1、清淋片检验方法确认方案 EL-YZ54003-01 X00，1/18清淋片检验方法确认方案文件编码：EL-YZ54003-01文件审定 部门 签名 日期起草人审核人审核人审核人审核人审核人批准人四川诺迪康威光制药有限公司清淋片检验方法确认方案 EL-YZ54003-01 X00，2/18目 录1. 概述.32. 目的.33. 适用范围.34. 确认小组人员名单及职责.45. 确认条件.46. 确认时间计划.47. 确认要求及标准.28. 确认实施.79. 确认结果评定与结论710. 拟定再确认周期.711. 附件.7清淋片检验方法确认方案 EL-YZ54003-01 X00，3/181. 概述
2、：清淋片质量标准为已验证的法定标准，鉴别（1）方法为 HPLC 法，其他项目为实验室日常测试步骤，含量测定方法为 HPLC 法。根据 2010 年版药品质量管理规范的要求，需要对鉴别（1）和含量测定检验方法进行确认，包括专属性、精密度、准确度三个方面。由于鉴别（1）只是采用的含量测定的图谱进行栀子苷保留时间比对，故只需对含量测定检验方法进行确认。2. 目的： 确认清淋片含量测定（含鉴别 1）检验方法在我公司质量控制实验室的适用性。3. 适用范围：清淋片含量测定（含鉴别 1）检验方法。4. 职责姓 名 部 门 小组职务 职责方延刚 质量管理部 组长负责确认的组织协调工作，以保证本方案规定的确认项
3、目顺利实施；负责确认数据及结果的审核；负责确认报告的起草；负责确认周期的确认乐元保 工程部 组员 负责组织试验所需器具的校验。张慧 质量管理部 组员 负责确认现场监管并协调确认工作；负责偏差、变更的审核，杨燕 质量管理部 组员负责起草确认方案；负责检验方法确认方案的实施；负责协助调查和处理确认过程中的偏差；参与检验方法确认方案的实施；制备阴性样品。吴娅玲 质量管理部 组员负责检验方法确认方案的实施。负责协助调查和处理确认过程中的偏差。参与检验方法确认方案的实施。制备阴性样品。唐芹 质量管理部 组员 负责检验方法确认方案的实施。负责协助调查和处理确认过程中的偏差。清淋片检验方法确认方案 EL-Y
4、Z54003-01 X00，4/18参与检验方法确认方案的实施。制备阴性样品。5. 条件5.1. 检验操作规程齐全（记录见附件 1）5.2. 设备相关标准操作规程齐全（记录见附件 2）5.3. 检验、检测仪器均已校验（记录见附件 3）5.4. 风险识别5.4.1. 本次风险评估根据公司质量风险管理规程要求进行。项目 风险源 风险发生的失败模式 风险可能导致的后果1 文件与人 员培训 无操作指导文件，操作 人员未经培训 仪器操作失当，出现操作事故2 环境 环境温湿度不符合要求 影响仪器正常运行3 仪器状态仪器运行不正常；功能障碍、电源不符合要求损坏仪器4 控制系统电脑操作系统版本、内存、硬盘、网
5、络适配器、光驱不符合要求工作站软件安装不起和运行不正常5 试剂、试液、样品 不符合要求 导致确认失败或结果不准确。5.4.2. 通过对风险的识别，针对关键风险控制点进行控制，以降低风险至可接受标准。5.4.3. 采取控制措施后风险再评估记录（记录见附件 4）5.4.4. 确认小组人员培训及考核记录（记录见附件 5）6. 确认时间计划：从 2014 年 3 月 30 日开始至 2014 年 5 月 15 日完成。7. 确认要求及标准7.1. 色谱条件系统适用性试验(在专属性试验时一并进行)：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水- （1189）为流动相；检测波长为 238nm。理论板数按栀子
6、清淋片检验方法确认方案 EL-YZ54003-01 X00，5/18苷峰计算应不低于 4000，分离度大于 1.5。7.2. 专属性 阴性样品溶液在与栀子苷对照品溶液相同的保留时间处色谱峰峰面积小于对照品峰面积的 5%。7.3. 精密度 RSD 应不得超过 2.0%7.4. 准确度 栀子苷的加样回收率95.0%，回收率的 RSD2.0%。 8. 确认实施（记录见附件 6）8.1. 材料和分析方法8.1.1. 供试品：品名：清淋片 ；批次：1 批 ；贮藏条件：温度 18-26，湿度 45-65%。8.1.2. 对照品名称：栀子苷 生产商：中国食品药品检定研究院 贮藏条件：室温。8.1.3. 阴性
