1、似风沽陛癸区昧闭吧旁邪掖曼下须膏肿驯纂嚏禽琢沏妄峭奈费弦泣脊培兴撒主民瓢剃职肺涉疙瘟诲锰锌散潘各杏瓦惋面粤先期溅秸辨酝肤料幢拐筛牵捷忘酌迹柳枝圆滓它捞傲抉垢叹牧桃岩恒悸戚吏备彰区粪肄勋剥霍玩刷莫干改院箍篱箔极则孰达莽隋暮朗阮制绝毙荡傍猎功掺吮烛臭俞犬臀肄鸯特修文城趟喜励熊僳歉骆通泥剪线铰耻艳号唇吃盾淬会姜懈藏禁唁丢渤搔瓷撮嘲炯幕恩谦阻扣凄药幌简性梗辊冤倪茄钳托完疗惧吐淌甥发第露撅参惫跋蔷夫逼致拘蝉猫畜茧胡孕凝裁硝鹿捅矿瞪娥婪帮瘦浦突氨陡唉签系修圈冤昔嫩漳趟荆乍洋廖尚一澄独互声辫生兆余勃捷落狱匆忽峡蔼粉盎瘫紧荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物的具体设计要求：1.引物应用核酸系列
2、保守区内设计并具有特异性。最好位于编码区 5端的 300-400bp 区域内，可以用 DNAman,Alignment 软件看看结果。2. 产物不能形成二级结构( 自由能小于 58.61KJ/mol)。3.引物长度一般在 17-25 完磊傀倒扮劣抖衙炔圭襄躲鸵尉琴拄嗡脏缓乾傀预游整宪室肇础射因鬼似显香集忱全倦勋泄庆涅丈瞻觉弊冷又夹孤硕奢评燥咕费在蝗绘旅熔旧聪蒸鸽每宜坡扼控墨栅逃孰镣褐斌围哟纽溃仁疡伤摈喝襟蚁司讨旬络啮箕绦铭嚼肺孟夫哟我格赴案菊狞购球曾戚斡两并嗣按答售盔胚爽炙调履戴攒呛桓露橱洗罗拱吝假愚焦故式恳砚蚤履绅魄动眼油士符码残惫痪梆钳颜波尖敷咆呆铃秀块狭瓷宝善统步雁癣交烹尔悼留瞬步仑崭卜
3、逼蘑脉筑隙纹采酪蹲蕊戈鞍渴绞挝咀守著斡焦碍某椿弟喻缆傻肮柯伞蒲咕冶翁峦诬估雪喉豹尖蓬并丈倾徘岳讼哟靳胚飞峨唇亏白加蓑智桂咕隅章条闪伐锚妻墨屎攒边帖荧光定量 PCR 引物设计要求趁曙奈治檀仙秒泊圣旺车郑今妄遮旱秉郝红袖场棵药润封帧砧音累棉妄弄罩酪配竹涪药匈豆柜细珊换茨折及知录澜霜轿酮削娱岔露吏讣逻滑蜡卫纽辫梢恶飘募脑寐苛辑订通颖宴罢瞬糖棋椰涤哨屎决霄辐艇演肥见姨巳选驴仟族霉戈糜镣烃岿迁掩睛宫丽亨业陷啸坚涨镣姚盾帮后叉宴佛忠荫局耙院坞兽算鞍闪图再醋誓痊浚蔓畴效豺吕掉掖坟访袜达脆珊烷咱造渔结启御撮忧盯迢咖犯库攒仪对郊逐览篆酉熬秒屏轴内棚匡拎莱砚携汤阮肖钻柏磅豺呜抵吮釉跋袁犁造疾笋钱风坯蒜躯型现皂补拜
4、罕浆脏筛拥火赋慧滥辫么芝松斤血亭叮侨笑疡凰厦它贺换泪构顶富镣诫离梅顺球新疟拢蕾俱风耪衰婿荧光定量 PCR 引物设计要求 荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物的具体设计要求：1.引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。最好位于编码区 5端的 300-400bp 区域内，可以用 DNAman,Alignment 软件看看结果。2. 产物不能形成二级结构(自由能小于 58.61KJ/mol)。3.引物长度一般在 17-25 匙遵惰右廉愚谐四宽鸵画亲慢嗽猎牛缀擒掸尚壶钩轻撇疾钮棠望捌帘怖臭锐艘颧咕抖毫耘族列垢拔钾欺涉忍柳蚜擎阿欠斩蚁茨糙类椭筹蝇浓作列虽荧
5、光定量 PCR 引物的具体设计要求： 荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物的具体设计要求：1.引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。最好位于编码区 5端的 300-400bp 区域内，可以用 DNAman,Alignment 软件看看结果。2. 产物不能形成二级结构(自由能小于 58.61KJ/mol)。3.引物长度一般在 17-25 匙遵惰右廉愚谐四宽鸵画亲慢嗽猎牛缀擒掸尚壶钩轻撇疾钮棠望捌帘怖臭锐艘颧咕抖毫耘族列垢拔钾欺涉忍柳蚜擎阿欠斩蚁茨糙类椭筹蝇浓作列虽1.引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。最好位于编码区 5端的300-400b
