1、药物代谢酶和药物作用靶点基因检测技术指南(试行)前言药物体内代谢、转运及药物作用靶点基因的遗传变异及其表达水平的变化可通过影响药物的体内浓度和敏感性，导致药物反应性个体差异。近年来随着人类基因组学的发展，药物基因组学领域得到了迅猛发展，越来越多的药物基因组生物标记物及其检测方法相继涌现。药物基因组学已成为指导临床个体化用药、评估严重药物不良反应发生风险、指导新药研发和评价新药的重要工具，部分上市的新药仅限于特定基因型的适应症患者。美国 FDA 已批准在 140 余种药物的药品标签中增加药物基因组信息，涉及的药物基因组生物标记物 42 个。此外，部分行业指南也将部分非 FDA 批准的生物标记物及
2、其特性（如 MGMT 基因甲基化）的检测列入疾病的治疗指南。药物反应相关基因及其表达产物的分子检测是实施个体化药物治疗的前提。药理学与遗传学结合的关键环节包括药物代谢动力学（pharmacokinetics，PK）和药物效应动力学（pharmacodynamics ，PD ）两方面。药物代谢动力学主要是定量研究药物在生物体内吸收、分布、代谢和排泄规律，侧重于阐明药物的体内过程；药物效应动力学主要研究药物对机体的作用、作用规律及作用机制，其内容包括药物与作用靶位之间相互作用所引起的生化、生理学和形态学变化，侧重于解释药物如何与作用靶点发生作用。对药物代谢酶和药物靶点基因进行检测可指导临床针对特定
3、的患者选择合适的药物和给药剂量，实现个体化用药，从而提高药物治疗的有效性和安全性，防止严重药物不良反应的发生。目前美国 FDA 和我国食品药品监督管理局（ CFDA）都已批准了一系列的个体化用药基因诊断试剂盒。这些试剂盒基本都是对人 DNA 样本进行基因检测。而在基因表达的检测方面，由于 RNA 的稳定性差，样本处置不当可导致目标 RNA 降解，使得检测结果不准确，影响临床判断。因此，RNA 检测试剂的研发相对滞后。本指南旨在为个体化用药基因检测提供一致性的方法。本指南中所指的药物基因组生物标志物不包括影响抗感染药物反应性的微生物基因组变异。此外，肿瘤靶向治疗药物个体化医学检测指南见肿瘤个体化
4、治疗的检测技术指南 。本指南起草单位：中南大学湘雅医院临床药理研究所、中南大学临床药理研究所、中南大学湘雅医学检验所，并经国家卫生计生委个体化医学检测技术专家委员会、中国药理学会药物基因组学专业委员会、中国药理学会临床药理学专业委员会和中华医学会检验分会组织修订。本指南起草人：周宏灏、陈小平、张伟、刘昭前、尹继业、李智、李曦、唐洁、俞竞、彭静波、曹杉、成瑜。I目 录1.本指南适用范围 .12.药物代谢酶和药物作用靶点基因检测概述 .13.标准术语 .14.药物代谢酶和药物作用靶点基因检测分析前质量保证 .64.1 采样前准备 64.2 标本采集 74.3 标本的运输与保存 94.4 标本的接收
5、与保存 95.药物代谢酶和药物作用靶点基因检测分析中质量保证 .105.1 实验室设计要求 105.2 检测方法 115.3 仪器设备的使用、维护与保养 175.4 人员培训 175.5 检测体系的性能验证 186.药物代谢酶和药物作用靶点基因检测分析后质量保证 .196.1.检测报告、解释及报告发放 196.2 检测后样本的保存和处理 237.药物代谢酶和药物作用靶点基因检测的质量保证 .237.1 检测确认和特征描述 .247.2 可操作性的 SOP 编写 247.3 质控品与室内质控 247.4 室内质控的评价 267.5 室间质量评价 268.制度 .27附录 A. 基因及突变名称、核
