1、药物分析上半部分重点内容回顾1. 绪论开展药物分析的目的是为了药品的安全、有效、质量可控2. 第一章、药品质量研究的内容与药典概况中国药典一部、二部、三部收载品种的情况：药典一部：收载药材和饮片、植物油脂和提取物、成方制剂和单味制剂等，品种共计2165种，包括439个饮片标准；药典二部：收载化学药品、抗生素、生化药品、放射性药品以及药用辅料等，品种共计2271种；药典三部：收载生物制品，品种共计131种。载制剂通则、通用检测方法和指导原则在药典附录部分收载制订药品质量标准的原则药品检验基本程序：取样(检品收检)、检验、留样、报告。取样（科学、真实、代表）检验（依据质量标准）记录（真实、完整、简
2、明、具体）报告（结论明确）3. 第二章 药物的鉴别试验鉴别试验的目的和内涵：目的：根据药物的分子结构特征，采用物理、化学、或生物学方法，判断(鉴别)药物真伪。适用性：仅用于证实贮藏在有标签容器中的药物是否为其所标示的药物，并非对未知物化学结构的确证鉴定。要求：方法专属，每个品种一般23项不同类型的鉴别试验。紫外光谱鉴别法在药物鉴别中应用的类型4. 第三章 药物的杂质检查 重点内容一般杂质和特殊杂质的区别：一般杂质-多种药物中普遍存在；特殊杂质-特定药物在生产、贮存过程中引入的杂质。杂质限量的计算：杂质限量(%)=杂质最大允许量/供试品量*100%=标准溶液的浓度*体积/供试品量*100%，即
3、L(%)=C*V/S*100%。参见 P42 示例三。热分析方法及其在药物分析中的应用范围：干燥失重系指药品在规定的条件下，经干燥后所减失的量，以百分率表示。药典规定供试品连续两次干燥或炽灼后称重的差异在0.3mg 一下即达到恒重。减压干燥法与恒温减压干燥法适用于熔点低或受热分解的供试品。干燥剂干燥法常用干燥剂有硅胶、硫酸和五氧化二磷等。热分析法指在程序控制温度下测量物质的物理化学性质与温度关系的一类技术，常用有热重分析 TGA、差热分析和差示扫描热分析。干燥失重测定法主要检查药物中的水分及其他挥发性物质。恒重-两次称量差不超过 0.3mg。常压恒温干燥法：除另有规定外，在 105干燥至恒重，
4、干燥失重=（称量瓶与加入样品重-恒重后称量瓶与样品重）/样品重*100%减压干燥法与恒温减压干燥法：适用于熔点低或受热分解的供试品。干燥剂干燥法：适用于受热分解或易升华的供试品。常用干燥剂：硅胶、硫酸、和五氧化二磷等。热分析法：在程序控制温度下测量物质的理化性质与温度关系的一类技术。热重分析、差热分析、差示扫描热分析。差热分析(DTA )：是在程序控制温度下，测量试样与参比物（一种在测量温度范围内不发生任何热效应的物质）之间的温度差与温度T 关系的一种技术。氯化物、硫酸盐、重金属、砷盐检查的原理和操作条件氯化物的检查Cl- + Ag+ AgCl ( 白色)原理：药物中的微量氯化物在硝酸酸性条件
5、下与硝酸银反应，生成氯化银胶体微粒而显白色浑浊，与一定量的标准氯化钠溶液在相同条件下产生的氯化银浑浊程度比较，判定供试品中的氯化物是否符合限量规定。方法：样品溶解/标准氯化钠溶液(10g Cl/ml)，50mL 纳氏比色管，+稀 HNO310mL +水至 40mL +AgNO3 试液 1.0mL +水至 50mL ,暗处放置 5min，比较。（氯化物浓度以 50mL中含 5080g 的 Cl 为宜。）去除颜色干扰：内消色法（倍量法）；外消色法：如 KMnO4 中氧化物的检查，可先和乙醇适量还原后再依法检查。注意事项：（1）比浊方法：同置于黑色背景上，自上向下观察（2）平行操作原则（3 ）若供试