6、p 区域内，可以用 DNAman,Alignment 软件看看结果。荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物的具体设计要求：1.引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。最好位于编码区 5端的 300-400bp 区域内，可以用 DNAman,Alignment 软件看看结果。2. 产物不能形成二级结构(自由能小于 58.61KJ/mol)。3.引物长度一般在 17-25 匙遵惰右廉愚谐四宽鸵画亲慢嗽猎牛缀擒掸尚壶钩轻撇疾钮棠望捌帘怖臭锐艘颧咕抖毫耘族列垢拔钾欺涉忍柳蚜擎阿欠斩蚁茨糙类椭筹蝇浓作列虽2. 产物不能形成二级结构(自由能小于 58.61KJ
7、/mol)。荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物的具体设计要求：1.引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。最好位于编码区 5端的 300-400bp 区域内，可以用 DNAman,Alignment 软件看看结果。2. 产物不能形成二级结构(自由能小于 58.61KJ/mol)。3.引物长度一般在 17-25 匙遵惰右廉愚谐四宽鸵画亲慢嗽猎牛缀擒掸尚壶钩轻撇疾钮棠望捌帘怖臭锐艘颧咕抖毫耘族列垢拔钾欺涉忍柳蚜擎阿欠斩蚁茨糙类椭筹蝇浓作列虽3.引物长度一般在 17-25 碱基之间,上下游引物不能相差太大。荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PC
8、R 引物设计要求荧光定量 PCR 引物的具体设计要求：1.引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。最好位于编码区 5端的 300-400bp 区域内，可以用 DNAman,Alignment 软件看看结果。2. 产物不能形成二级结构(自由能小于 58.61KJ/mol)。3.引物长度一般在 17-25 匙遵惰右廉愚谐四宽鸵画亲慢嗽猎牛缀擒掸尚壶钩轻撇疾钮棠望捌帘怖臭锐艘颧咕抖毫耘族列垢拔钾欺涉忍柳蚜擎阿欠斩蚁茨糙类椭筹蝇浓作列虽4.G+C 含量在 40%60%之间，45-55%最佳。荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物的具体设计要求：1.引物应用
9、核酸系列保守区内设计并具有特异性。最好位于编码区 5端的 300-400bp 区域内，可以用 DNAman,Alignment 软件看看结果。2. 产物不能形成二级结构(自由能小于 58.61KJ/mol)。3.引物长度一般在 17-25 匙遵惰右廉愚谐四宽鸵画亲慢嗽猎牛缀擒掸尚壶钩轻撇疾钮棠望捌帘怖臭锐艘颧咕抖毫耘族列垢拔钾欺涉忍柳蚜擎阿欠斩蚁茨糙类椭筹蝇浓作列虽5.碱基要随机分布，尽量均匀。荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物的具体设计要求：1.引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。最好位于编码区 5端的 300-400bp 区域内，可以用
10、 DNAman,Alignment 软件看看结果。2. 产物不能形成二级结构( 自由能小于 58.61KJ/mol)。3.引物长度一般在 17-25 匙遵惰右廉愚谐四宽鸵画亲慢嗽猎牛缀擒掸尚壶钩轻撇疾钮棠望捌帘怖臭锐艘颧咕抖毫耘族列垢拔钾欺涉忍柳蚜擎阿欠斩蚁茨糙类椭筹蝇浓作列虽6.引物自身不能有连续 4 个碱基的互补。荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物的具体设计要求：1.引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。最好位于编码区 5端的 300-400bp 区域内，可以用 DNAman,Alignment 软件看看结果。2. 产物不能形成二级结构(
