1、1蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留快速检测方法标准1. 范围 本标准规定了由酶抑制法测定蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检验方法。本标准适用于蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速筛选测定。测试方法 酶抑制率法2. 原理在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度呈正相关。正常情况下，酶催化神经传导代谢产物（乙酰胆碱）水解，其水解产物与显色剂反应，产生黄色物质，用分光光度计在 410nm 处测定吸光度随时间的变化值，计算出抑制率，通过抑制率可以判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在。3.试剂3.1 pH8.0 缓冲溶液
2、：分别取 43.5g 无水磷酸氢二钾与 2.2g 磷酸二氢钾，用 510mL 蒸馏水溶解。3.2 显色剂：分别取 160mg 二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）和15.6mg 碳酸氢钠，用 20mL 缓冲溶液溶解，4C 冰箱中保存。3.3 底物：取 25.0mg 硫代乙酰胆碱，加 3.1mL 蒸馏水溶解，摇匀后置 4冰箱中保存备用。保存期不超过十天。3.4 乙酰胆碱酯酶：根据酶的活性情况，用缓冲溶液溶解，3 min 的吸光度变化 D A0 值应控制在 0. 3 以上。摇匀后置 4冰箱中保存备用，保存期不超十天。3.5 可选用由以上试剂制备的试剂盒。乙酰胆碱酯酶的 A0 值应控制在 0.3 以上。2
3、4 仪器4.1 分光光度计或相应测定仪。4.2 常量天平。4.3 恒温水浴或恒温箱5 分析步骤5.1 样品处理：选取有代表性的蔬菜样品，冲洗掉表面泥土，剪成 1cm 左右见方碎片，取样品 1g，放入烧杯或提取瓶中，加入5mL 缓冲溶液，静制十五分钟，之间需振荡几次，待用。5.2 对照溶液测试： 先于试管中加入 2.5mL 缓冲溶液，依次加入 0.lmL 酶液、0.1mL 显色剂、0.lmL 底物摇匀，此时检液开始显色反应，应立即放入仪器比色池中，记录反应 3 min 的吸光度变化值A0。5.3 样品溶液测试：先于试管中加入 2.5mL 样品提取液，其它操作与对照溶液测试相同，但在加底物之前必须
4、放置 15 分钟，记录反应 3min 的吸光度变化值 At。6 结果的表述计算6.1 结果计算检测结果按公式计算：抑制率(%)= (A 0-A t)/ A 0100 式中：A 0 对照溶液反应 3min 吸光度的变化值； A t 样品溶液反应 3min 吸光度的变化值；6.2 结果判定结果以酶被抑制的程度（抑制率）表示。当蔬菜样品提取液对酶的抑制率50%时，表示蔬菜中有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药存在，样品为阳性结果。阳性结果的样品需要重复检验 2 次以上。对阳性结果的样品，可用其它方法进一步确定具体农药品种和含量。37 附则7.1 酶抑制率法技术指标7.1.1 灵敏度指标：酶抑制率法对部分
5、农药的检出限见表 2 酶抑制率法对部分农药的检出限表 2 酶抑制率法对部分农药的检出限农药名称 检出限 mg/kg 农药名称 检出限 mg/kg敌敌畏 0.1 氧化乐果 0.8对硫磷 1.0 甲基异柳磷 5.0辛硫磷 0.3 灭多威 0.1甲胺磷 2.0 丁硫克百威 0.05马拉硫磷 4.0 敌百虫 0.2乐果 3.0 呋南丹 0.057.1.2 符合率：在检出的抑制率50的 30 份以上样品中，经气相色谱法验证，阳性结果的符合率应该在 80以上。8 说明8.1 葱、蒜、萝卜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中，含有对酶有影响的次生物质，容易产生假阳性。处理这类样品时，可采取整棵蔬菜萃取或采用表面测定法。对一些含叶绿素较高的蔬菜，也可采取整株蔬菜萃取的方法，减少色素的干扰。8.2 当温度条件低于 37 度，酶反应的速度随之放慢，加入酶液和显色剂后放置反应的时间应相应延长，延长时间的确定，应以胆碱酯酶空白对照测试 3min 吸光度变化差值在 0.3 以上，即可往下操作。注意样品放置时间应与空白对照溶液放置时间一致才有可比性。胆碱酯酶空白对照测试 3min 吸光度变化差值在 0.3 以下的原因：一是酶的活性不够，二是温度太低。