6、酸信息 .28附录 B. 缩略语 .30附录 C. 药物代谢酶和药物作用靶点基因检测项目列举 33附录 D. 药物代谢酶和药物作用靶点基因相关的药物 .50参考文献 5211. 本指南适用范围本指南由国家卫生计生委个体化医学检测技术专家委员会制定，旨在为临床检验实验室进行药物代谢酶和药物靶点基因的检测提供指导。本指南的主要适用对象为开展个体化医学分子检测的医疗机构临床实验室。2. 药物代谢酶和药物作用靶点基因检测概述药物代谢酶和药物作用靶点基因特性的变化可通过影响药物的体内浓度和靶组织对药物的敏感性，导致药物反应性（包括药物的疗效和不良反应发生）个体差异。药物基因组生物标志物的检测是临床实施个
7、体化药物治疗的前提。从药物代谢酶和药物作用靶点基因出发，对个体化用药基因检测的适应人群、标本采集、运输、接收、处理、样本检测、结果报告与解释、室内室间质控需遵循的基本原则，以及可能出现的问题与应对措施等方面的内容进行介绍，可为基于药物代谢酶和药物作用靶点的基因检测提供标准化指导。3. 标准术语3.1 Ct 值（threshold cycle）荧光定量 PCR 反应的荧光强度超过设定的阈值所需的循环数。Ct 值位于 PCR 反应的指数期初期，与标本中待测核酸分子的原始拷贝数呈反比，即样本中原始拷贝数越多，荧光强度升高的就越快，相应的 Ct 值就越小。3.2 RNA（ribonucleic aci
8、d）核糖核酸，与 DNA 类似的单链核酸，由核糖核苷酸按照一定的顺序排列而成，含尿嘧啶而不含胸腺嘧啶，存在于细胞质和细胞核中，在细胞蛋白质的合成及其他化学活动中起重要的作用。RNA 分子包含信使 RNA（mRNA ） 、转运 RNA（tRNA ） 、核糖体 RNA（rRNA）和其他小 RNA 等多种类型，分别行使不同的功能。各种 RNA 的混合物称为总 RNA。3.3 rs 和 ss 体系 SNP由美国国立生物技术信息中心（national center for biotechnology information，NCBI）建立、 dbSNP 数据库制定的 SNP 命名体系，rs 体系的 SN
9、P 代表已获得官方认可和推荐的参考 SNP（reference SNP） ，ss 体系的 SNP 代表用户新递交但尚未得到认可的 SNP（submitted SNP） 。 3.4 TE 缓冲液TE 缓冲液由 Tris 和 EDTA 配置而成，主要用于溶解 DNA，能稳定储存 DNA。23.5 错配修复（mismatch repair，MMR ）在含有错配碱基的 DNA 分子中，使正常核苷酸序列恢复的核甘酸修复方式，这种类型的修复可纠正 DNA 双螺旋上错配的碱基对，还可修复因复制打滑而产生的核苷酸插入或缺失。MMR 的过程需要区分母链和子链，做到只切除子链上错误的核苷酸，而不会切除母链上的正常
10、核苷酸。修复的过程是：识别出正确的链，切除掉不正确的部分，然后通过 DNA 聚合酶 III 和 DNA 连接酶的作用，合成正确配对的双链 DNA。3.6 单核苷酸多态性（SNP）是指由单个核苷酸A、T、C 或 G 的改变而引起的 DNA 序列的改变，造成包括人类在内的物种之间染色体基因组的多样性。3.7 等位基因一般是指位于一对同源染色体相同位置上控制某一性状的不同形态的一对基因。若成对的等位基因中两个成员完全相同，则该个体对此性状来说是纯合子。若两个等位基因各不相同，则该个体对该性状来说是杂合子。3.8 5-氟尿嘧啶一种嘧啶类似物，作为胸苷酸合成酶抑制剂，阻断 DNA 复制的必需原料胸腺嘧啶
11、的合成。主要用于肿瘤的治疗。3.9 光密度表示紫外光照射下被检测物吸收的光密度，260nm 波长下的吸光值（DNA 吸收峰值）可用来表示 DNA 的相对浓度，具体换算公式为：DNA 浓度（ng/ l）=OD 260 X 50 X 稀释倍数。3.10 基因芯片将大量（通常每平方厘米点阵密度高于 400）的核酸探针分子固定于支持物上并与标记的样品分子进行杂交，通过检测每个探针分子的杂交信号强度进而获取样品分子的数量和序列信息。3.11 基因是遗传物质的最小功能单位，是指具有一定生物学意义的一段 DNA。3.12 基因型又称遗传型，是某一生物个体全部基因组合的总称，它反映生物体的遗传构成，即从双亲获
