1、微生物学综合实验,实验一 土壤中微生物的分离与计数 实验二 理化因子对微生物的影响 实验三 环境条件对微生物生长的影响,实验一 土壤中微生物的分离与计数,实验目的,掌握从土壤中分离、计数细菌和霉菌的方法,实验原理,土壤是微生物生活的大本营，是寻找和发现有重要应用潜力的微生物的主要来源。 不同土样中微生物的种类和数量各不相同，一般土壤中细菌的数量最多，其次是放线菌和霉菌。 分离微生物时，常根据目的微生物特殊的营养要求，供给只适于他们生长而不利于其他微生物生长的特殊生存条件，或加入某种限制因子抑制其他微生物的生长，以筛选出目标微生物。 本实验以采集的土壤为样品，利用平板分离法从中分离出细菌和霉菌。
2、,实验材料,1 菌源：采集的土样。 2 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基、马丁培养基。 3 试剂：无菌生理盐水 4 器材：恒温箱、培养皿、移液管、涂棒、玻璃珠、称量纸等。,实验步骤,1 制备土壤稀释液 2 细菌、霉菌分离 3 培养 细菌37培养1-2d霉菌28培养2-3d 4 平板菌落计数同一稀释度的3个平板上菌落平均数*稀释倍数 微生物活细胞数（个/克）= 含菌样品克数,土壤稀释液的制备 称取土样10g，放入盛90ml无菌水三角瓶中，振荡1520分钟，使微生物细胞分散，静置约2030秒，即成10-1的土壤悬液。 另取装有9ml无菌水的试管，编号为10-2、10-3、10-4、10-5、10-6及1
3、0-7，用无菌吸管吸取10-1土壤悬液lml，加入编号10-2的无菌试管中，吹吸三次，使之混合均匀，即成10-2的土壤稀释液。再用另一支吸管吸取10-2试管中的土壤稀释液1ml，加入编号10-3的无菌试管中，轻轻摇动，使之混合均匀，即成10-3的土壤稀释液，一定要每次更换一支无菌吸管（连续稀释）。同法依次分别稀释成10-4、10-5和10-6等一系列稀释度菌悬液。,平板制作 将无菌培养皿编上10-5、10-6号码，每一号码设三个重复，用1ml无菌吸管按无菌操作要求吸10-6稀释液各1ml，分别放入编号10-6的三个培养皿中。同法吸取10-5稀释液各1ml，分别放入编号10-5的三个培养皿中。（
4、细菌取10-5、10-6，霉菌取10-3、10-4）然后在6个培养皿中分别倒入15ml已融化并且冷却至45左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均匀分布，平置于桌面上，待凝固后即成平板。整个操作过程应严格按照无菌操作。,纯化（平板划线法） 倒平板划线培养挑菌落纯种（纯培养）,isolation plate,实验作业,1在你所实验的培养基平板上长出的菌落属于哪个类群？简述它们的菌落形态特征。 2 计算土壤中微生物的数量。 3 分析讨论你的实验结果。,实验二 理化因子对微生物的影响,实验目的,1 了解紫外线对微生物生长的影响。 2 了解不同化学药剂对微生物生长的影响。,实验原
5、理,1 紫外线对微生物有明显的致死作用，使细菌致死的紫外线波长是200-310nm，而以260nm左右的紫外线具有最高杀菌效应。作用机理是诱导胸腺嘧啶二聚体的生成，从而抑制DNA的复制。经紫外线照射受损伤的细菌细胞，如立即暴露于可见光下，则有一部分可恢复正常活力，称为光复活现象。,2 一些化学药剂对微生物的生长有抑制或杀死作用，因此，在实验室内及生产上常利用某些有效的化学药剂进行杀菌或消毒。不同的化学药剂对不同的细菌，杀菌能力并不相同，而一种化学药剂对不同细菌的杀菌效果也不一致。,实验材料,1 菌种大肠杆菌、枯草杆菌 2 培养基牛肉膏蛋白胨培养基 3 器材与试剂滤纸、镊子、培养皿、涂棒、化学药
6、剂待定,实验方法,1 紫外线对微生物的影响 倒平板 用无菌吸管取1ml大肠杆菌菌悬液用无菌涂棒涂平板 将培养皿放于紫外灯下照射1min；后打开皿盖，放上纸板，照射2min。盖上皿盖。 取出培养皿，用黑色纸包裹。 37培养1d。观察结果。,2 化学药剂对微生物的影响 在皿底上划分几个区域，标上1、2、3、4等 倒平板 用无菌吸管分别取1ml大肠杆菌、枯草杆菌菌悬液用无菌涂棒涂平板 无菌操作打开皿盖，用无菌镊子夹取一张滤纸片，沾上化学药剂，后放于平板上。 37培养1d。观察结果。如有抑制作用，则滤纸片周围有抑菌圈，根据抑菌圈的大小表示抑菌剂的作用强弱。,实验作业,1 观察实验结果，并作图。 2 为
7、什么75%的乙醇对革兰氏阴性菌的作用效果好于革兰氏阳性菌？ 3 分析你的实验结果。,实验三 环境条件对微生物生长的影响,（一）实验目的,了解温度、 pH对微生物生长的影响,（二）实验原理,微生物生长繁殖要有一定的温度条件，不同的微生物要求不同的生长温度范围。在生长范围内又可分为最高，最适和最低三种生长温度。如温度超过最高或最低温度时，微生物均不能生长，或处于休眠状态，甚至死亡。 微生物的生长繁殖，需要一定的pH值范围，即环境中的氢离子浓度对微生物的生长繁殖有直接的影响，大多数细菌和放线菌适于中性或微碱性环境，酵母菌和霉菌则适于在弱酸性或酸性环境中生长，当环境的pH值超过其适于生长的范围时，微生
8、物的生长则受到明显的阻抑或不能生长。,（三）实验器材,1.菌种 枯草杆菌、大肠杆菌 2.培养基牛肉膏蛋白胨培养基 3.器具 酒精灯、吸管、接种环、冰箱、恒温箱等,（四）实验步骤,1 微生物生长的最适温度 取10支装有牛肉膏蛋白胨培养基试管（每管5ml），分别标明15、25、30、37、50。每个温度标记2管。 分别接入大肠杆菌、枯草杆菌各一环，混匀。 将上述试管分别放入不同的温度培养箱中培养1d，目测观察结果。,2 pH对微生物生长的影响 配牛肉膏蛋白胨培养基，调成不同pH值的培养液，分别为3、5、7、9、11；每种装2管，每管5ml，灭菌备用。 按无菌操作方法，分别于各管中接大肠杆菌、枯草杆菌一环，摇匀。 将上述接种好的培养物置于37下培养。24小时后观察记载实验结果。,（五）实验作业,注：生长情况记载可采用：不生长（）；生长一般（）；生长良好（）。 2高温和低温对微生物生长各有何影响？为什么？,1记载实验结果，填入下表。,3记载结果，填入下表：,注：根据混浊程度，确定生长情况：不生长（-）；稍 生长（）；生长一般（）；生长良好（）4氢离子浓度对微生物生长有何影响？,实验安排,