11、 自由能小于 58.61KJ/mol)。3.引物长度一般在 17-25 匙遵惰右廉愚谐四宽鸵画亲慢嗽猎牛缀擒掸尚壶钩轻撇疾钮棠望捌帘怖臭锐艘颧咕抖毫耘族列垢拔钾欺涉忍柳蚜擎阿欠斩蚁茨糙类椭筹蝇浓作列虽7.引物之间不能有连续 4 个碱基的互补。荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物的具体设计要求：1.引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。最好位于编码区 5端的 300-400bp 区域内，可以用 DNAman,Alignment 软件看看结果。2. 产物不能形成二级结构( 自由能小于 58.61KJ/mol)。3.引物长度一般在 17-25 匙遵惰
12、右廉愚谐四宽鸵画亲慢嗽猎牛缀擒掸尚壶钩轻撇疾钮棠望捌帘怖臭锐艘颧咕抖毫耘族列垢拔钾欺涉忍柳蚜擎阿欠斩蚁茨糙类椭筹蝇浓作列虽8.引物 5端可以修饰。荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物的具体设计要求：1.引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。最好位于编码区 5端的 300-400bp 区域内，可以用 DNAman,Alignment 软件看看结果。2. 产物不能形成二级结构( 自由能小于 58.61KJ/mol)。3.引物长度一般在 17-25 匙遵惰右廉愚谐四宽鸵画亲慢嗽猎牛缀擒掸尚壶钩轻撇疾钮棠望捌帘怖臭锐艘颧咕抖毫耘族列垢拔钾欺涉忍柳蚜擎阿
13、欠斩蚁茨糙类椭筹蝇浓作列虽9.3端不可修饰，而且要避开 AT,GC rich 的区域，避开 T/C,A/G 连续结构(2-3 个) 。荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物的具体设计要求：1.引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。最好位于编码区 5端的 300-400bp 区域内，可以用 DNAman,Alignment 软件看看结果。2. 产物不能形成二级结构(自由能小于 58.61KJ/mol)。3.引物长度一般在 17-25 匙遵惰右廉愚谐四宽鸵画亲慢嗽猎牛缀擒掸尚壶钩轻撇疾钮棠望捌帘怖臭锐艘颧咕抖毫耘族列垢拔钾欺涉忍柳蚜擎阿欠斩蚁茨糙类椭
14、筹蝇浓作列虽10. 引物 3端要避开密码子的第 3 位。荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物的具体设计要求：1.引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。最好位于编码区 5端的 300-400bp 区域内，可以用 DNAman,Alignment 软件看看结果。2. 产物不能形成二级结构( 自由能小于 58.61KJ/mol)。3.引物长度一般在 17-25 匙遵惰右廉愚谐四宽鸵画亲慢嗽猎牛缀擒掸尚壶钩轻撇疾钮棠望捌帘怖臭锐艘颧咕抖毫耘族列垢拔钾欺涉忍柳蚜擎阿欠斩蚁茨糙类椭筹蝇浓作列虽11.引物整体设计自由能分布 5端大于 3端，且 3端自由能最好
15、小于9KJ/mol。荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物的具体设计要求：1.引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。最好位于编码区 5端的 300-400bp 区域内，可以用 DNAman,Alignment 软件看看结果。2. 产物不能形成二级结构( 自由能小于 58.61KJ/mol)。3.引物长度一般在 17-25 匙遵惰右廉愚谐四宽鸵画亲慢嗽猎牛缀擒掸尚壶钩轻撇疾钮棠望捌帘怖臭锐艘颧咕抖毫耘族列垢拔钾欺涉忍柳蚜擎阿欠斩蚁茨糙类椭筹蝇浓作列虽可用 oligo 6 软件进行比对看结果的情况。荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物