12、得的全部基因的总和。据估计，人类的结构基因有 3 万个。因此，整个生3物的基因型是无法表示的，遗传学中具体使用的基因型，往往是指某一性状的基因型。3.13 基因组生物标志物是一种可用于指示正常生物学过程、病理过程和/或对治疗及其他干预措施反应性的可测量的 DNA 或 RNA 特性。其中 DNA 的特性可包括但不仅限于单核苷酸多态性、短序列重复次数多态性、单倍型、DNA 修饰如甲基化、核苷酸的插入/缺失、拷贝数变异及细胞遗传学重排如转位、重复、缺失或反转。RNA 特性包括但不仅限于 RNA 序列、RNA 表达水平、RNA 处理过程（如剪接和编辑） 、微小 RNA。3.14 检出限（limit o
13、f detection，LOD）标本中一种分析物可被检出的最低的含量，这一分析物含量可能不是量化的具体数值。3.15 健康保险隐私及责任法案（health insurance portability and accountability act，HIPAA）美国政府 1996 年颁布的、医疗服务行业必须遵守的法案。该法案制定了一系列安全标准，就保健计划、供应商及结算中心如何以电子文件的形式传送、访问和存储受保护的健康信息做出了详细的规定。3.16 聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）简称 PCR 技术，是一种体外扩增特异 DNA 片段的技术，应用该技术可以
14、在短时间内将一个或几个 DNA 拷贝扩增到百万数量级。3.17 临床检验实验室是指对取自人体的各种标本进行生物学、微生物学、免疫学、化学、血液免疫学、血液学、生物物理学、细胞学等检验，并为临床提供医学检验服务的实验室。3.18 灵敏度（sensitivity）测量系统的示值变化除以相应的被测量值变化所得的商。3.19 室内质量控制实验室内进行的用于满足质量要求的操作技术和活动。3.20 室间质量评价室间质量评价是多家实验室分析同一标本，并由外部独立机构收集和反馈实验室上报结果、评价实验室操作的过程，也称能力验证。43.21 脱氧核糖核酸（DNA）核酸的一种，是由特殊序列的脱氧核糖核苷酸单元（d
15、NTP）构成的多聚核苷酸，起携带遗传信息的功能。DNA 为一种双链分子，通过核苷酸碱基对间的氢键维系。DNA 包含的 4 种核苷酸包括：腺嘌呤（A） 、鸟嘌呤（G ） 、胸腺嘧啶（T ）和胞嘧啶（G） 。人类存在两种类型的 DNA：来自染色体的基因组 DNA（gDNA ）和线粒体DNA。3.22 能力验证（proficiency testing，PT）多个标本周期性地发送到实验室进行分析和（或）鉴定，将每一实验室的结果与同组的其他实验室的结果或指定值进行比较，并将比较结果报告给参与的实验室，同室间质量评价。3.23 生物标记物（biomarker）患者标本中所含有的一种特殊的分析物质（如 DN
16、A、RNA 、蛋白质等） ，可用于疾病诊断、判断疾病分期或评价新药或新疗法在目标人群中的安全性和有效性。3.24 微卫星指基因上含有重复的 DNA 短小序列或单核苷酸的区域，每个单元长度在 1-6 bp 之间。根据重复单元的构成与分布，微卫星 DNA 序列可分为 3 种类型：单一型、复合型和间断型。3.25 微卫星不稳定性（microsatellite instability，MSI）是指肿瘤基因组特定的微卫星位点与其对应的非肿瘤基因组相比，因重复单位的缺失或插入而造成的结构性等位基因的大小发生改变，出现新的微卫星等位基因现象。3.26 线性在已知的范围内，某检测提供的结果能够直接与标本的浓度