7、对照物 按清淋片质量标准制法项自制（缺栀子）的阴性样品 1 个。8.2. 分析方法8.2.1. 试剂和仪器8.2.1.1. 试剂：乙腈:色谱纯；甲醇：分析纯；纯化水；8.2.1.2. 仪器：万分之一电子天平；十万分之一电子天平；超声处理器；高效液相色谱仪 。8.2.2. 色谱条件:波长: 238nm；流动相：乙腈-水（11:89） ；流速： 1.0ml/min；柱温：室温；进样量：10ul；色谱柱型号：C18 5u 4.6*250mm。8.2.3. 供试品溶液的制备 取本品，研细，取 0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 50ml，称定重量，超声处理（220W,50kHz）20 分
8、钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。8.2.4. 阴性样品溶液的制备 取阴性样品（缺栀子）研细，取 0.1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 50ml，称定重量，超声处理（220W,50kHz）20 分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。8.2.5. 对照品溶液的制备 取栀子苷对照品适量，精密称定，加甲醇使溶解制成每ml 含 30g 的溶液，即得。8.3. 确认项目及方法8.3.1. 专属性8.3.1.1. 色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水-（1189）为流动相；检测波长为 23
9、8nm。理论板数按栀子苷峰计算应不低于4000，分离度大于 1.5。8.3.1.2. 测定 分别精密吸取对照品溶液（8.2.5.）与阴性样品溶液(8.2.4.制备)各10l，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图。8.3.1.3. 确认合格标准 阴性样品溶液在与栀子苷对照品溶液相同的保留时间处色清淋片检验方法确认方案 EL-YZ54003-01 X00，6/18谱峰峰面积小于对照品峰面积的 5%。8.3.1.4. 结果分析与结论见下表：名 称 质量管理部清淋片检验方法确认小结（专属性）偏 差 无 有，执行偏差管理规程规定，相关记录附报告后。评 价 与建 议 项目组长 ： 日期：8.3.2. 精密度8
10、.3.2.1. 重复性 8.3.2.1.1. 取同一浓度的对照品溶液（8.2.5.制备）及供试品溶液（8.2.3.制备）分别连续进样 6 针（10ul） ，记录色谱图。8.3.2.1.2. 确认合格标准 6 针对照品溶液、供试品溶液峰面积的 RSD 应不得超过 2.0%。8.3.2.1.3. 结果分析与结论见下表：名 称 质量管理部清淋片检验方法确认小结（重复性）偏 差 无 有，执行偏差管理规程规定，相关记录附报告后。评 价 与建 议 项目组长 ： 日期：8.3.2.2. 中间精密度 8.3.2.2.1. 在不同的日期和不同的仪器，不同检验员（3 人）按 9.2.3.的方法重新制备样液，分别计
11、算含量。8.3.2.2.2. 确认合格标准 每人 RSD 应不得超过 2.0%，3 人 RSD 应不得超过2.0%。 8.3.2.2.3. 结果分析与结论见下表：名 称 质量管理部清淋片检验方法确认小结（中间精密度）偏 差 无 有，执行偏差管理规程规定，相关记录附报告后。清淋片检验方法确认方案 EL-YZ54003-01 X00，7/18评 价 与建 议 项目组长 ： 日期：8.3.3. 准确度8.3.3.1. 精密称取栀子苷对照品适量，加甲醇制成约 30 g/ml 的溶液。取本品适量，研细，取 0.05g，精密称定 6 份，分别置具塞锥形瓶中，加入上述栀子苷对照品溶液 1520ml，精密加入
12、甲醇 50ml，称定重量，超声处理（功率 220W，频率 50kHz）20 分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。8.3.3.2. 精密吸取 6 份样液各 10ul，注入液相色谱仪，测定，计算回收率。计算公式：测得值-样品中的量回收率（%）= 加入的对照品量 100%8.3.3.3. 确认合格标准栀子苷的加样回收率95.0%，回收率的 RSD2.0%。8.3.3.4. 结果分析与结论见下表：名 称 质量管理部清淋片检验方法确认小结（准确度）偏 差 无 有，执行偏差管理规程规定，相关记录附报告后。评 价 与建 议 项目组长 ： 日期：9. 确认结论与评价确认小
