1、 乳腺癌和肺癌基因检测项目计划书一 项目背景乳腺癌是女性最常见的癌种，占女性恶性肿瘤的 1/3，其发病率约为 30/10 万，即每年 10 万女性中有 30 位会患乳腺癌。男性也可患乳腺癌，但比例很低，男女比例约为1:100。遗传性乳腺癌占全部乳腺癌的 10%左右， 而在遗传性乳腺癌患者中，有 50%左右是由于BRCA1、BRCA2 基因突变所引起， 30%是由ATM、BARD1 、 BRIP1、CDH1、CHEK2、MSH6、MRE11A、MUTYH 、NBN、NF1 、PALB2 、PTEN、RAD50 、RAD51C、STK11、TP53 这 16 个基因突变所致。 BRCA1、BRCA
2、2 基因主要功能是参与细胞 DNA 修复、蛋白降解、调节基因转录、调节细胞周期等，当它们发生突变后，细胞不能进行正常的生理活动而发生恶性增殖，最终导致乳腺癌的发生。BRCA1、BRCA2基因突变的携带者一生患乳腺癌的几率可能高于 80%。因此，对有家族史的个体（也包括男性）进行基因检测有助于乳腺癌的早发现，早干预，早治疗。肺癌是肺部常见的恶性肿瘤，对人类健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一。在男性肿瘤中，肺癌发病率和死亡率均占所有恶性肿瘤的第一位，在女性肿瘤中，肺癌的发病率和死亡率屈居乳腺癌占第二位。目前研究已发现有数十个基因与肺癌结肠癌的发生密切相关，而其中部分基因的突变又与靶向药物治疗的效果密
3、切相关。如携带 EGFR 基因敏感突变的肺癌患者，接受吉非替尼（易瑞沙）治疗疗效显著高于化疗药物，但这类敏感人群在欧美仅约 10%，在中国也只有不到 40%。又如，KRAS 基因是肿瘤生长信号通路中的一个关键基因，如果结肠癌患者是KRAS 野生型，接受西妥昔单抗治疗后，将近 70%左右的患者会有明显获益，但如果患者携带 KRAS 耐药突变，则获益情况远不如传统化疗。因此，美国NCCN 指南明确指出：患者在接受靶向药物治疗前应进行相关基因的检测，据此确定是否适合用药。因此，对潜在风险人群进行基因检测不仅有助于肺癌结肠癌的早发现早干预，对患者的靶向药物治疗也有重要的指导作用。 二 市场调查肿瘤的个
4、性化用药基因检测是国家颁布的精准医疗计划重要的组成的部分，市场前景广阔，在美国这项检查已经纳入医保计划；在中国通过前期一些公司的市场宣传市场接受度高，预计市场规模可以达到百亿的规模。市面上的主流二代测序公司都开展这项目，比较出名的是华大基因，达安基因，贝瑞和康，诺禾致源，上海伯豪，联川基因等，这些公司基本上采用卖服务的商业模式，自己获取标本，自己测序和分析。三 技术路线1 总技术路线检测前咨询签订知情同意书，缴费预约取样2. 技术细节目前市场上有多种商业化的乳腺癌和肺癌基因检测试剂盒， 比如：1. 贝瑞和康公司贝瑞和康的 BRCA1/2、PTEN 、TP53 基因突变检测试剂盒基于目标捕获技术
5、，检测人类样本中 BRCA1/2、PTEN、TP53 这 4 个遗传性妇科肿瘤相关基因的全部外显子区域 贝瑞和康 cSMART 肿瘤基因突变检测试剂盒用于非小细胞肺癌基因突变检测 ，它采用贝瑞和康专利的 cSMART 技术，通过对外周血或肿瘤组织样本中的 DNA片段进行标记、环化、扩增和高通量测序，并采用独特的生物信息学分析方法，能够准确、定量地分析样本所携带的多种突变，检测灵敏度达 3/10000，可协助医生为患者筛选靶向药物。2 联川生物联川生物公司的 VariantProTM Lung and Colon Cancer Panel 试剂盒并结合高通量测序平台，能快速地对肺癌结肠癌 22
6、个基因的热点和靶向区域进行检测，覆盖肺癌结肠癌22 个基因的热点和靶向区域：KRAS, EGFR, BRAF, PIK3CA, AKT1, ERBB2, PTEN, NRAS, STK11, MAP2K1, ALK, DDR2, CTNNB1, MET, TP53, SMAD4, FBXW7, FGFR3, NOTCH1, ERBB4, FGFR1, FGFR2 联川生物的 VariantProTM BRCA1 and BRCA2 Panel 试剂盒并结合高通量测序平台，能快速地对 BRCA1 和 BRCA2 基因全部突变区域进行检测从前期技术磨合的考虑，可以购买商业化成熟的试剂盒，减少摸索的
7、时间。四 项目周期目前市场上主流的公司项目周期都是 15 天。提取 DNA文库构建上机测序数据分析出具检测报告前期样本准备 1 天文库的构建 5 天上机测序 4 天数据分析 4 天解读报告 1 天五 项目所需的仪器实验仪器 主要用途制冰机 制冰电冰箱 试剂的储存高速台式离心机 试剂的离心Mini 式离心机 瞬离试剂旋涡式混合振荡器 混匀试剂电子分析天平 试剂的称量核酸检测仪 核酸纯度和浓度的检测PCR 仪 PCR电泳仪和水平电泳槽 琼脂糖凝胶电泳凝胶成像仪 核酸琼脂糖凝胶电泳的检测和分析蒸汽式高压湿热消毒器 试剂、实验耗材及用具的消毒电热鼓风干燥箱 实验用品的干燥恒温水浴锅 提供恒温环境电脑
8、用于数据分析第二代测序仪 测序六 项目成本本次实验所用到的试剂和耗材的价格表如下： 以乳腺癌基因检测为例：名称 单价 规格 做一次实验的用量每次实验的价格全血基因组提取试剂盒1500 元 天根公司，200 次/盒 一个反应 7.5 元采血针 1 元 个 1 个 1 元采血费 3 元 次 1 次 3 元琼脂糖粉 70 元 索莱宝公司 10g/瓶 1g 7 元文库构建试剂盒（12 人份）3600 元 联川生物 1 个反应 300 元1.5mlLEP 管 50 元 1 袋/500 个 10 个 1 元目前市场上乳腺癌 2 基因检测的市场报价平均是 3000 元，我统计了不包括人工费，水电费，房租费，税费，测序费和分析费，做一个基因检测需要 319.5 元。七 项目的风险目前国内要开通医学高通测序检测，需要国家认证的 CFDA 证书，实验室需要符合 CLIA认证。