6、品有颜色，需经处理后方可检查。硫酸盐的检查原理及注意事项：微量的硫酸盐在稀盐酸下与氯化钡反应，生成硫酸钡微粒显白色浑浊，通过与一定量标准硫酸钾(100gSO4/ml)在相同条件下产生的浑浊程度比较，判定是否符合限量规定。加盐酸的作用：防止碳酸钡或磷酸钡等沉淀生成，影响比浊。供试溶液如带颜色，可采用内消色法。重金属检查法以铅的限量表示重金属限度。第一法：硫代乙酰胺法 适用于溶于水、稀酸和乙醇的药物。CH3CSNH2 + H2OCH 3CONH2 + H2SPb2+ + H2S (pH3.5)PbS + 2H+原理：硫代乙酰胺在弱酸性条件下水解，产生硫化氢，与重金属离子生成黄色到棕黑色的硫化物混悬
7、液，与一定量标准铅溶液经同法处理后所呈颜色比较，判定供试品中重金属是否符合限量规定。方法：样品按规定法制成供试液 25mL/标准铅溶液(10g Pb/ml)+醋酸盐缓冲液(pH3.5)2mL，加水至 25mL， 25mL 纳氏比色管，+ 硫代乙酰胺试液 2mL，摇匀，放置，比较。注意事项：供试品若有色，在加硫代乙酰胺试液前在对照溶液管中滴加少量稀焦糖溶液或其他无干扰的有色溶液，使之与供试品溶液管的颜色一致，然后再加硫代乙酰胺试液比色。第二法：炽灼后的硫代乙酰胺法 适用于含芳环、杂环以及难溶于水、稀酸及乙醇的有机药物第三法：硫化钠法 适用于溶于碱性水溶液而难溶于稀酸或在稀酸中即生成沉淀的药物。第
8、四法：微孔滤膜法 适用于重金属限量低 （含重金属杂质 25g ）的药物。砷盐检查法 古蔡氏法：原理：金属锌与酸作用产生新生态的氢，与药物中微量的砷盐反应生成具有挥发性的砷化氢，遇溴化汞试纸，产生黄色至棕色的砷斑，与一定量标准砷溶液所生成的砷斑比较，判断供试品中重金属是否符合限量规定。标准砷斑的制备 精密标准砷溶液(1gAs/mL)2mL，置锥形瓶中， +盐酸 5mL 与水21mL，+碘化钾试液 5mL、酸性氯化亚锡试液 5 滴，室温放置 10min，+锌粒 2g，立即安装导气管，将锥形瓶置 25 40水浴中，反应 45min，取出溴化汞试纸，即得。样品砷斑的制备 如标准的制备，按各品种项下规定
9、方法制成供试品溶液。五价砷也能被锌还原，但速度较慢，故加入 KI 和氯化亚锡将其还原成三价砷；KI 和氯化亚锡还能抑制锑化氢的生成，锑化氢也能与溴化汞试纸作用生成锑斑；硫化氢能与溴化汞作用生成硫化汞的色斑，导气管中用醋酸铅棉花吸收硫化氢，又使砷化氢以适宜的速度通过。注意事项：供试品为硫化物、亚硫酸盐、硫代硫酸盐等在酸性溶液中生成 HS2 或 SO2，应先加硝酸使氧化成硫酸盐；供试品为铁盐，消耗还原剂，先加酸性氯化亚锡试液使高铁离子还原为低铁离子；环状结构的有机药物要先进行有机破坏（碱和酸）；含锑药物，锑化氢干扰砷盐的检出（SbH3 + HgBr2SbH2(HgBr) + HBr），改用白田道夫
10、(Betterdorff)法5. 第四章 药物定量分析与分析方法验证系统适用性条件的考察内容：系统适用性试验通常包括最小理论板数、分离度、重复性和拖尾因子。方法验证的主要指标：药物分析方法验证内容：准确度、精密度（包括重复性、中间精密度和重现性） 、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性。6. 第五章 体内药物分析体内样品分析前处理的目的：满足所选用的分析方法对试样的要求去除蛋白质常用方法与特点：加入与水混溶的有机溶剂；加入中性盐；加入强酸；加入含锌盐及铜盐的沉淀剂；酶解法分离与浓集常用方法与特点：7. 第六章 芳酸类非甾体抗炎药物的分析阿司匹林的结构和性质：阿司匹林的鉴别、检查和含量测定
