1、 感受态细胞的制备：1.以 1:100 的比例吸取过夜菌液（ 250ul）加入 25ml LB 液体培养基中，37，200r/min 振荡培养 2-3h 至 OD600 达到 0.5 左右（OD600 范围 0.4-0.6） 。2.将 25ml 菌液移至预冷的 50ml 聚丙烯离心管中，在冰上放置 30min，使培养物冷却到0。3.于 4，以 4000rpm 离心 10min，回收细胞。4.倒出培养液，将管倒置 1min（于滤纸/ 吸水纸上） ，使最后残留的痕量培养液流尽。5.每 50ml 菌液用 10ml 预冷的 0.1mol/L 的 CaCl2，重悬每份沉淀，放置于冰浴上 30min。6.
2、于 4，以 4000rpm 离心 10min，回收细胞。7.倒出培养液，将管倒置 1min（于滤纸/ 吸水纸上） ，使最后残留的痕量培养液流尽。8.每 50ml 初始培养物用 2ml 用冰预冷的 0.1mol/L 的 CaCl2（含 15%甘油）重悬每份细胞沉淀。9.在冰上将细胞分装成小份，100ul/份，防御-70 冻存。10.如果当天要用，最好将制好的感受态细胞在 4放置 4h 后再用，效果较好。制备好的感受态细胞在 4放置 24-48h 内使用，不影响效果。感受态细胞制备流程图：过夜菌 250ul 加入 25ml LB 液体培养基 37，200r/min 振荡培养 2-3h OD600 测 达 0.5 左右 转移至 50ml 聚丙烯离心管 冰上放置 30min 培养物到 04，4000rpm ，离心 10min 回收细胞 弃培养液 倒置放置 1min 加入5ml 0.1mol/LCaCl2 悬浮细胞沉淀，冰上放 30min 4，4000rpm ，离心 10min 回收细胞 弃培养液 倒置放置 1min 加入 1ml 预冷 0.1mol/LCaCl2（含 15%甘油） 悬浮细 胞沉淀 冰上分装，10ul/份 70冻存（当天实验 4放置 4h，最多可放置48h）