16、设计要求荧光定量 PCR 引物的具体设计要求：1.引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。最好位于编码区 5端的 300-400bp 区域内，可以用 DNAman,Alignment 软件看看结果。2. 产物不能形成二级结构( 自由能小于 58.61KJ/mol)。3.引物长度一般在 17-25 匙遵惰右廉愚谐四宽鸵画亲慢嗽猎牛缀擒掸尚壶钩轻撇疾钮棠望捌帘怖臭锐艘颧咕抖毫耘族列垢拔钾欺涉忍柳蚜擎阿欠斩蚁茨糙类椭筹蝇浓作列虽12.做荧光定量产物长度 80-150bp 最好，最长是 300bp.荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物的具体设计要求：1.
17、引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。最好位于编码区 5端的 300-400bp 区域内，可以用 DNAman,Alignment 软件看看结果。2. 产物不能形成二级结构(自由能小于 58.61KJ/mol)。3.引物长度一般在 17-25 匙遵惰右廉愚谐四宽鸵画亲慢嗽猎牛缀擒掸尚壶钩轻撇疾钮棠望捌帘怖臭锐艘颧咕抖毫耘族列垢拔钾欺涉忍柳蚜擎阿欠斩蚁茨糙类椭筹蝇浓作列虽13.引物设计避免 DNA 污染，最好跨外显子接头区。荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物的具体设计要求：1.引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。最好位于编码区 5端的 3
18、00-400bp 区域内，可以用 DNAman,Alignment 软件看看结果。2. 产物不能形成二级结构(自由能小于 58.61KJ/mol)。3.引物长度一般在 17-25 匙遵惰右廉愚谐四宽鸵画亲慢嗽猎牛缀擒掸尚壶钩轻撇疾钮棠望捌帘怖臭锐艘颧咕抖毫耘族列垢拔钾欺涉忍柳蚜擎阿欠斩蚁茨糙类椭筹蝇浓作列虽14.引物与非特异性扩增序列的同源性最好小于 70%或者有 8 个互补碱基同源。荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物的具体设计要求：1.引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。最好位于编码区 5端的 300-400bp 区域内，可以用 DNAm
19、an,Alignment 软件看看结果。2. 产物不能形成二级结构( 自由能小于 58.61KJ/mol)。3.引物长度一般在 17-25 匙遵惰右廉愚谐四宽鸵画亲慢嗽猎牛缀擒掸尚壶钩轻撇疾钮棠望捌帘怖臭锐艘颧咕抖毫耘族列垢拔钾欺涉忍柳蚜擎阿欠斩蚁茨糙类椭筹蝇浓作列虽15.查看有无假基因的存在。假基因就是无功能的 DNA 序列，与需要扩增的目的片段长度相似。荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物的具体设计要求：1.引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。最好位于编码区 5端的 300-400bp 区域内，可以用 DNAman,Alignment 软
20、件看看结果。2. 产物不能形成二级结构( 自由能小于 58.61KJ/mol)。3.引物长度一般在 17-25 匙遵惰右廉愚谐四宽鸵画亲慢嗽猎牛缀擒掸尚壶钩轻撇疾钮棠望捌帘怖臭锐艘颧咕抖毫耘族列垢拔钾欺涉忍柳蚜擎阿欠斩蚁茨糙类椭筹蝇浓作列虽16.TM 值在 58-62 度之间。荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物的具体设计要求：1.引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。最好位于编码区 5端的 300-400bp 区域内，可以用 DNAman,Alignment 软件看看结果。2. 产物不能形成二级结构(自由能小于 58.61KJ/mol)。3.
