1、专题5 DNA和蛋白质技术,陇县第二高级中学 郑杜娟,人教版生物选修一,课题1 DNA的粗提取与鉴定,基础知识,提取DNA的基本思路：利用DNA与蛋白质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。,1）不同浓度NaCl中DNA溶解度不同。 2）DNA与其他细胞成分在酒精中溶解度不同，DNA不溶于酒精，细胞中某些蛋白质则溶于酒精。 3）DNA和蛋白质对酶耐受性不同：酶的专一性蛋白酶水解蛋白质。但是对DNA没有影响。 4）DNA和蛋白质对高温耐受性不同：蛋白质、DNA热稳定性不同。大多数蛋白质不能忍受6080高温，而DNA在80以上才会变性。 5）DNA和蛋白质对洗涤剂耐受性不同：洗涤
2、剂能够瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。,DNA的粗提取实验原理,案例一：以鸡血为实验材料进行DNA的粗提取,1、实验原理,实验案例,1）不同浓度NaCl中DNA溶解度不同。 2）DNA与其他细胞成分在酒精中溶解度不同，DNA不溶于酒精，细胞中某些蛋白质则溶于酒精。,2.实验材料 动物,提醒：人和哺乳动物成熟的红细胞中不含细胞核，也没有DNA，不适于作为DNA提取的材料，但却是提取血红蛋白的理想材料。,鸡血细胞液的优点：鸡血红细胞、白细胞中都有细胞核，含大量的DNA,既经济又易取 。,植物：洋葱、新鲜菜花、蒜黄、菠菜等。,6,3、方法与过程,1).制鸡血细胞液,500mL烧杯中，玻棒搅拌，离心或
3、静置沉淀。,离心或静置后去掉上清液,血浆,血细胞,提取细胞核物质：,溶解核内DNA：,析出DNA：,DNA黏稠物再溶解：,提取较纯净的DNA：,DNA的鉴定：,滤取DNA黏稠物：,过滤含DNA的NaCl溶液：,2)实验方法步骤：,在上述溶液中缓缓加入蒸馏水，并沿一个方向轻轻搅拌，出现丝状物；当丝状物不在增加时，停止加水（此时NaCl溶液的浓度相当于0.14mol/L）。,用多层纱布过滤，含DNA的粘稠物留在纱布上。,用两层纱布过滤。滤液中含有DNA。,所得的滤液体积分数为95%的冷却酒精50mL，用玻棒沿一个方向轻缓搅拌，溶液中（析出）出现乳白色丝状物，用玻棒将丝状物卷起。,利用细胞吸水破裂，
4、细胞核内物质释放出来，用纱布过滤取其滤液。,在滤液中加2mol/L的NaCl溶液并搅拌，使染色质中DNA 与蛋白质分离，DNA充分溶解，过滤(除杂质),在烧杯中用2mol/L的NaCl溶液溶解DNA。,DNA与二苯胺试剂反应使溶液呈现蓝色。,鉴定,均加入： 4 mL二苯胺试剂 2mol/LNaCl溶液5 mL,自变量,你能采用其他方法对DNA进行鉴定吗？,取少许丝状物，置玻片中央，加1滴甲基绿溶液，丝状物变成绿色。,注意：鉴定所用的试剂是二苯胺或甲基绿。 用二苯胺须加热。用甲基绿不用水浴加热。,注 意 事 项 制备鸡血细胞液时，要在取鸡血的同时加入柠檬酸钠，静置后上层是血清，下层为所需要的血细
5、胞。 整个实验中加入“两次蒸馏水，三次NaCl溶液，一次酒精” 两次加蒸馏水的目的不同，一是涨破细胞，二是稀释溶液。 酒精最好用95%的冷酒精; 加蒸馏水或加入酒精用玻棒搅拌时,动作要轻缓且朝一个方向。保证DNA分子的完整性。使用时注意玻璃棒不要碰到烧杯底。 鉴定DNA时需沸水浴加热。 二苯胺试剂要现配现用,否则会影响鉴定的效果.二苯胺是一种有毒性的试剂,使用时注意不要让药液接触到皮肤或身体的其他部位. 盛放鸡血细胞的容器最好是塑料容器（鸡血细胞破碎后释放的DNA，容易被玻璃容器吸附，造成提取过程中DNA的损失）,小结：,练习,1下列图示中能反映DNA溶解度与NaCI溶液浓度之间关系的是（ ）
6、,2在DNA的粗提取和鉴定的实验中，提取鸡血细胞的核物质和析出含DNA的粘稠物的操作过程中均用到蒸馏水，其作用在于 ( ) A前者用来溶解血细胞，后者用来溶解DNA B前者使血细胞吸水破裂，后者用来稀释NaCl溶液 C前者用来分离细胞核与细胞质，后者用来提取DNA D前者使DNA从核中分离出来，后者使DNA析出,C,B,3、下图为“DNA粗提取和鉴定”实验的相关操作。这些操作目的正确的是 （ ）,A.是洗涤血细胞，去除血细胞表面的杂质B.是溶解DNA，去除不溶于酒精的杂质C.是溶解DNA，去除不溶于2 mol/L NaCl溶液的杂质D.是稀释NaCl溶液，去除不溶于低浓度NaCl溶液的杂质,是释放核物质,是提纯DNA，去除溶于酒精的杂质，,稀释NaCl溶液，析出DNA。,C,