17、（或量值）成比例关系的能力。3.27 相对定量通过标准曲线法和 CT 值比较法测定目的基因的相对表达量，以比较两个或多个样本中目的基因的表达差异。该方法通常用来检测基因表达量是上调还是下降。3.28 遗传药理学研究机体的基因多态性对药物反应个体差异的影响，是药物基因组学的重要内容。53.29 药物不良反应（adverse drug reaction, ADR）是指上市的合格药品在常规用法、用量情况下出现的，与用药目的无关，并给患者带来痛苦或危害的反应。3.30 药物的反应性包括药物吸收和分布（即药代动力学） 、药物效应（如药物效应动力学） 、药物的疗效及药物不良反应。3.31 药物基因组学研究
18、人类基因组信息与药物反应之间的关系，同时也可以发现药物新靶点和提高临床试验的成功率。3.32 荧光定量 PCR通过应用荧光染料或荧光标记的特异性探针，对聚合酶链反应产物进行标记跟踪，实时监控反应过程，结合相应的软件可以对荧光信号进行分析，实现基因检测的定性和（或）定量分析。3.33 荧光原位杂交（FISH）一种细胞遗传学技术，可以用来对核酸进行检测和定位。荧光标记的核酸探针只与具有高度相似性的核酸杂交，可用于染色体上基因的定位和定量。3.34 杂交两个以上的分子具有相近的化学结构和性质而在适宜的条件下形成杂交体，杂交体中的分子不是来自一个二聚体分子。利用两条不同来源的多核苷酸链之间的互补性而使
19、它们形成杂交体双链被称为核酸杂交。3.35 知情同意（informed consent）患者有权利知晓自己的病情，并可以对医务人员所采取的治疗措施和临床检测项目有决定取舍的权利。3.36 控制品仅用于质量控制目的而不是用于校准分析的标本或溶液。3.37 准确度（accuracy ）是测量结果中系统误差与随机误差的综合，表示测量结果与真值的一致程度。3.38 正确度（trueness）无穷多次重复测量所得量值的平均值与一个参考量值间的一致程度。63.39 精密度（precision）是指在一定条件下进行多次测定时，所得测定结果之间的符合程度，表示测量结果中的随机误差大小的程度。3.40 特异性（
20、specificity）在出现干扰现象（影响量）时，试验或检测程序能够正确地识别或定量确定某一实体物质的能力。4. 药物代谢酶和药物作用靶点基因检测分析前质量保证根据临床检验实验室的条件确定合适的分子诊断项目和恰当的样本处理是确保核酸定性定量检测准确性的关键。标本在检测前必须确保标本的采集、运输和储存符合要求。标本处置不当可能引起核酸降解，导致定量检测结果不准确。4.1 采样前准备1）分子诊断项目的申请与完善药物代谢酶和药物作用靶点基因检测采样前需填写规范的申请单，申请单应包含足够的信息，以识别患者和有资格开具申请单的临床医生。临床医生应根据临床需求合理选择分子诊断项目。个体化用药领域发展迅速
21、，临检实验室应加强与临床医师的沟通，及时指导临床医师选择有价值的诊断项目，帮助医师合理解释检验结果；不断接受正确合理的临床医师的反馈意见，及时了解临床对个体化用药分子检测的需求，优化项目目录。实验室应根据其具体的工作流程，确定质量监测指标，如患者诊断信息完整率、适当临床判断率等，并定期对数据进行回顾性分析，定期对检验申请进行评审。2）患者的正确识别及知情同意患者的正确识别是确保获得正确的临床标本的前提。收集标本的容器上应注明患者的信息，通常应包括姓名、送检医院及科室、住院号等。医护人员在采样前需首先核对确定患者的身份，核实能标示患者的信息。标本收集前应向患者介绍个体化用药基因检测的意义，以得到
22、患者的认同，即知情同意。采样前需告知患者所检测项目的目的、意义、基本过程、项目可能存在的不足如检测结果可能出现与临床用药实际不相符的情况、剩余核酸的去向（包括可能匿名用于科研项目）及保存时间，保护受检者的个人隐私（包括医疗记录和医疗数据）。对实施有创检查的分子诊断项目如穿刺取活检组织，应清楚地告知患者及家属检查可7能遇到的风险和紧急情况下的紧急预案。知情同意书是医方履行如实告知义务的证据，也是患者行使选择权的书面依据。3）送检单的填写与项目的复核标本采集前需填写送检申请单，提供受检者必需的信息。申请单需填写的信息包括：申请的检测项目、标本编号、受检者姓名、性别、出生日期、民族、采样日期及时间、
