1、第九章 荧光免疫技术 一、选择题 、A1型题(标准型) 1.可用于酶免疫荧光分析的物质是 A.异硫氰酸荧光素 B.四乙基罗丹明 C.四甲基异硫氰酸罗丹明 D.藻红蛋白 E.四甲基伞酮-D半乳糖苷 2.去除过度标记的荧光抗体最好用 A.搅拌法 B.透析法 C.盐析法 D.凝胶过滤法 E.离子交换层析法 3.目前使用最广泛的荧光色素为 A.FITC B.RB200 C.TRITC D.R-RE E.Eu3+ 4.免疫标记技术中发展最早的技术是 A.酶免疫技术 B.同位素标记的免疫技术 C.化学发光免疫技术 D.荧光免疫技术 E.免疫金银技术 5.作为荧光抗体标记的荧光物质必须具备的条件中，与提高观
2、察效果有关的是 A.必须有活性化学基团 B.性质稳定 C.荧光效率高 D.不影响蛋白质的活性 E.标记方法简便快速 6.决定荧光效率的因素主要是 A.物质本身的物理特性 B.激发光的波长 C.激发光的强度 D.溶剂pH E.溶剂极性 7. 1.荧光显微镜光路形式为 A 衍射光、落射光 B.折射光、透射光 C. 透射光、落射光 D.折射光、衍射光 E .散射光、衍射光 8RB200产生的荧光色泽为 A.橘红色 B.黄绿色 C.蓝紫色 D.天青色 E.褐黑色 9落射式荧光显微镜的吸收滤片应安装在 A.激发滤片与分色镜之间 B.分色镜与目镜之间 C.物镜与分色镜之间 D.物镜与载玻片之间 E.光源与
3、激发滤片之间 10.能用于抗原定位检测的实验为A.直接法荧光抗体染色 B.TRFIA C.荧光偏振免疫分析 D.ELISA E.免疫比浊分析 11.间接法荧光抗体染色与直接法相比,优点为 A.非特异性荧光染色少 B.操作更简便 C.可用于抗原的定位检测 D.可用于抗原定性检测 E.检测不同的抗原,只需制备一种荧光抗体 12.荧光免疫技术中,应用最广泛的金属元素为 A.Tb B.Ce C.Eu D.Au E.Zn 、A1型题(否定型) 1.关于直接法荧光抗体染色的特点,错误的是 A.简单易行,特异性高 B.敏感度偏低 C.非特异性荧光染色因素少 D.可检测抗原及抗体 E.每检测一种抗原需制备一种
4、相应的荧光抗体 2.临床常用的荧光猝灭剂不包括 A.亚甲蓝 B.甲基红 C.碱性复红 D.伊文思蓝 E.碘溶液 3.荧光显微镜观察时的注意事项错误的是 A.暗室内观察 B.染色后标本立即观察 C.37观察,效果最好 D.不宜长时间观察一个视野 E.宜用无荧光镜油 4荧光显微镜与普通光学显微镜的不同之处错误的是 A.光源 B.滤片 C.聚光镜 D.电源 E.镜头 5.不宜用于荧光抗体染色的标本是 A.血涂片 B.肝印片 C.肿瘤切除物切片 D.细菌涂片 E.尿液 6.下述物质不是荧光色素的是 A.异硫氰酸荧光素 B.四乙基罗丹明 C.四甲基异硫氰酸罗丹明 D.四甲基伞酮-D半乳糖苷 E.藻红蛋白
5、 、B1型题(配伍题) 问题13 A.镧系螯合物 B.四乙其罗丹明 C.四甲基异硫氰酸罗丹明 D.藻红蛋白 E.异硫氰酸荧光素 1.激发后产生的荧光寿命最长的是 2.激发后可产生明显黄绿色荧光的物质是 3.最大发射光波长为620nm的物质为 二、填空题 1.一般用于活细胞染色者以 F/P=为宜；用于经过固定的标本的染色，荧光抗体以 F/P=为宜； 2. 5.FITC的最大吸收光谱和最大发射光谱为_和_。 3.荧光抗体染色的实验类型主要有_和_。 三、判断题 直接法是否比间接法荧光抗体染色具有更高的特异性及敏感性？ 四、名词解释 荧光免疫技术 五、简答题 1.简述荧光显微镜的滤片系统。 2.目前