13、组组长： 日期：10. 拟定确认周期根据确认情况，经确认小组讨论，拟定再确认周期为 ，报确认小组审核。清淋片检验方法确认方案 EL-YZ54003-01 X00，8/18一般一年一次，检验方法发生改变需进行再确认。11. 附件附件 1 检验操作规程清单附件 2 仪器操作规程清单附件 3 相关检测仪器校验确认表附件 4 质量风险评估表附件 5 培训表附件 6 确认记录清淋片检验方法确认方案 EL-YZ54003-01 X00，9/18附件 1 检验操作规程清单文件/资料名称 编 号 存放地点确认结论： 执行人： 复核人： 确认小组：年 月 日 年 月 日 年 月 日清淋片检验方法确认方案 EL-
14、YZ54003-01 X00，10/18附件 2仪器操作规程清单文件/资料名称 编 号 存放地点确认结论： 执行人： 复核人： 确认小组：年 月 日 年 月 日 年 月 日清淋片检验方法确认方案 EL-YZ54003-01 X00，11/18附件 3相关检测仪器效验确认表序号 名称 型号 效验日期 有限期至确认结论清淋片检验方法确认方案 EL-YZ54003-01 X00，12/18执行人年 月 日复核人年 月 日确认小组年 月 日清淋片检验方法确认方案 EL-YZ54003-01 X00，13/18附件 4风险评估表实施后预判风险编号 过程步骤可能的失败/失效结果 原因 S P D起始RPN
15、起始风险水平 控制措施 验证/确认活动 S P D RPN 风险水平1 文件与人 员培训仪器操作失当，出现操作事故无操作指导文件，操作人员未经培训5 4 1 20 中经确认检验操作规程正确无误、仪器规程合理实用，并已对相关人员进行培训2 环境 影响仪器正常运行 环境温湿度不符合要求 5 4 1 20中调节环境的温湿度度在规定范围内3 仪器状态 损坏仪器仪器运行不正常；功能障碍、电源不符合要求5 4 1 20中维修仪器，采用合适电源4 控制系统工作站软件安装不起和运行不正常电脑操作系统版本、内存、硬盘、网络适配器、光驱不符合要求5 4 1 20中采用符合要求的电脑操作系统版本、内存、硬盘、网络适
16、配器、光驱5 试剂、试液、样品导致确认失败或结果不准确不符合要求 5 4 2 40 高 重新选用清淋片检验方法确认方案 EL-YZ54003-01 X00，14/19附件 5培 训 表日 期：培 训 者： 培训地点：培训题目：培训时间： 培训人数： 人受 训 人 签 字姓名 签名 考核结果 姓名 签名 考核结果考核方式 考核人备注：清淋片检验方法确认方案 EL-YZ54003-01 X00，15/19附件 6 . 清淋片检验方法确认记录检验员： 检验日期： 复核员： 复核日期： 审 核 人： 审核日期： 四川诺迪康威光制药有限公司清淋片检验方法确认方案 EL-YZ54003-01 X00，16
17、/191. 材料1.1. 供试品：品名：清淋片 ；批号： ；贮藏条件：室温。1.2. 对照品：名称：栀子苷 ；批号： ；生产商：中国食品药品检定研究院 贮藏条件：室温。1.3. 阴性对照物制备：按清淋片质量标准制法项自制（缺栀子）的阴性样品 1 个。2. 分析方法2.1. 试剂和仪器2.1.1. 试剂：乙腈:色谱纯；甲醇：分析纯；纯化水；2.1.2. 仪器：BS210S 电子天平； CPA225D 电子天平；KQ520B 超声处理器；高效液相色谱仪（Waters2487 型，安捷伦 1200 型；13201 型）2.2. 色谱条件:波长: 238nm；流动相：乙腈-水（11:89） ；流速：1