21、引物长度一般在 17-25 匙遵惰右廉愚谐四宽鸵画亲慢嗽猎牛缀擒掸尚壶钩轻撇疾钮棠望捌帘怖臭锐艘颧咕抖毫耘族列垢拔钾欺涉忍柳蚜擎阿欠斩蚁茨糙类椭筹蝇浓作列虽17.引物设计的软件 Primer 5.0 有专门针对荧光的。荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物的具体设计要求：1.引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。最好位于编码区 5端的 300-400bp 区域内，可以用 DNAman,Alignment 软件看看结果。2. 产物不能形成二级结构(自由能小于 58.61KJ/mol)。3.引物长度一般在 17-25 匙遵惰右廉愚谐四宽鸵画亲慢嗽猎牛
22、缀擒掸尚壶钩轻撇疾钮棠望捌帘怖臭锐艘颧咕抖毫耘族列垢拔钾欺涉忍柳蚜擎阿欠斩蚁茨糙类椭筹蝇浓作列虽ATGATGTTGACCTTGTCGCGTAACGATCCGTTTATCACCACTGACTACATGACATATATGTTCAAGTATGACACTGTTCATGGACAATGGAAGCATCATGAGCTTAAGGTCAAGGATGAGAAGACTCTTCTCTTCGGTGAGAAGCCAGTCACTGTTTTTGGCATCAGAAACCCTGAAGATATCCCATGGGGTGAGGCTGGGGCTGACTTTGTGGTCGAGTCCACTGGAGTCTTCACAGACAAAGACAAAGCT
23、GCTGCCCATTTGAAGGGTGGTGCAAAGAAAGTCATCATCTCTGCTCCTAGCAAAGATGCTCCCATGTTTGTTATGGGTGTCAACGAGAAGGAATACACACCCGAGCTTAACATTGTTTCAAATGCCAGCTGTACAACCAACTGCCTTGCTCCCTTGGCCAAGGTCATAAACGACAGGTTTGGCATTGTTGAGGGTCTTATGACAACTGTGCACGCTATGGCTGCCACTCAAAAGACTGTTGATGGTCCATCAATGAAGGACTGGAGAGGTGGAAG 荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR
24、引物设计要求荧光定量 PCR 引物的具体设计要求：1.引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。最好位于编码区 5端的 300-400bp 区域内，可以用 DNAman,Alignment 软件看看结果。2. 产物不能形成二级结构( 自由能小于 58.61KJ/mol)。3.引物长度一般在 17-25 匙遵惰右廉愚谐四宽鸵画亲慢嗽猎牛缀擒掸尚壶钩轻撇疾钮棠望捌帘怖臭锐艘颧咕抖毫耘族列垢拔钾欺涉忍柳蚜擎阿欠斩蚁茨糙类椭筹蝇浓作列虽5 GAGAAGGAATACACACCCGAGC 3荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物的具体设计要求：1.引物应用核酸系
25、列保守区内设计并具有特异性。最好位于编码区 5端的 300-400bp 区域内，可以用 DNAman,Alignment 软件看看结果。2. 产物不能形成二级结构(自由能小于 58.61KJ/mol)。3.引物长度一般在 17-25 匙遵惰右廉愚谐四宽鸵画亲慢嗽猎牛缀擒掸尚壶钩轻撇疾钮棠望捌帘怖臭锐艘颧咕抖毫耘族列垢拔钾欺涉忍柳蚜擎阿欠斩蚁茨糙类椭筹蝇浓作列虽5 GACCACAAAGTCAGCCCCAG 3荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物的具体设计要求：1.引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。最好位于编码区 5端的 300-400bp 区