6、临床检验中常用的荧光物质有哪些？ 3.简述荧光抗体的制备及纯化方法。 六、论述题 荧光抗体技术有哪些优缺点，在临床上有哪些应用？ 标准答案 一、选择题 、A1型题(标准型) 1. E 2 E 3 A 4 D 5 C 6 A 7 C 8 A 9 B 10A 11 E 12 C 、A1型题(否定型) 1 D 2 B 3 C 4 D 5 E 6 D 、B1型题(配伍型) 1.E 2 A 3.C 二、填空题 1. 490495nm、520530nm。 2. 2.4、1.5。 3直接法、间接法 三、判断题 . 四、名词解释 荧光免疫技术是将免疫学反应的特异性与荧光技术的敏感性结合起来的一种方法。 五、简
7、答题 1 荧光显微镜的滤片系统有：激发滤片（exciter filter）：位于光源和物镜之间，作用是使短光波的光通过吸收长波长的光；吸收滤片（barrier filter）：位于物镜和目镜之间，作用是使荧光通过而阻断荧光以外的其它光。保护眼睛；隔热滤片：位于灯室聚光器前，作用：阻拦红外线。 2.目前临床检验中常用的荧光物质有：四乙基罗丹明、异硫氰酸荧光素、四甲基异硫氰酸罗丹明、Eu3+的螯合物等。 3.荧光抗体的制备方法纯化方法有透析法、凝胶过滤法、有撑搅拌法及透析法。 六、论述题 荧光抗体技术的优缺点：优点：（ 1 ） 能做到快速、敏感、定位。（2）Ag 和 Ab 的特异性与形态的检查结合
8、在一起；缺点：对组织细胞进行微细结构的观察做不到；标本不能永久保存，荧光有自然消退现象，需及时观察及对照相；有非特异性荧光的干扰。 荧光抗体技术的应用：病毒学方面：病毒鉴定和病毒在感染cell内的定位；寄生虫学方面：用于寄生虫的诊断（鉴定、分型）；免疫学方面：研究、用于自身免疫病的诊断；细菌学方面：菌种鉴定和Ag结构的研究。 第十章 酶免疫技术 一、选择题 (一)、A1型题(标准型) 1.HRP的纯度用RZ表示,它是以何比值表示 A.420nm/275nm B.403nm/290nm C.275nm/403nm D.403nm/275nm E.290nm/275nm 2.用于标记的HRP的RZ
9、值应大于 A.3.0 B.3.2 C.3.3 D.3.4 E.3.1 3.HRP的活性基团是 A.糖蛋白 B.亚铁血红素 C.白蛋白 D.球蛋白 E.色氨酸 4.HRP催化的反应式为DH2+H2O2D+2H2O2,何者习惯上被称为底物 A.DH2 B.H2O2 C.D D.H2O E.AP 5.-Gal常用的底物是 A.OPD B.TMB C.5-ASA D.ABTS E.4MUG 6.OPD经与HRP反应后,再用H2SO4终止反应后呈 A.橙黄色 B.黄色 C.蓝色 D.红色 E.棕黄色 7.下列哪种方法用一种标记物可检测多种被测物 A.ELISA双抗体夹心法 B.ELISA竞争法 C.EL
10、ISA间接法 D.ELISA捕获法 E.放射免疫测定法 8.目前ELISA中应用最广泛的底物是 A.OPD B.TMB C.5-ASA D.ABTS E.P-NPP 9.ELISA间接法是用于 A.酶标记抗原用于抗体的检测 B.酶标记抗抗体用于抗体的检测 C.酶标记抗抗体用于抗原的检测 D.酶标记抗体用于抗原的检测 E.酶标记抗原用于抗原的检测 10.捕获法主要用于何种物质的测定 A.IgM B.IgG C.IgA D.IgD E.IgE 11.ELISA双抗体夹心法是 A.酶标记特异抗体用于抗原的检测 B.先将待测抗原包被于固相载体 C.标记一种抗体可检测多种抗原 D.能用于半抗原的测定 E