23、标本来源（组织类型） 、相关临床资料（如身高、体重、疾病诊断、疾病分型分期、合并疾病、用药情况） 、采样单位及科室名称、送检医师姓名等信息。临检实验室应有专业人员根据信息采集表对检测项目的合理性进行审核，必要时可与送检医师讨论。4.2 标本采集临床分子诊断实验室应对各种个体化用药分子诊断临床标本的采集按检测要求建立SOP。标本采集人员应经过系统的培训。采样前应对标本采集容器进行评价，确保容器本身不会干扰测定过程，并保存评估记录。用于药物代谢酶和药物作用靶点基因检测的标本在采集时间上无特殊要求。静脉血液采集之前应按要求对预采血的部位彻底消毒。肿瘤组织中DNA的分析利用常规诊断所用的标本即可，但用
24、于RNA 分析的标本需专门采集，并准备好液氮等速冻所需的材料及设备。标本采集需要在密闭、一次性采样系统中完成，所用的材料如注射器、棉签、拭子等应为一次性使用，以防止污染。无论采集哪种类型的标本，采样时都必须戴手套，以避免标本中病原微生物感染和皮肤脱落细胞对标本的污染。用于药物代谢酶和药物作用靶点基因检测的标本类型有多种，包括全血标本、组织标本（新鲜组织、冰冻组织、石蜡包埋组织、穿刺标本）、口腔拭子、骨髓、胸腹水等。样本采样原则见个体化医学检测质量保证指南。1）全血和骨髓标本全血标本采集到含有适当抗凝剂或添加物的采样管中，添加物根据被测量（DNA 、细胞内 RNA） 、检测项目和采样体积而定。因
25、肝素可抑制 PCR，全血或骨髓标本一般用 EDTA 或枸橼酸盐抗凝。采样前需在采样管或注射器上标注标本信息。全血标本采集外周静脉血 23 mL 并置于采血管中，将采血管轻轻颠倒混匀数次以确保充分抗凝，避免溶血。如检测目的是细胞内 RNA，建议用含 RNA 稳定剂的采样管，或采样后尽快将全血或骨髓加入到 RNA 稳定溶液中。采集干血斑标本时，可向无菌滤纸8上滴加约 50 L 全血，根据需要可连续在数个印圈上滴加标本，于室温自然干燥至少4 小时。干血斑标本采集时不要堆叠血斑，不与其他界面接触，待血斑充分干燥后应放入无菌袋中，避免血斑之间的相互污染，同时加入干燥剂和湿度指示卡，密封包装后运送。2）组
26、织标本当待检测的组织与血液或口腔脱落细胞基因型不一致时，或当组织是待测核酸必须的来源时（如检测肿瘤组织中 mRNA 表达、融合基因、基因扩增或缺失、甲基化水平、微卫星不稳定等） ，需采集组织标本进行检测。可用的组织标本包括新鲜组织、活检组织、石蜡包埋组织和石蜡切片。a) 新鲜组织和活检组织：采样大小取决于组织类型。一般而言，无论是哪种组织类型，在没有大量脂肪细胞侵润的情况下，10 mg 组织标本可提取 DNA 或 RNA 10 g。无菌条件下取米粒大小手术或活检组织（约 25 mg） ；肿瘤组织要求未坏死肿瘤组织比例70。穿刺取实体肿瘤组织时，取得的细胞数与穿刺针的粗细有关，21G 细针每次获
27、得 100 个细胞，19G 细针每次获得150 个细胞，支气管活检每次获得300 个细胞，CT 介导的细针穿刺每次可获得500 个细胞。通常检测时标本中肿瘤细胞的数量需达到 200400 个。在某些情况下，要求同时采集无病变的组织或外周血作为对照（如微卫星不稳定性检测） 。组织块取样后的处理与保存见个体化医学检测质量保证指南 。b) 石蜡包埋组织：推荐用 10中性缓冲甲醛溶液固定组织标本，避免使用含重金属离子的固定液如 Bouin 液等。甲醛介导的 DNA 损伤在固定 3 小时后明显发生，且时间越长，DNA 损伤越严重。因此推荐较小的组织（如活检组织标本）固定 612小时，较大的组织（如手术切