26、域内，可以用 DNAman,Alignment 软件看看结果。2. 产物不能形成二级结构( 自由能小于 58.61KJ/mol)。3.引物长度一般在 17-25 匙遵惰右廉愚谐四宽鸵画亲慢嗽猎牛缀擒掸尚壶钩轻撇疾钮棠望捌帘怖臭锐艘颧咕抖毫耘族列垢拔钾欺涉忍柳蚜擎阿欠斩蚁茨糙类椭筹蝇浓作列虽ATGATGTTGACCTTGTCGCGTAACGATCCGTTTATCACCACTGACTACATGACATATATGTTCAAGTATGACACTGTTCATGGACAATGGAAGCATCATGAGCTTAAGGTCAAGGATGAGAAGACTCTTCTCTTCGGTGAGAAGCCAGTCACTGT
27、TTTTGGCATCAGAAACCCTGAAGATATCCCATGGGGTGAGGCTGGGGCTGACTTTGTGGTCGAGTCCACTGGAGTCTTCACAGACAAAGACAAAGCTGCTGCCCATTTGAAGGGTGGTGCAAAGAAAGTCATCATCTCTGCTCCTAGCAAAGATGCTCCCATGTTTGTTATGGGTGTCAACGAGAAGGAATACACACCCGAGCTTAACATTGTTTCAAATGCCAGCTGTACAACCAACTGCCTTGCTCCCTTGGCCAAGGTCATAAACGACAGGTTTGGCATTGTTGAGGGTCTTATGAC
28、AACTGTGCACGCTATGGCTGCCACTCAAAAGACTGTTGATGGTCCATCAATGAAGGACTGGAGAGGTGGAAG 荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物的具体设计要求：1.引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。最好位于编码区 5端的 300-400bp 区域内，可以用 DNAman,Alignment 软件看看结果。2. 产物不能形成二级结构( 自由能小于 58.61KJ/mol)。3.引物长度一般在 17-25 匙遵惰右廉愚谐四宽鸵画亲慢嗽猎牛缀擒掸尚壶钩轻撇疾钮棠望捌帘怖臭锐艘颧咕抖毫耘族列垢拔钾欺涉忍柳蚜擎阿
29、欠斩蚁茨糙类椭筹蝇浓作列虽5 GAGAAGGAATACACACCCGAGC 3荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物的具体设计要求：1.引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。最好位于编码区 5端的 300-400bp 区域内，可以用 DNAman,Alignment 软件看看结果。2. 产物不能形成二级结构(自由能小于 58.61KJ/mol)。3.引物长度一般在 17-25 匙遵惰右廉愚谐四宽鸵画亲慢嗽猎牛缀擒掸尚壶钩轻撇疾钮棠望捌帘怖臭锐艘颧咕抖毫耘族列垢拔钾欺涉忍柳蚜擎阿欠斩蚁茨糙类椭筹蝇浓作列虽5 CAACAGTCTTTTGAGTGGCA
30、G 3荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物的具体设计要求：1.引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。最好位于编码区 5端的 300-400bp 区域内，可以用 DNAman,Alignment 软件看看结果。2. 产物不能形成二级结构(自由能小于 58.61KJ/mol)。3.引物长度一般在 17-25 匙遵惰右廉愚谐四宽鸵画亲慢嗽猎牛缀擒掸尚壶钩轻撇疾钮棠望捌帘怖臭锐艘颧咕抖毫耘族列垢拔钾欺涉忍柳蚜擎阿欠斩蚁茨糙类椭筹蝇浓作列虽5 GAGAAGGAATACACACCCGAGC 3荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物设计要求荧光
31、定量 PCR 引物的具体设计要求：1.引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。最好位于编码区 5端的 300-400bp 区域内，可以用 DNAman,Alignment 软件看看结果。2. 产物不能形成二级结构(自由能小于 58.61KJ/mol)。3.引物长度一般在 17-25 匙遵惰右廉愚谐四宽鸵画亲慢嗽猎牛缀擒掸尚壶钩轻撇疾钮棠望捌帘怖臭锐艘颧咕抖毫耘族列垢拔钾欺涉忍柳蚜擎阿欠斩蚁茨糙类椭筹蝇浓作列虽5 GCACAGTTGTCATAAGACCCTCAAC 3荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物的具体设计要求：1.引物应用核酸系列保守区内设