11、.属竞争结合测定 (二)、A1型题(否定型) 1.RZ值与何者无关 A.酶的理化性质 B.酶含量 C.酶活性 D.酶的组成 E.酶的底物 2.下列哪一项不是HRP的底物 A.TMB B.5-ASA C.ABTS D.OPD E.4MUG 3.下列哪项不是均相酶免疫测定的特点 A.灵敏度大于异相酶免疫测定 B.属于竞争结合分析方法 C.AgE与Ab结合形成AbAgE后,其中的酶活性将减弱或增强 D.不需将AbAgE与AgE分离,可直接测定酶活性的变化推算出待测抗原量 E.主要用于小分子抗原和半抗原的测定 4.下列哪一项不符合ELISA试剂的要求 A.选择抗体要求具有高的比活性 B.底物应颜色变化
12、明显,反应终止后颜色稳定 C.载体要求吸附性好,空白值低,透明度好 D.抗原要求纯度高,抗原性完整 E.选择酶制剂时,酶的RZ值比酶活力指标更重要 5.下列哪一项不是用于标记的酶的特点 A.易失活 B.酶活性高 C.酶活性不受样品中其他成分的影响 D.理化性质稳定 E.价廉易得 6.关于ELISA试验中的封闭,不正确的论述是 A.有助于酶与底物的结合 B.用1%-5%牛血清白蛋白再包被一次 C.防止酶标抗体吸附载体 D.可消除非特异显色而导致的本底偏高 E.用5-20%小牛血清再包被一次 7.下列哪项不符合ELISA试验中抗原抗体的要求 A.用硫酸铵盐析的抗体可满足交联酶的需要 B.制备酶标结
13、合物用的抗体要求有高的比活性 C.测定抗体时需用相当纯的抗原 D.酶消化IgG的Fab片段进行酶标记效果更好 E.制备酶标记物的抗原要求纯度高,抗原性完整 8.下列哪项不符合ELISA试验中固相载体的要求 A.与抗原或抗体有较高的结合容量且结合稳定 B.抗原或抗体与其结合后,应保持活性 C.抗原或抗体与其结合后丧失免疫活性 D.固相化方法应简便易行,快速经济 E.能结合亲和素或链酶亲和素等大分子蛋白质 9.下列哪项不符合RZ的特点 A.常以RZ值表示HRP制品的纯度 B.RZ值越高说明HRP越纯 C.RZ=OD(403nm)/OD(275nm) D.RZ值与酶活性无关 E.对HRP的要求是RZ
14、值应大于3 10.下列哪项不符合斑点-ELISA的特点 A.NC膜吸附蛋白质能力近处100% B.检出灵敏度较普通ELISA高6-8倍 C.试剂用量较ELISA节约约10倍 D.操作简便,结果易判断 E.吸附抗原(抗体)的NC膜不能长期保存 二、填空题 1. _,_和_三项技术结合而成形成免疫印迹法。 2.常用于HRP标记抗_和_。 三、判断题 1. ELISA竟争法是被测物多则标记物被结合的机会少 2斑点-ELISA法的特异性高于ELISA法 3. 发展最早的标记技术是酶免疫技术。 4.酶活性以单位(U)表示,即1min将1umol底物转化为产物所需的酶量。 5.ELISA原理是颜色反应的深
15、浅与抗原或抗体的量成反比 6.ELISA的固相载体阳性和阴性标本测定结果差别最大者是最适用载体 7.对双抗体夹心法ELISA是.使用分别针对抗原不同决定簇的两种单克隆抗体作酶标记 四、名词解释 1.异相EIA 2.封闭 五、简答题 1.简述均相酶免疫测定的基本原理。 2.简述双抗体夹心法的基本原理。 3.简述斑点-ELISA的优点。 4.简述用于标记的酶应符合的要求。 六、论述题 试论述ELISA的基本原理、方法类型及各种方法的应用价值。 标准答案 一、选择题 （一） A1型题(标准型) 1. D 2 E 3 B 4A 5 E 6 E 7 C 8 B 9 B10 A 11 A (二) A1型题