11、：阿司匹林中特殊杂质的检查 ：溶液的澄清度：检查碳酸钠试液中的不溶物，如未反应的酚类或脱羧副反应生成的苯酚，方法：取阿司匹林样品 0.5g,加温热至约45 度的碳酸钠试液 10ml 溶解后，溶液应澄清；水杨酸：水杨酸在弱酸性溶液中与高铁盐反应呈紫堇色，而阿司匹林结构无游离酚羟基，不发生该反应。方法：取本品 0.1g，加乙醇 10ml 溶解后，加冷水适量使成 50ml,立即加新制的稀硫酸铁铵溶液 1ml，摇匀，30s内如显色，与对照液比较，不得更深，其限量为 1%易炭化物：检查易含量测定（各种方法的优缺点）：酸碱滴定法：直接滴定法：简单，但专属性差，易受阿司匹林的降解产物水杨酸及醋酸的干扰，故不
12、适用于水杨酸含量较高的样品测定。水解后剩余滴定法：碱液在受热时易吸收二氧化碳，生成碳酸盐，当用酸回滴定时，酸滴定液的消耗体积减少，致使测定结果偏高，故需在相同条件下进行空白试验校正。两步滴定法：先中和供试品中共存的各种酸，在照“水解后剩余滴定法” 测定。双相滴定法（目的）：利用苯甲酸能溶于有机溶剂的性质，在水相中加入与水不相混溶的有机溶剂，将滴定过程中产生的 苯甲酸不断萃取入有机溶液中，降低苯甲酸在水相中的量，使滴定反应完全，终点易于判断被硫酸炭化呈色的低分子有机杂质8. 第七章 苯乙胺类拟肾上腺素特殊杂质检查：酮体检查：酮体检查：酮体氢化还原制得，若氢化不完全则引入酮体杂质。紫外分光光度法检
13、查酮体的条件及要求药物 检查的杂质 溶剂 样品浓度(mg/ml) 测定波长(nm) A肾上腺素 肾上腺酮 HCl(92000) 2.0 310 不得过 0.05盐酸去氧肾上腺素 酮体 水 2.0 310 不得大于 0.20重酒石酸去甲肾上腺素 去甲肾上腺酮 水 2.0 310 不得大于 0.05盐酸异丙肾上腺素 酮体 水 2.0 310 不得大于 0.15盐酸甲氧明 酮胺 水 1.5 347 不得大于 0.06含量测定：非水滴定法的原理和注意事项：非水溶液滴定法（弱碱性）：冰醋酸为溶剂，加入醋酸汞消除氢卤酸的干扰，以结晶紫为指示剂 （盐酸甲氧明的指示剂为萘酚苯甲醇也可电位法指示终点），若碱性较
14、弱则加醋酐使突跃明显注：加入醋酐注意防止氨基被乙酰化，所以在冰醋酸溶解样品后应放冷后再加醋酐。9. 第八章 对氨基苯甲酸酯和酰苯胺类局麻药物的分析鉴别：重氮化偶合反应的适用范围：重氮化-偶合反应：分子结构中具有芳伯胺基的药物，生成的重氮盐可与碱性 -萘酚偶合成有色的偶氮材料。含量测定：亚硝酸钠滴定法的原理和注意事项：亚硝酸钠滴定法：原理：芳伯氨基或水解后生成芳伯氨基的药物在酸性溶液中与亚硝酸钠定量发生重氮化反应，生成重氮盐。注意条件：1、加入适量溴化钾加快反应 2、加入过量盐酸 1:2.56（加快重氮化反应，重氮盐在酸性条件下稳定，防止生成偶氮氨基化合物而影响重氮化反应速度）3、室温10 30