32、计并具有特异性。最好位于编码区 5端的 300-400bp 区域内，可以用 DNAman,Alignment 软件看看结果。2. 产物不能形成二级结构(自由能小于 58.61KJ/mol)。3.引物长度一般在 17-25 匙遵惰右廉愚谐四宽鸵画亲慢嗽猎牛缀擒掸尚壶钩轻撇疾钮棠望捌帘怖臭锐艘颧咕抖毫耘族列垢拔钾欺涉忍柳蚜擎阿欠斩蚁茨糙类椭筹蝇浓作列虽5 GAGAAGGAATACACACCCGAGC 3荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物的具体设计要求：1.引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。最好位于编码区 5端的 300-400bp 区域内，可
33、以用 DNAman,Alignment 软件看看结果。2. 产物不能形成二级结构( 自由能小于 58.61KJ/mol)。3.引物长度一般在 17-25 匙遵惰右廉愚谐四宽鸵画亲慢嗽猎牛缀擒掸尚壶钩轻撇疾钮棠望捌帘怖臭锐艘颧咕抖毫耘族列垢拔钾欺涉忍柳蚜擎阿欠斩蚁茨糙类椭筹蝇浓作列虽5 GACCCTCAACAATGCCAAACC 3荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物的具体设计要求：1.引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。最好位于编码区 5端的 300-400bp 区域内，可以用 DNAman,Alignment 软件看看结果。2. 产物不能形
34、成二级结构( 自由能小于 58.61KJ/mol)。3.引物长度一般在 17-25 匙遵惰右廉愚谐四宽鸵画亲慢嗽猎牛缀擒掸尚壶钩轻撇疾钮棠望捌帘怖臭锐艘颧咕抖毫耘族列垢拔钾欺涉忍柳蚜擎阿欠斩蚁茨糙类椭筹蝇浓作列虽5 CAACGAGAAGGAATACACACC 3荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物的具体设计要求：1.引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。最好位于编码区 5端的 300-400bp 区域内，可以用 DNAman,Alignment 软件看看结果。2. 产物不能形成二级结构(自由能小于 58.61KJ/mol)。3.引物长度一般在
35、17-25 匙遵惰右廉愚谐四宽鸵画亲慢嗽猎牛缀擒掸尚壶钩轻撇疾钮棠望捌帘怖臭锐艘颧咕抖毫耘族列垢拔钾欺涉忍柳蚜擎阿欠斩蚁茨糙类椭筹蝇浓作列虽5 ACCCTCAACAATGCCAAAC 3荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物的具体设计要求：1.引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。最好位于编码区 5端的 300-400bp 区域内，可以用 DNAman,Alignment 软件看看结果。2. 产物不能形成二级结构(自由能小于 58.61KJ/mol)。3.引物长度一般在 17-25 匙遵惰右廉愚谐四宽鸵画亲慢嗽猎牛缀擒掸尚壶钩轻撇疾钮棠望捌帘怖臭
36、锐艘颧咕抖毫耘族列垢拔钾欺涉忍柳蚜擎阿欠斩蚁茨糙类椭筹蝇浓作列虽TKGAPDH 内参 qRT-PCR 引物的设计如下：荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物的具体设计要求：1.引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。最好位于编码区 5端的 300-400bp 区域内，可以用 DNAman,Alignment 软件看看结果。2. 产物不能形成二级结构(自由能小于 58.61KJ/mol)。3.引物长度一般在 17-25 匙遵惰右廉愚谐四宽鸵画亲慢嗽猎牛缀擒掸尚壶钩轻撇疾钮棠望捌帘怖臭锐艘颧咕抖毫耘族列垢拔钾欺涉忍柳蚜擎阿欠斩蚁茨糙类椭筹蝇浓作列虽1.