16、(否定型) 1C 2 E 3 A 4 E 5 A 6 A 7 A 8 C 9 E 10 E 二、填空题 1.SDS-PAGE, 蛋白质转运, 酶免疫测定 2.戊二醛交联法, 过碘酸钠法 三、判断题 1. 2. 3 4 5 6 7 四.名词解释 1.异相 EIA:在酶免疫测定中,抗原抗体反应后,需分离游离的和与抗原(或抗体)结合形成复合物的酶标记物,然后对经酶催化的底物显色程度进行测定,再推算出样品中待测抗原(或抗体)的含量。 2.封闭:用抗原或抗体包被 ELISA 板后,为防止非特异性吸附,需用 1-5%牛血清白蛋白或5-20%小牛血清等包被一次,称为封闭。 五、简答题 1.酶标抗原（AgE）
17、与Ab结合形成AbAgE后，其中的酶（E）活性将减弱或增强。因此，不需对反应液中的AbAgE和AgE进行分离，直接测定反应系统中总酶活性的变化，即可推算出被测样品中Ag的含量。 2.其基本工作原理是利用连接于固相载体上的抗体和酶标抗体可分别与样品中被检测抗原分子上两个不同抗原决定簇结合,形成固相抗体-抗原-酶标抗体免疫复合物。由于反应系统中固相抗体和酶标抗体的量相对于待检抗原是过量的,因此复合物的形成量与待检抗原的含量成正比(在方法可检测范围内)。测定复合物中酶作用于加入的底物后生成的有色物质量(OD值),即可确定待检抗原含量。 3.斑点-ELISA 的优点为:NC 膜吸附蛋白力强,微量抗原吸
18、附完全,故检出灵敏度可较普通ELISA高6-8倍;试剂用量较ELISA节约约10倍;操作简便,试验及结果判断不需特殊设备条件;吸附抗原(抗体)或已有结果的NC膜可长期保存（-20可达半年），不影响其活性。 4.酶活性高,能对低浓度底物产生较高的催化反应率. 具有可与抗原、抗体共价结合的基团，标记后酶活性保持稳定，而且不影响标记抗原与抗体的免疫反应性。 酶催化底物后产生的信号产物易于判定或测量，且方法简单、敏感和重复性好。 酶活性不受样品中其他成分（内源性酶、抑制物）的影响；用于均相酶免疫测定的酶还要求当抗体与酶标抗原结合后，酶活性可出现抑制或激活。 酶、辅助因子及其底物均对人体无危害，理化性质
19、稳定，且价廉易得。 六、论述题 ELISA 基本原理是：把抗原或抗体在不损坏其免疫活性的条件下预先结合到某种固相载体表面；测定时，将受检样品（含待测抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按一定程序与结合在固相载体上的抗原或抗体起反应形成抗原或抗体复合物；反应终止时，固相载体上酶标抗原或抗体被结合量（免疫复合物）即与标本中待抗体或抗原的量成一定比例；经洗涤去除反应液中其他物质，加入底物进行显色，最后通过定性或定量分析有色产物量即可确定样品中待测物质含量。 方法类型及应用：双抗体夹心法，是检测抗原最常用的方法，适用于检测两个以上抗原决定簇的多价抗原。间接法，是测定抗体最常用的方法。竞争法，可用于抗原和半抗原
20、的定量测定，也可对抗体进行测定。捕获法，主要用于血清中某种抗体亚型成分（如IgM）的测定。 第十一章 生物素亲和素免疫放大技术 一、选择题 (一)、A1型题(标准型) 1.既能用于标记蛋白质氨基,又能标记蛋白质醛基的活化生物素是 A.BNHS B.BCHZ C.BHZ D.MPB E.BCNHS 2.间接法BA的反应模式为 A.Ag-(Ab-B)-A* B.Ag-Ab1-(Ab2-B)-A* C.Ag-(Ab-B)-A-B* D.Ag-(Ab-B)-AB*C E.Ag-Ab1-(Ab2-B)-A-B* 3下列哪一项属于长臂活化生物素 A.BNHS B.BHZ C.BCNHS D.BCHZ E.