15、 4、滴定管尖端插入液面下约 2/3 处滴定（避免亚硝酸挥发和分解）终点指示方法：1、永停滴定法 ；2 、外指示剂法（碘化钾淀粉）亚硝酸钠滴定法的原理：芳伯氨基或水解后生成芳伯氨基的药物在酸性溶液中与亚硝酸钠定量发生重氮化反应，生成重氮盐，可用永停滴定法指示反应终点。主要条件：加入适量溴化钾加快反应速度；加过量盐酸加速反应；反应温度应低温；滴定速度不宜太快。10. 第九章 二氢吡啶类钙通道阻滞药物的分析鉴别：化学鉴别法的原理：药物分析下半部分重点内容回顾第十章 巴比妥及苯并二氮杂卓类镇静催眠药物的分析1、鉴别：含硫巴比妥类与不含硫巴比妥的鉴别方法有哪些2、含量测定： （1 ）溴量法的测定对象：
16、溴量法（5 位取代基含有不饱和双键）（2）银量法测定原理及指示终点方法：银量法（先形成可溶性的一银盐，稍过量的银离子就与巴比妥类药物形成难溶性的二银盐沉淀，使溶液浑浊，以此显示滴定终点）第十一章 吩噻嗪类抗精神病药物的分析1、鉴别：常用的主要鉴别方法有哪些：紫外、红外； 氧化剂显色反应 P216；与钯离子配合显色：形成红色配位化合物；分解产物反应：癸氟奋乃静+酸性茜素锆试液溶液由红色变为黄色2、含量测定：主要掌握注射剂的测定方法紫外风光光度法，以及波长为什么不选择最大吸收波长处进行测定P232第十二章喹啉与青蒿素类抗疟药物的分析1、鉴别：绿奎宁反应原理及鉴别对象：绿奎宁反应机制：奎宁和奎宁丁为
17、 6-位含氧喹啉类衍生物，6-位含氧喹啉，经氯水（或溴水）氧化氯化，再以氨水处理缩合，生成绿色的二醌基亚胺的铵盐；方法：取其水溶液，加溴试液 0.2ml 和氨试液 1ml，即显翠绿色，加酸成中性变成蓝色，成酸性时则为 紫红色2、青蒿素类药物的发现者3、含量测定：酸性染料比色法的基本原理及影响因素有哪些（重点为后者）：酸性染料比色法的原理：在适当 pH 的水溶液中，碱性药物可与氢离子结合成阳离子，酸性染料可解离成阴离子，两种离子定量地结合，即生成具有吸收光谱明显红移的有色离子对，可以定量地被有机溶剂萃取，而在特征波长处测定有机相中有色例子对的吸光度，即可进行碱性药物的含测。影响因素：主要包括水相
18、的 pH、酸性染料的种类、有机溶剂的种类与性质、有机相中的水分、酸性染料中的有色杂质。酸性染料比色法原理：在适当的介质中，碱性药物(B) 可与氢离子结合成(BH+)，而一些酸性染料可解离为(In-)，两者定量结合成有色络合物(BH+ In-)离子对，可被有机溶剂定量提取，在一定波长处测定其吸收，即可算出碱性药物的含量。水相最佳 pH 的选择：使有机碱药物和酸性染料分别全部以 BH+和 In-状态存在酸性染料及其浓度：定量结合，离子对溶解性好，且在其最大吸收波长处有较高的吸光度；染料在有机相中不溶或很少溶解有机溶剂的选择：提取效率高，氯仿最理想水分的影响：影响结果，脱水剂或滤纸除去水分酸性染料中
19、的有色杂质：在加入供试品之前，将缓冲液与酸性染料的混合液先用所选用的有机溶剂萃取弃去。第十三章莨菪烷类抗胆碱药物的分析1、鉴别：Vitaili 反应的原理Vitaili反应：托烷生物碱类结构中的酯键水解后生成的莨菪酸，经发烟硝酸加热处理，转变为三硝基衍生物，再与氢氧化钾醇溶液和固体氢氧化钾作用，则转成有色的醌型产物，开始呈深紫色称Vitaili反应第十三章 维生素类药物的分析1、维生素 A 的分析：（1）鉴别：与三氯化锑的呈色反应：三氯化锑鉴别反应的原理：维生素 A 在饱和无水三氯化锑的无醇三氯甲烷溶液中即显蓝色，渐变成紫红色。其机制为维生素 A 和氯化锑中存在的亲电试剂氯化高锑作用形成不稳定
