1、1DNA 的粗提取与鉴定教学目标（一）知识与技能1、通过尝试对植物或动物组织中的 DNA 进行粗提取，了解 DNA 的物理化学性质。2、理解 DNA 粗提取与鉴定的原理（二）过程与方法掌握 DNA 如提取计数，能利用 DNA 的性质进行实验设计和操作（三）情感、态度与价值观通过对 DNA 的粗提取的实验过程的设计及操作，锻炼科学的思维方法，培养实事求是的科学态度。教学重难点【课题重点】DNA 的粗提取和鉴定方法【课题难点】DNA 的粗提取和鉴定方法教学工具多媒体教学过程（一）引入新课无论是果胶酶还是加酶洗衣粉中的酶制剂，都是从细胞中提取出来的。从今天开始，我们学习生物化学成分的提取与改造技术。
2、（二）进行新课1基础知识11DNA 粗提取的原理提取 DNA 的原理包括 DNA 的溶解性和耐受性两个方面。问：提取 DNA 的溶解性原理包括哪些方面？DNA 在不同浓度 NaCl 溶液中溶解度不同；DNA 不溶于酒精。111 分析图 51。DNA 在不同浓度 NaCl 溶液中溶解度有何特点？要使 DNA 溶解，需要使用什么浓度？要使 DNA 析出，又需要使用什么浓度？2在 0.14mol/L 时溶解度最小；较高浓度可使 DNA 溶解；0.14mol/L 可使 DNA 析出。112 在溶解细胞中的 DNA 时，人们通常选用 2mol/LNaCl 溶液；将 DNA 分子析出的方法是向溶有 DNA
3、 的 NaCl 溶液中缓慢注入蒸馏水，以稀释 NaCl 溶液。酒精是一种常用有机溶剂，但 DNA 却不能溶于酒精（特别是 95冷却酒精），但细胞中蛋白质可溶于酒精。问：采用 DNA 不溶于酒精的原理，可以达到什么目的？将 DNA 和蛋白质进一步分离。113 提取 DNA 还可以利用 DNA 对酶、高温和洗涤剂的耐受性原理。利用该原理时，应选用怎样的酶和怎样的温度值？蛋白酶，因为酶具有专一性，蛋白酶只水解蛋白质而不会对 DNA 产生影响。温度值为6080，因为该温度值蛋白质变性沉淀，而 DNA 不会变性。补充：DNA 的变性是指 DNA 分子在高温下解螺旋，其温度在 80以上，如在 PCR 技术
4、中DNA 变性温度在 95。思考：观察图 5-2，洗涤剂在提取 DNA 中有何作用？洗涤剂将细胞膜上的蛋白质，从而瓦解细胞膜。12DNA 的鉴定原理当鉴定提取出的物质是否是 DNA 时，需要使用什么指示剂进行鉴定？在沸水浴条件下，DNA 遇二苯胺呈现蓝色。原理总结。通过利用不同浓度 NaCl 溶液溶解或析出 DNA，可以从细胞中提取和提纯 DNA；再利用酒精进一步将 DNA 与蛋白质分离开来，达到提纯的目的；最后利用二苯胺试剂鉴定提取的物质是否是 DNA。2实验设计21 实验材料2.1.1 不同生物的组织中 DNA 含量不同。在选取材料时，应本着 DNA 含量高、材料易得、便于提取的原则。你认
5、为教材提供的材料中哪些不适合提取 DNA？哺乳动物的血液和液体培养基中的大肠杆菌。2.1.2 从核 DNA 数目来看，猪 38 条，鸡 78 条，哺乳动物血 0 条，猕猴桃 58 条，洋葱 16条，豌豆 14 条，菠菜 12 条，大肠杆菌 1 条。请选择动植物材料各一种。鸡血、猕猴桃。22 破碎细胞，获取含 DNA 的滤液若选用鸡血和洋葱作实验材料，则怎样获取含 DNA 的滤液？3在鸡血细胞液中加入一定量蒸馏水并用玻棒搅拌，过滤后收集滤液；切碎洋葱，加入一定量洗涤剂和食盐，搅拌研磨，过滤后收集滤液。在以上实验中，加入蒸馏水、洗涤剂和食盐的作用分别是什么？过滤时应当选用（滤纸、尼龙布）。血细胞在