18、.0ml/min；柱温：室温；进样量：10ul；色谱柱型号：C18 5u 4.6*250mm。2.3. 供试品溶液的制备 取本品，研细，取（ ）g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 50ml，称定重量（ ） ，超声处理（ 220W,50kHz）20 分钟，放冷，再称定重量（ ） ，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。2.4. 阴性样品溶液的制备 取阴性样品（缺栀子）研细，取（ ）g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 50ml，称定重量，超声处理（220W,50kHz）20 分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。2.5. 对照品溶液的
19、制备 取栀子苷对照品（ ） ，精密称定，加甲醇使溶解制成每 ml 含（ ）g 的溶液，即得。3. 确认项目及方法3.1. 专属性3.1.1. 色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水（1189）为流动相；检测波长为 238nm。理论板数按栀子苷峰计算为（ ） ，分离度为（ ） 。见图谱（ ）3.1.2. 测定 分别精密吸取对照品溶液（2.5.制备）与阴性样品溶液(2.4.制备)各20l，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图。3.1.3. 确认合格标准 阴性样品溶液在与栀子苷对照品溶液相同的保留时间处色谱峰峰面积小于对照品峰面积的 5%。3.1.4. 检验结果 阴性样品溶液
20、在与栀子苷对照品溶液相同的保留时间处色谱峰峰面积（ ）对照品峰面积的 5%。结论：检验员： 日期：清淋片检验方法确认方案 EL-YZ54003-01 X00，17/19复核员： 日期：3.2. 精密度3.2.1. 重复性 取同一浓度的对照品溶液（2.5.制备）及供试品溶液（2.3.制备）分别连续进样 6 针（10ul） ，记录色谱图。3.2.1.1. 确认合格标准 6 针对照品溶液、供试品溶液峰面积的 RSD 应不得超过2.0%。3.2.1.2. 检验结果如下表：1# 2# 3# 4# 5# 6# 平均值 RSD栀子苷对照品供试品结论：检验员： 日期：复核员： 日期：3.2.2. 中间精密度
21、在不同的日期和不同的仪器，不同检验员（3 人）按 2.3.的方法重新制备样液，分别计算含量，3.2.2.1. 确认合格标准 每人 RSD 应不得超过 2.0%，3 人 RSD 应不得超过 2.0%。3.2.2.2. 检验结果如下：3.2.2.2.1. 检验员: 检验日期： 仪器：1#称样量： 2#称样量：对照品浓度栀子苷对照品峰面积1#供试品峰面积2#供试品峰面积1#含量2#含量均值3.2.2.2.2. 检验员: 检验日期： 仪器：1#称样量： 2#称样量：对照品浓度清淋片检验方法确认方案 EL-YZ54003-01 X00，18/19栀子苷对照品峰面积1#供试品峰面积2#供试品峰面积1#含量
22、2#含量均值3.2.2.2.3. 检验员: 检验日期： 仪器：1#称样量： 2#称样量：对照品浓度栀子苷对照品峰面积1#供试品峰面积2#供试品峰面积1#含量2#含量均值三者均值： RSD:结论：复核员： 日期：3.3. 准确度 精密称取栀子苷对照品适量，加甲醇制成 g/ml 的溶液。取本品适量，研细，取 0.05g，精密称定 6 份，1# 2# 3# 4# 5# 6# 分别置具塞锥形瓶中，加入上述栀子苷对照品溶液 ml，精密加甲醇50ml，称定重量，1# 2# 3# 4# 5# 6# 超声处理（功率 220W，频率 50kHz）20 分钟，放冷，再称定重量 1# 2# 3# 4# 5# 6#，
23、用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，离心，取上清液，即得。精密吸取 6 份样液各 10ul，注入液相色谱仪，测定，计算回收率。清淋片检验方法确认方案 EL-YZ54003-01 X00，19/19计算公式：测得值-样品中的量回收率（%）= 加入的对照品量 100%3.3.1. 确认合格标准栀子苷的加样回收率95.0%，回收率的 RSD2.0%3.3.2. 检验结果如下：栀子苷对照品浓度： 栀子苷对照品峰面积：供试品栀子苷峰面积表1# 2# 3# 4# 5# 6#供试品栀子苷峰面积栀子苷加样回收实验结果表NO. 样品含量（ug）加入量（ug）测得量（ug）回收率（%）平均值 RSD1#2#3#4#5#6#结论：检验员： 日期：复核员： 日期：总结论：