20、的蓝色碳正离子。（现象）：维生素 A 在饱和无水三氯化锑的无醇三氯甲烷溶液中即显蓝色，渐变成紫红色。其机制为维生素 A 与三氯化锑中存在的亲电试剂氯化高锑作用形成不稳定的蓝色碳正离子。（2）含量测定：三点校正法的第一法：维生素 A 的含量测定紫外分光光度法（三点校正波长法）P248原理：在三个波长处测得吸光度后，在规定的条件下以校正公式进行校正，再进行计算，这样可消除无关吸收的干扰，求得维生素A 的真实含量。原理基础：（1）杂质的无关吸收在 310340nm 的波长范围内几乎呈一条直线，且随波长的增大吸光度下降（2）物质对光吸收呈加和性的原理，即在某一样品的吸收曲线上，各波长处的吸收度是维生素
21、 A 与杂质吸光度的代数和，因而吸收曲线也是二者吸收的叠加。2、维生素C 的分析：（1）性质有哪些；维生素C结构特征：维生素C分钟结构中具有烯二醇结构，具有内酯环，且有2个手性碳原子（C 4、C 5） ，性质：溶解性；酸性；旋光性；还原性；水解性；糖类的性质和反应；紫外吸收特性，稀酸最大吸收在243nm，中性或碱性，265nm。 （2）3、维生素 E 的分析：（1）杂质检查：杂质游离生育酚限量检查方法硫酸铈滴定法杂质检查 生育酚原理：利用游离生育酚的还原性，可被硫酸铈定量氧化。方法：取本品 0.10g，加无水乙醇 5ml 溶解后，加二苯胺试液 1 滴，用硫酸铈滴定液滴定，消耗硫酸铈滴定液不得超
22、过 1.0ml。4、维生素B1 的分析：（1）鉴别：硫色素反应维生素 B1 的硫色素反应：噻唑环在碱性介质中可被高铁氰化钾等氧化剂氧化，然后与嘧啶环上的-NH2 缩合生成具有荧光的硫色素，后者易溶于异丁醇中显强烈的蓝色荧光，该反应又称为硫色素荧光反应。为维生素 B1 所特有第十五章甾体激素类药物的分析1、皮质激素类药物：（1 ）性质：还原性C17醇酮基，可与碱性酒石酸铜试液或氨制硝酸银试液发生沉淀反应2、肾上腺皮质激素 醋酸地塞米松：（ 1）特殊杂质检查其他甾体和硒3、孕激素 黄体酮：（1）区别其他甾体的方法：与亚硝基铁氰化钠显色：与亚硝基铁氰化纳的反应是黄体酮灵敏、专属的鉴别反应，在一定反应
23、条件下，黄体酮显蓝紫色。4、含量测定：四氮唑比色法的原理、介质条件及试剂加入顺序等：四氮唑盐比色法的原理：用于皮质激素药物含量测定的方法。皮质激素 C17-醇酮基具有还原性，在强碱性溶液中能将四氮唑盐定量地还原为有色甲朁。生成的颜色随所用的试剂和条件的不同而不同。酮基取代反应速度快于羟基取代；一般采用无水乙醇作溶剂；常用碱；长时间接触24h；25暗处反应 4045min。含量测定 四氮唑比色法 ：用于皮质激素类药物含量测定的方法，皮质激素类 C17-a-醇酮基有还原性，可还原四氮唑盐成有色甲赞第十六章抗生素类药物的分析1、-内酰胺类抗生素：（1）鉴别：茚三酮反应等：茚三酮反应：-氨基 茚三酮
24、蓝紫色2、氨基糖苷类抗生素：（1 ）鉴别：茚三酮反应、N- 甲基葡萄糖胺反应(Elson-Morgan 反应) 、麦芽酚(Maltol)反应 、坂口(Sakaguchi) 反应： 茚三酮反应：具羟基胺类，-氨基酸性质 链霉素 + （ 水和茚三酮） 蓝紫色N-甲基葡萄糖胺（Elson-Morgan）反应：链霉素 水解 N-甲基葡萄糖胺 （乙酰丙酮 / OH-） （对二甲氨基苯甲醛） 红色麦芽酚（Maltol)反应：(链霉糖特有） 链霉素 OH- / 重排 麦芽酚 Fe3+ 紫红色坂口（Sakaguchi）反应：(链霉胍特有）：链霉素 OH- / 水解 链霉胍 8-羟基喹啉 （或 -萘酚） NaOBr 橙红