21、MPB 4.MPB是氯化生物胞素与3-(N-马来酰亚胺-丙酰)-N-BNHS在什么溶液中反应后制得的 A.二甲基甲酰胺 B.碳二亚胺 C.N-羟基丁二酰亚胺 D.马来酰亚胺 E.水合肼 5.每个亲和素能结合多少个分子的生物素 A.1 B.2 C.3 D.4 E.5 6.生物素通过噻吩环戊酸侧链上的什么部位与多种大分子偶联 A.羰基 B.-NH- C.羧基 D.-CH3 E.-NH2 7.常用于标记抗体的活化生物素是 A.BNHS B.BHZ C.BCNHS D.BCHZ E.MPB 8.在生物素标记抗体时,生物素:IgG的比例(mg/mg)为多少时,效果较好 A.1:1 B.3:1 C.4:1
22、 D.2:1 E.5:1 9.在用生物素标记酶时,酶活性会降低的是 A.HRP B.葡萄糖氧化酶 C.-Gal D.AP E.LDH 10.亲和素-生物素化碱性磷酸酶(ABAP)复合物的制备是将亲和素溶液与生物素化AP按多少浓度比反应后制得 A.1:1 B.2:1 C.3:1 D.4:1 E.5:1 11.标记蛋白质氨基的活化生物素是 A.BHZ B.MPB C.光生物素 D.生物素脱氧核苷三磷酸 E.BNHS 12.标记蛋白质巯基的活化生物素是 A.MPB B.BNHS C.BHZ D.光生物素 E.生物素脱氧核苷三磷酸 (二)、A1型题(否定型) 1.制备ABC复合物时,亲和素的浓度不能高
23、于 A.10ug/ml B.20ug/ml C.30ug/ml D.35ug/ml E.40ug/ml 2.标记核酸的活化生物素,下列哪项除外 A.MPB B.光生物素 C.生物素脱氧核苷三磷酸 D.BNHS E.BHZ 3.用活化生物素标记核酸的方法,下列哪项除外 A.缺口移位法 B.光化学法 C.化学偶联法 D.放射免疫法 E.末端标记法 4.下列说法不正确的是 A.标记反应时,活化生物素与待标记抗原或抗体应有适当比例 B.一般每个抗原或抗体分子标记1-3或3-5个生物素分子较为适宜 C.生物素与抗原、抗体等蛋白质结合后,不影响后者的免疫活性 D.生物素与酶结合后,酶活性不受影响 E.为减
24、少空间位阻影响,常在生物素与被标记物间加入交联臂样结构 5.下列哪种方法不能用于制备生物素标记的核酸探针 A.缺口移位法 B.化学偶联法 C.光化学法 D.末端标记法 E.电化学法 二、填空题 1.不受位阻效应影响,更易发挥生物素活性作用的是. _。 2.用于标记蛋白质醛基的,适用范围较BHZ宽的活化生物素是_。 3.在一定波长的光照射下,光敏基团可转变为芳香基硝基苯而直接与腺嘌呤N7位氨基结合的是. _。 4.生物素化蛋白质衍生物有二类,一种是_,另一种是_。 5.用于亲和素标记的物质中,最常用的是_,_和_。 三、判断题 亲和素和生物素之间的亲和力比抗原抗体间的亲和力高至少1万倍。 四、名
25、词解释 亲和素 五、简答题 1.简述常用于标记核酸分子的活化生物素有哪几种。 2.简述生物素化蛋白质衍生物的特性。 3.简述BAS的特点。 4.简述几种常用于标记不同类型生物大分子的活化生物素。 六、论述题 试述ABC法的原理。 标准答案 一、选择题 （一）、A1型题（标准型） 1 B 2 B 3 C 4 A 5 D 6 C 7 A 8 D 9 D 10 D 11 E 12 A (二)、A1型题(否定型) 1.E 2.A 3.D 4.D 5.E 二、填空题 1 BCNHS 2 BCHZ 3光生物素 4 生物素化的大分子生物活性物质(如抗原、抗体),标记材料(如酶)结合生物素后制成的标记物 5.