28、除标本）固定 648 小时。甲醛固定的石蜡包埋组织不适于用作 RNA 检测，但在没有其他标本可供选择时，可考虑选择没有污染部分提取的 RNA 用于检测，待测 RNA 序列的长度最好50） 、坏死组织比例C 多态性检测 携带 521C 等位基因的患者慎用辛伐他汀和西立伐他汀，以降低发生肌病的风险，具体可根据 FDA 推荐剂量表（附表 2） 。TPMT 多态性检测 降低低酶活性基因型患者 MP 的用药剂量，杂合子22起始剂量为常规剂量的 3070，携带两个突变等位基因的个体用药剂量为常规用药剂量的 1/10，或1 周 3 次给予常规剂量的药物，或换用其他药物，以避免产生严重的造血系统毒性反应；携带
29、 TPMT活性极高基因型的患者 MP 治疗可能无效。携带TPMT 突变等位基因的儿童患者建议用卡铂而不用顺铂，以避免引起耳毒性。UGT1A1 多态性检测 UGT1A1*28（6/7）和（7/7）基因型个体应用伊立替康时应选用剂量较低的化疗方案，以避免引起严重腹泻；携带 UGT1A1*6 等位基因的患者 4 级中性粒细胞减少症的发生风险增加，应谨慎使用。ACE I/D 多态性 DD 基因型的高血压患者建议选用福辛普利进行降压治疗；DD 基因型的高血压合并左心室肥大和舒张期充盈障碍的患者建议使用依那普利和赖诺普；II基因型患者应用赖诺普利或卡托普利治疗时应注意监测肾功能。ADRB1 多态性检测 G
30、ly389 基因型高血压患者建议不选用美托洛尔降压，或适当增加用药剂量。APOE 多态性检测 基因型为 E2/E2 的高血脂症患者建议选用普伐他汀治疗，以提高降脂疗效。ANKK1 rs1800497 多态性检测 携带 rs1800497A 等位基因的患者应用第二代抗精神病药时静坐不能不良反应的发生风险增加，应注意。错配修复蛋白缺失（dMMR ）检测建议 dMMR 者接受不含 5-FU 的化疗方案。G6PD 基因多态性检测 携带突变等位基因的 G6PD 缺乏患者禁用氯喹、氨苯砜和拉布立酶。HLA-B 位点等位基因检测 携带 HLA-B*1502 等位基因者慎用卡马西平和苯妥英，携带 HLA-B*
31、5801 等位基因者慎用别嘌呤醇，23以免引起 SJS/TEN；携带 HLA-B*5701 等位基因者慎用阿巴卡韦，以免引起药物性肝损害。IFNL3 多态性检测 Rs12979860T 等位基因携带者聚乙二醇干扰素 -2a、聚乙二醇干扰素 -2b 和利巴韦林治疗 HCV 感染的疗效差。微卫星不稳定性（MSI）检测 MSI-H 患者建议不用 5-FU 辅助治疗。PML-RAR 融合基因检测 PML-RAR 融合基因阳性的 APL 患者可用 As2O3 进行治疗。TOP2A 基因异常（基因扩增或基因缺失）检测TOP2A 基因异常的乳腺癌患者建议采用含蒽环类药物的治疗方案。VKORC1 -1639
32、GA 多态性检测 携带-1639A 等位基因的个体应减少华法林的用药剂量，具体可根据华法林剂量计算公式确定华法林的起始用药剂量。ERCC1 mRNA 表达检测 建议 ERCC1 mRNA 低表达的非小细胞肺癌患者选用以铂类为主的化疗方案。RRM1 mRNA 表达检测 建议 RRM1 mRNA 低表达的患者选用吉西他滨为主的化疗方案。3）检测结果的报告流程与发放检测报告通常以纸质报告单形式或以电子版通过网络形式发放。药物代谢酶和靶点基因检测结果报告需要有严谨有效的流程，以确保检验信息的完整、有效、及时、正确、隐私。首先要对检测结果报告进行审核分析，包括审核检测过程的有效性，受检者的基本信息，结果
33、数据分析。审核者应当是主管技师以上的工作人员、本专业实验室负责人、高年资检验人员和临床实验室主任授权人，审核者对检验报告的质量负责。通过审核的检测报告可以报告单形式或通过检测实验室的信息管理系统发放。应建立检测报告单发出和管理制度。明确检测结果报告发放的程序和责任，设定并公示检测结果报告时间，报告时间是指从接受送检标本起，到检测结果发放的时间。应制定个体化用药基因检测数据管理制度，数据中应录入患者信息和检验数据；检测数据的修改必须征得报告结果签发人员同意后，由操作人员进行修改；所有检测报告和原24始记录应当归档保存，实验室信息系统数据至少要拷贝3份并保存在不同的地方，以便日后核对。一般检验报告
