10mg/ml,0.002%供试品,20g/ml,常 用 方 法：,杂质对照品法：有杂质对照品。 供试品自身稀释对照法：无杂质对照品 对照药物法：合格药物对照,吸附或分配行为差异 TLC法： a.杂质对照法 b.自身对照法 c.对照药物法,高效液相色谱法 HPLC,主 要 方 法：,峰面积归一化法 不加校正因子的主成分自身对照法 加校
16、正因子的主成分自身对照法：用于有杂质对照品时，杂质的含量测定。外标法测定供试品中某个杂质或主成分的含量：用于有杂质对照品或杂质对照品易制备的情况。 内标法加校正因子测定供试品中杂质的含量：用于有杂质对照品时，杂质的含量测定。,光谱分析法,紫外分光光度法 红外分光光度法 原子吸收分光光度法,例 3 ：,肾上腺素中检查肾上腺酮的方法为：取本品，加盐酸溶液制成2mg/ml的溶液，于310nm测定，吸收度不得过0.05。已知肾上腺酮在310处百分吸收系数为453，肾上腺素在该波长无吸收。则肾上腺酮的限量为多少？(5分),220 260 300 nm,肾上腺酮及肾上腺素的紫外吸收曲线,max310nm,
