1、实验五 微生物大小和数量测定、霉菌的形态观察,学习使用镜台测微尺和目镜测微尺在显微镜下测定微生物大小的方法。,实验(一) 微生物大小的测定,一、目的要求,对于病毒、细菌、放线菌、真菌和原生动物等不同类型的微生物来说，它们的大小存在很大的差异。 在同一类型中不同种类的微生物，或同一种类中不同时期的微生物个体，它们的大小也存在很大的差异。,二、实验原理,镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻片，一般是将l mm等分为100格，每格长0.01 mm(即10 um) ，用于校正目镜测微尺每格的相对长度。目镜测微尺是一块中央有精确的等分刻度的圆形小玻片，置于接目镜中的隔板上。目镜测微尺每小格所代表的实
2、际长度不一样，测量前，必须先用镜台测微尺进行校正。,目镜测微尺,镜台测微尺,利用镜台测微尺测定目镜测微尺的每格绝对值 目镜测微尺测定微生物大小,三、实验器材,1、菌种：酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae ） 2、器材：显微镜、镜台测微尺、目镜测微尺,三、实验步骤,1、目镜测微尺的校正镜台测微尺有刻度的一面朝上，置显微镜载物台上，先在低倍镜下，将镜台测微尺有刻度的部分移至视野中央。转动目镜使目镜测微尺的刻度与镜台测微尺的刻度平行。利用移动器移动镜台测微尺，使两尺在某一区域内两线完全重合，分别数出两重合线之间镜台微尺和目镜微尺所占的格数。计算10x、40x 、油镜下目镜测微
3、尺的校正值。 目镜测微尺每格长度（um）两重合线间镜台测微尺格数10/两重合线间目镜测微尺格数 2、细胞大小的测量酵母菌悬液滴在载玻片上，盖上盖玻片，置显微镜载物台上。用目镜测微尺测量细胞宽和长。,三、实验结果,计算出目镜测微尺校正结果以及酵母菌大小测定结果,四、思考题 p51 2(2),1、在不改变目镜和目镜测微尺，而改用不同放大倍数的物镜来测定同一细菌的大小时，其测定结果是否相同？为什么？,1、明确血细胞计数板计数的原理。 2、掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。,实验(二) 微生物数量的测定,一、目的要求,二、实验原理,细胞总数的测定（包括活的和已丧失活力的细菌）1、比浊法2、染色
4、涂片计数法3、显微直接计数法,1、比浊法,比浊法的原理是利用细菌细胞在溶液中数量越多，浊度越大，在光电比色计中测定时所吸收的光线越多。,2、染色涂片计数法,取0.01ml的菌悬液放在1cm2 的玻片上，让其干燥，然后固定染色，再置显微镜下计数每一视野中的菌数，算出视野面积，按下列公式即可求出每ml原菌液中的含菌数。 每ml原菌液中的含菌数=视野中的平均菌数1cm2/视野面积100稀释倍数,3、显微直接计数法,显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上(又称计菌器)，于显微镜下直接计数的一种方法。 显微镜直接计数法的优点是直观、快速。缺点是所测得的结果通常
5、是死菌体和活菌体的总和。目前已有一些方法可以克服这一缺点，如结合活菌染色，微室培养等方法来达到只计数活菌体的目的。,血细胞计数板由四条槽构成三个平台；中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分为九个大方格，中间的大方格即为计数室。计数室是由一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格；共计400个小方格。每一个大方格的面积为1 mm2，盖玻片与计数区之间的高度为0.1 mm，所以计数室的容积为0.1 mm3 。 计数时，通常数五个中方格的总菌数，然后求得每个中方格的平均值，以及大方格中的总菌数，再换算成1 ml菌液中的总菌数。,个计数室mm
6、 包含个中方格,个中方格个小方格,三、实验器材,1、菌种：酿酒酵母2、器材：显微镜、血球计数板,三、实验步骤,1、在10和40下找到计数室。2、盖上盖玻片将摇匀的酿酒酵母菌（或大肠杆菌）悬液由盖玻片边缘滴一小滴，让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室。如滴入过多，溢出并流入两侧槽内，使盖玻片浮起，体积改变，会影响计数结果，需用滤纸把多余的溶液吸出，以槽内没有溶液为宜。如滴入溶液过少，经多次充液，易产生气泡，应洗净计数室，干燥后重做。3、静止5 min（为什么），先用低倍镜将计数室移至视野中央。4、在高倍下计数：每个计数室选5个中格(4个角和中央的一个中格)中的菌体进行计数。对于分布在刻线上的
7、细菌，依照“数上不数下，数左不数右“的原则进行计数。,三、实验结果,1、统计每个计数室（五个中格）的细胞数量,四、思考题,2、计算酵母菌（以及大肠杆菌）悬液的浓度。稀释倍数为1,1、根据你的体会，说明用血细胞计数板计数的误差主要来自哪些方面？应如何尽量减少误差、力求准确？,一、实验目的,观察霉菌的形态结构特征学习掌握霉菌染色的基本方法,实验（三）霉菌的形态观察,霉菌：凡在营养基质上形成绒毛状、棉絮状或蜘蛛网形丝状菌体的真菌，统称为霉菌。霉菌包括分类学上许多不同纲或类的真菌，它们分别属于藻状菌纲、子囊菌纲、担子菌纲和半知菌类。霉菌菌丝分为有隔菌丝和无隔菌丝两类.,二、实验原理,黑曲霉,属于半知菌
8、亚门, 菌丝有隔,细胞多核；部分气生菌丝细胞形成特化的厚壁、膨大的足细胞，由足细胞的中间稍呈垂直地向上延长，形成分生孢子梗。,青霉,属于半知菌亚门,分生孢子梗基部无足细胞，孢子梗顶端不膨大成囊，而是多次分枝形成扫帚状，小梗末端形成分生孢子。,根霉,横向生长的菌丝产生假根，附着在基质上。 菌丝无隔、无性生殖产生孢囊孢子，有性生殖产生接合孢子。,三、实验材料,1. 黑曲霉、青霉示范片。,主要观察黑曲霉菌丝分生孢子着生情况（辨认顶囊、分生孢子梗、足细胞和分生孢子）,四、实验步骤,主要观察青霉菌丝分生孢子着生情况（辨认分生孢子梗和分生孢子）,五、实验结果,绘制青霉（40x）、黑曲霉（40x）的形态，注明各部分名称。,六、思考题,1.你主要根据哪些形态特征来区分上述霉菌?,