34、单和检测结果数据至少保存两年；室内质控和参加室间质量评价的记录和质控信息至少保存两年；仪器状态和维修记录要保留到仪器使用终身。检测结果的查询通常可根据患者姓名、标本编号、检测项目和送检日期进行查询。检测报告发放后收到检测报告投诉需记录并统计，分析原因，避免二次错误。4）检测后咨询服务个体化医学分子诊断实验室应配备相关资质、取得国家卫生计生委个体化医学检测培训基地培训合格证的个体化用药咨询人员，对检测项目提供咨询服务，负责对检测报告在临床上出现的各种情况进行解释和检后服务。6.2 检测后样本的保存和处理样本完成检测后要进行一定时间（尽可能长期）的保留，以备必要时复查。标本的保存也可为科研工作的开
35、展和回顾性调查提供条件。完成检测后剩余的 DNA 样本至少在-80 保存 2 年。DNA 在-70的环境下可保存至少 7 年。纯度不高的 DNA 样品建议保存在-20 或更低的温度中，以确保 DNA 的完整性。在不影响受检者个人隐私及利益的前提条件下，DNA 及临床资料也可匿名用于科学研究，但需在知情同意书中明确。废弃的样本应作为生物危险品处置。7.药物代谢酶和药物作用靶点基因检测的质量保证药物代谢酶和药物作用靶点基因检测的质量控制与保证是个体化医学检测质量保证的核心内容，是个体化用药基因诊断规范化和标准化的首要前提。因此临床检验项目的计划和准备，试验性能确认/验证以及检验全过程都需要建立有效
36、的质量控制体系。7.1 检测确认和特征描述在将检测用于临床工作之前应该对方法进行分析确认和临床确认。实验室应确定待检测的靶核酸、确定要使用的试验方法和建立试验性能确认/验证的计划和程序。确认/验明程序应该包括：检验目的；靶基因，基因序列和突变；预期患者人群；被比较的试验方法，或要使用的方法；使用的样本类型；要确定的分析性能特征；参考材料的来源；如何分析性能规范，如何规定试验的局限性；出现问题时的纠正措施。7.2 可操作性的 SOP 编写有可操作性的标准操作规程（SOP）是个体化医学检测实验室质量管理的灵魂。25SOP 源于仪器和试剂说明书、一些标准文件和实验室实验工作经验的积累，应包括试剂准备
37、、标本采集、标本接收与预处理、核酸提取、测定方法、结果分析和报告、仪器操作、实验室安全措施等临床检验的各个环节。SOP 的编写应注意通俗易懂、注重细节、清晰明了、图文并茂。实验室工作人员应严格遵循 SOP 中的步骤要求进行操作，当发现 SOP 有“故障”时，经过技术研发小组的工作人员讨论、实验验证后及时修改。7.3 质控品与室内质控7.3.1 质控品所有药物代谢酶和药物作用靶点基因检测都需要选择一定的质控样本进行质控分析。质控样本的选择视检测项目而定，如药物代谢酶的SNP检测的阴性质控样本可以是无相关突变的同类样本和不含任何核酸的水样本，阳性质控样本可以为以前检测过的特定基因突变已知的样本或体
38、外构建的已含特定突变质粒的细胞株。常用的做法为：在每次检测时同时设立试剂对照、阴性质控、阳性质控、弱阳性质控，且这些质控样本与待检样本同时进行检测，每隔一定数量的临床标本插入一份质控样本。当同时检测多个变异位点时，可根据实验室的条件设立针对23个位点的阴性或阳性对照，但不同批次间要注意更换阴性和阳性对照样品。质控样本的质量与实验结果的可信度密切相关。理想的室内质控样本应该具有以下特点：基质一致，即与待测样本具有相同的基质；稳定性好，在适当的储存条件下能保持较好的稳定性；检测结果应该是确定的，且越接近试验的决定性水平越好；具有安全性，不得有生物传染危险性；单批可大量获得，以便于长期连续监测。7.