26、酶,异硫氰酸荧光素(FITC),胶体金 三、判断题 . 四、名词解释 亲和素:亲和素亦称抗生物素蛋白、卵白素，是从卵蛋白中提取的一种由 4 个相同亚基组成的碱性糖蛋白，每个亲和素能结合4个分子的生物素。 五、简答题 1.光生物素：是一种化学合成的衍生物，用于DNA或RNA的标记。生物素通过噻吩环戊酸侧链上的羧基与多种大分子偶联活化后，可用于标记各种蛋白质形成生物素化蛋白质衍生物。而且一个蛋白质分子可联结多个生物素分子，从而使其具有较高的比活性，在和亲和素反应中成为多价。生物素化大分子的多价性，是BAS多级放大作用的物质基础。生物素化蛋白质衍生物有二类，一种是生物素化的大分子生物活性物质（如抗原
27、、抗体），另一种是标记材料（如酶）结合生物素后制成的标记物。 生物素脱氧核苷三磷酸：先将生物素与某种脱氧核苷酸连接成活化生物素，再采用缺口移位法而掺入到双链DNA中。 BNHS和BHZ：二者均可在一定条件下与核酸胞嘧啶分子中的N4氨基交联，使核酸分子生物素化。 2.BAS 在反应中的基本类型有二种:一类以游离亲和素为中间物,分别连接包含生物素化大分子的待检反应体系和标记生物素,称为 BAB 法;后来又在此基础上发展了亲和素-生物素化酶复合物技术(ABC)。另一类是直接用标记亲和素连接生物素化大分子反应体系进行检测的BA法，或称标记亲和素-生物素法（LAB）。 3.灵敏度高，其反应呈高度专一性，
28、稳定性高，适用范围广，实验成本低。 4.标记蛋白质氨基的活化生物素，如BNHS，BCNHS。 标记蛋白质醛基的活化生物素，如BHZ，BCHZ。 标记蛋白质巯基的活化生物素，如MPB。 标记核酸的活化生物素，如光生物素。 六、论述题 1.其原理是预先按一定比例将亲和素（或链霉亲和素）与酶标生物素结合，形成可溶性的亲和素（或链霉亲和素）-生物素-过氧化物酶复合物（ABC 或 SABC）。当其与检测反应体系中的生物素化抗体（直接法）或生物素化第二抗体（间接法）相遇时，ABC（或SABC）中未饱和的亲和素（或链霉亲和素）结合部位即可与抗体上的生物素结合，使抗原-抗体反应体系与ABC（或SABC）标记体
29、系连成一体进行检测。 2.BAB-ELISA夹心法测抗原的原理：用生物素化的抗体替代常规ELISA中的酶标抗体，与已与固相抗体结合的抗原抗体复合物结合，然后连接亲和素及酶标生物素，从而使反应信号放大，提高检测灵敏度。 第十二章 免疫组织化学技术 一、选择题 （一）A1型题(标准型) 1 .PAP复合物中的酶是 A.碱性磷酸酶 B.葡萄糖氧化酶 C.辣根过氧化物酶 D.胃蛋白酶 E.胶原酶 2.PAP的特点是几个抗酶抗体和3个过氧化物酶分子组成复合物，结构非常稳定 A.1 B.2 C.3 D.4 E.6 3.ABC法中的“桥”是指 A.第一抗体 B. 第二抗体 C. 第三抗体 D.亲和素 E.链
30、霉素亲和素 4.双标记荧光免疫法中，如用罗丹明标记 A 抗体，呈什么颜色，用异硫氰酸荧光素标记 B抗体，呈什么颜色 A.黄绿色，橘红色 B.橘红色，黄绿色 C.红色，淡黄色 D.淡黄色，红色 E.橙黄色，浅绿色 5. 荧光免疫间接法比直接法荧光增强多少倍，敏感性提高多少倍 A.12 B.24 C.36 D.48 E.510 6. 胶体金标记蛋白时，待标记蛋白的实际用量是在稳定 1ml 胶体金所需蛋白基础上再增加多少 A. 510% B. 1020% C. 2030% D. 3040% E. 4050% 7.铁蛋白是一种含铁 多少，相对分子量为650900KD的球形蛋白 A.15% B.20%