6、蒸馏水中大量吸水而张裂；洗涤剂瓦解细胞膜；食盐溶解 DNA 物质；选用尼龙布进行过滤。在处理植物组织时需要进行研磨，其目的是什么？研磨不充分产生什么结果？破碎细胞壁，使核物质容易溶解在 NaCl 溶液中；研磨不充分会使 DNA 的提取量减少。具体做法。10mL 鸡血20mL 蒸馏水同方向搅拌3 层尼龙布过滤滤液23 去除滤液中的杂质最初获得的 DNA 滤液含有蛋白质、脂质等杂质，需要进一步提纯 DNA。阅读教材提供的三种方法，分析其中的原理。方案一的原理是 DNA 在不同浓度 NaCl 溶液中溶解度不同；方案二的原理是蛋白酶分解蛋白质，不分解 DNA；方案三的原理是蛋白质和 DNA 的变性温度
7、不同。具体做法。方案一：30mL 滤液35gNaCl同方向搅拌，DNA 溶解加入蒸馏水DNA 析出过滤得到过滤物放到 2mol/LNaCl 溶液中溶解DNA-NaCl 溶解液方案二：30mL 滤液嫩肉粉（木瓜蛋白酶）静置 1015 分钟DNA 滤液方案三：30 滤液6067处理过滤获得 DNA 滤液24DNA 析出与鉴定在滤液中仍然含有一些杂质，怎样除去这些杂质呢？得到的 DNA 呈何颜色？滤液与等体积的冷却酒精混合均匀，静置 23 分钟，析出的白色丝状物就是 DNA。DNA 呈白色。怎样鉴定析出的白色丝状物就是 DNA 呢？阅读教材。阅读。简述 DNA 的鉴定过程。具体做法。试管 2 支，编
8、号甲乙各加等量 5mLNaCl 溶液甲中放入少量白色丝状物，使之溶解各加 4mL 二苯胺，混合均匀沸水浴 5min观察颜色变化3实验操作制备鸡血细胞液加柠檬酸钠，静置或离心4破碎细胞，释放 DNA 加蒸馏水，同一方向快速通方向搅拌过滤，除去细胞壁、细胞膜等。溶解核内 DNA 加入 NaCl 至 2mol/L，同一方向缓慢搅拌DNA 析出 加蒸馏水至 0.14mol/L，过滤，在溶解到 2mol/L 溶液中除去细胞质中的大部分物质。DNA 初步纯化 与等体积 95冷却酒精混合，析出白色丝状物除去核蛋白、RNA、多糖等。DNA 鉴定 二苯胺，沸水浴，呈现蓝色其它注意事项：在鸡血中加入柠檬酸钠防止凝
9、固；鸡血静置或离心以提高细胞悬液浓度；使用塑料烧杯；使用尼龙布过滤；玻棒沿同一方向搅拌；玻棒搅拌要缓慢（细胞破裂快速搅拌）；玻棒不要碰到烧杯壁；二苯胺试剂要现用现配等。为了提高 DNA 纯度，在科学实验中通常使用的洗涤剂有十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）、十二烷基硫酸钠（SDS）。课后小结课后习题1.在研究 DNA 的基因样本前，采集来的血样需要蛋白水解酶处理，然后用有机溶剂除去蛋白质。用蛋白水解酶处理血样的目的是（ ）A.除去血浆中的蛋白质 B.除去染色体上的蛋白质 C.除去血细胞表面的蛋白质D.除去血细胞中的所有的蛋白质，使 DNA 释放，便于进一步提纯2与析出 DNA 粘稠物有关的叙述，
10、不正确的是（ ）A.操作时缓缓滴加蒸馏水，降低 DNA 的溶解度 B.在操作 A 时，用玻璃棒轻缓搅拌，以保证 DNA 分子完整 C.加蒸馏水可同时降低 DNA 和蛋白质的溶解度，两者均可析出5D.当丝状粘稠物不再增加时，此时 NaCl 的浓度相当于 0.14mol/L3洗涤剂能够瓦解（ ），但对 DNA 没有影响。A.细胞壁 B.细胞膜 C.细胞核 D.细胞质4在沸水浴的条件下，DNA 遇（ ）会被染成蓝色。A.斐林试剂 B.苏丹染液 C.双缩脲试剂 D.二苯胺5在 DNA 提取过程中，最好使用塑料试管和烧杯，目的是（ ）A.不易破碎 B.减少提取过程中 DNA 的损失 C.增加 DNA 的含量 D.容易洗刷参考答案：DCBDB板书课题 1 DNA 的粗提取与鉴定1基础知识11DNA 粗提取的原理12DNA 的鉴定原理2实验设计21 实验材料22 破碎细胞，获取含 DNA 的滤液23 去除滤液中的杂质24DNA 析出与鉴定