39、3.2 室内质量控制的方法应用统计学原理或非统计学方法判断测定批次的结果是失控还是在控，是室内质控的核心。室内质量控制的方法包括统计学质量控制和非统计学质量控制两大类。一般而言，定性检测（如基因分型）采用非统计学质量控制，而定量检测如基因表达水平检测、基因甲基化水平测定、以及实验室“污染”所致的假阳性定量检测一般采用统计学质控。统计学质控主要从不精密度和偏离度两个方面确定检测程序或分析方法稳定性的性能特点，其具体做法是在常规检测临床标本时，除阴性质控外，还要对连续的一个浓度梯度的阳性质控样本进行检测，分析判断质控样本的测定结果是否偏出所用方法的测定范围，进而决定常规临床测定标本结果的有效性。统
40、计学质量控制的26前提是制定在最佳条件和常规条件下实验室变异的基线。在进行不精密度测定时，一般至少对20个不同的样本连续检测不少于20天，每天2次。偏离度的测定可采用基准线法、与参考物质的检测结果比较、与其他平行单位的检测结果比较、与其他检测方法的检测结果比较等多种方法。部分定性检测方法因可计算出样本中突变等位基因的比例，也可应用统计学质控方法进行质控分析。统计学质量控制方法主要包括两大类：阳性样本测定重复性统计质控方法和假阳性的统计质控方法。阳性质控品测定重复性统计能较准确的反映实验室仪器、试剂、实验员操作的稳定性，也是实验室实时监控检测结果是否可信的重要手段，其主要统计控制方法包括基线测定
41、、Levey-Jennings质控图方法、Westgard多规则质控方法、累积和（CUSUM）质控方法及 “即刻法”质控方法。假阳性的统计质控方法包括根据日常患者结果阳性率的Levey-Jennings质控图和直接概率计算法两种，其中Levey-Jennings质控图法是目前临床检验中应用较为广泛的一种方法，适合于质控样本多次重复、检测结果可用数值表示且呈正态分布的情况。Levey-Jennings质控图法的具体做法是：样本处理（核酸提取）时加入流程阴参，所有步骤与待测样本一致；加模板时，各检测位点均应设置阴性对照（即以流程阴参为模板，用于检测是否发生“污染” ）与一定比例的突变型/野生型阳性
42、标准品 23。PCR扩增时注意前后批次阴参和阳参的孔槽摆放位置的随机性。所有阴参、阳参的检测结果应符合预期值，记录各个阳性质控品PCR扩增产物检测结果。用Levey-Jennings质控图进行统计分析，根据质控规则判断检测结果是否在控。质控规则如下：12S： 1个质控测定值超出X2S控制线，预警。13S： 1个质控测定值超出X3S控制线，失控。22S：同一批次2个连续的质控测定值或不同批次的2个质控测定值同时超出X+2S或X-2S 控制线，失控。R4S：同一批测定中，2个不同浓度质控物的测定值之间的差值超出4S控制线，失控。41S:4个连续的质控测定值同时超出X+1S或X-1S控制线，失控。7T： 7个连续的质控测定值呈现出向上或向下的趋势，失控。10X：10个连续的质控测定值同时处于均值（ X）的同一侧，失控。只有当使用所有质控规则判断确定测定值在控时的检测结果方为可信结果，而只