31、C.25% D.30% E.35% 8.下列哪种方法制备的胶体金是红色 A.枸橼酸三钠 B.白磷 C.维生素C D.乙醇-超声波 E.硼酸钠 9.免疫组化技术的关键步骤是 A.标本处理 B.抗体的处理与保存 C.设立对照试验 D.结果判断 E.免疫染色 10.免疫组化技术的首要试剂是 A.抗原 B.标记物 C.固定剂 D.抗体 E.洗涤液 二、填空题 1.用丙酮做固定剂的抗原是_；用 1%聚甲醛做固定剂的抗原是_；用 10%甲醛做固定剂的抗原是_；用 95%乙醇做固定剂的抗原是_；用四氯化磺做固定剂的抗原是_。 2.免疫染色对特殊标本的进一步处理常用 _和_法。 3.免疫组化染色后，阳性细胞的
32、染色分布有三种类型，分别是_、_和_。 4.酶免疫组化技术中最常用的酶有_、_及_。 5.免疫电镜标本的制备主要有_、_和_三种。 6.免疫组化中最常用的制片方法是_和_。 三、判断题 1.ELISA属于免疫细胞组织化学技术 . 2.组织细胞标本固定的目的是 .使细胞脱落 3.免疫染色过程中使用蛋白酶消化法是 限制抗体与抗原的结合 4.关于酶免疫组化技术的染色标本不能长期保存 5.激光器的特征是波长范围较宽 6.免疫组化技术标本的来源是粪便 7.免疫胶体金标记蛋白质是化学结合，但并不影响蛋白质的生物活性和免疫活性。 8.免疫组化技术中，为确定结果可靠性，实验中必须设立对照，通常是针对第一抗体设
33、立对照。 四、名词解释题 1.胶体金 2.免疫组化技术 五、简答题 1.何谓免疫电镜技术？ 2.免疫组化标本固定时，好的固定剂应满足哪些要求？ 3.简述荧光免疫组化技术直接法的原理。 4.简述免疫胶体金标记的原理。 六、论述题 试述酶免疫组化技术的原理及其应用。 标准答案 一、选择题（标准型） 1. C 2 B 3 D 4 B 5 B 6 B 7 C 8 A 9 E 10 D 二、填空题 1免疫球蛋白、激素、类脂质、蛋白质、酶。 2.冰冻切片，石蜡切片 3.胞质型 细胞核型，细胞膜表面型 4.辣根过氧化物酶，碱性磷酸酶 葡萄糖氧化酶 5.非包埋法免疫染色，包埋前免疫染色，包埋后免疫染色 6.蛋
34、白酶消化法，非特异吸附法 三、判断题 1 2 345678 四、名词解释题 1.免疫组化技术是指在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，借助可见的标记物，对相应抗原或抗体进行定位、定性和定量检测的一种免疫检验方法。 2.胶体金是氯金酸在还原剂如白磷、维生素C枸橼酸纳和鞣酸等作用下，聚合成特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，故称为胶体金。 五、简答题 1.免疫电镜技术是将抗原抗体反应的特异性与电子显微镜的高分辨力相结合的在亚细胞和超微结构水平上对抗原进行定位分析的一种高度精确、灵敏的技术。 2.答：1）能快速固定抗原 2）防止抗原物质扩散 3）固定后的抗原能被抗体
35、识别，不影响抗原抗体反应。 3.答：将荧光素标记的已知抗体（或抗原）与切片（印片）中相应抗原（或抗体）直接发生反应，以检测组织与细胞标本中的靶抗原（或抗体）。 4.答：胶体金颗粒标记蛋白质的原理是金颗粒表面负电荷与蛋白质正电荷之间非共价键的静电引力互相吸引，当达到范登华引力半径范围之内时，蛋白质与金颗粒表面形成牢固结合。 六、论述题 酶免疫组化技术的原理： 酶免疫组化技术是利用酶标记已知抗体（或抗原），然后与组织标本中相应抗原（或抗体）在一定条件下相互结合形成带酶分子的复合物，酶遇到底物时，能催化底物水解，或氧化或还原，产生有色的不溶性产物，出现显色反应，在显微镜下进行细胞与组织表面或内部某种抗原成分的定位观察分析。 酶免疫组化技术的特点：敏感性较免疫荧光技术更高，可用普通光学显微镜和电子显微镜观察结果，便于对组织细胞微细结构的分辩，染色标本可长期保存。