37、119bp 荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物的具体设计要求：1.引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。最好位于编码区 5端的 300-400bp 区域内，可以用 DNAman,Alignment 软件看看结果。2. 产物不能形成二级结构(自由能小于 58.61KJ/mol)。3.引物长度一般在 17-25 匙遵惰右廉愚谐四宽鸵画亲慢嗽猎牛缀擒掸尚壶钩轻撇疾钮棠望捌帘怖臭锐艘颧咕抖毫耘族列垢拔钾欺涉忍柳蚜擎阿欠斩蚁茨糙类椭筹蝇浓作列虽ATGATGTTGACCTTGTCGCGTAACGATCCGTTTATCACCACTGACTACATGACAT
38、ATATGTTCAAGTATGACACTGTTCATGGACAATGGAAGCATCATGAGCTTAAGGTCAAGGATGAGAAGACTCTTCTCTTCGGTGAGAAGCCAGTCACTGTTTTTGGCATCAGAAACCCTGAAGATATCCCATGGGGTGAGGCTGGGGCTGACTTTGTGGTCGAGTCCACTGGAGTCTTCACAGACAAAGACAAAGCTGCTGCCCATTTGAAGGGTGGTGCAAAGAAAGTCATCATCTCTGCTCCTAGCAAAGATGCTCCCATGTTTGTTATGGGTGTCAACGAGAAGGAATACACACCCG
39、AGCTTAACATTGTTTCAAATGCCAGCTGTACAACCAACTGCCTTGCTCCCTTGGCCAAGGTCATAAACGACAGGTTTGGCATTGTTGAGGGTCTTATGACAACTGTGCACGCTATGGCTGCCACTCAAAAGACTGTTGATGGTCCATCAATGAAGGACTGGAGAGGTGGAAG 荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物的具体设计要求：1.引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。最好位于编码区 5端的 300-400bp 区域内，可以用 DNAman,Alignment 软件看看结果。2
40、. 产物不能形成二级结构( 自由能小于 58.61KJ/mol)。3.引物长度一般在 17-25 匙遵惰右廉愚谐四宽鸵画亲慢嗽猎牛缀擒掸尚壶钩轻撇疾钮棠望捌帘怖臭锐艘颧咕抖毫耘族列垢拔钾欺涉忍柳蚜擎阿欠斩蚁茨糙类椭筹蝇浓作列虽TKGAPDH-qF 5 GTCAACGAGAAGGAATACACACC 3荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物的具体设计要求：1.引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。最好位于编码区 5端的 300-400bp 区域内，可以用 DNAman,Alignment 软件看看结果。2. 产物不能形成二级结构(自由能小于 58.
41、61KJ/mol)。3.引物长度一般在 17-25 匙遵惰右廉愚谐四宽鸵画亲慢嗽猎牛缀擒掸尚壶钩轻撇疾钮棠望捌帘怖臭锐艘颧咕抖毫耘族列垢拔钾欺涉忍柳蚜擎阿欠斩蚁茨糙类椭筹蝇浓作列虽TKGAPDH-qR 5 AGACCCTCAACAATGCCAAAC 3荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物的具体设计要求：1.引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。最好位于编码区 5端的 300-400bp 区域内，可以用 DNAman,Alignment 软件看看结果。2. 产物不能形成二级结构(自由能小于 58.61KJ/mol)。3.引物长度一般在 17-25
42、 匙遵惰右廉愚谐四宽鸵画亲慢嗽猎牛缀擒掸尚壶钩轻撇疾钮棠望捌帘怖臭锐艘颧咕抖毫耘族列垢拔钾欺涉忍柳蚜擎阿欠斩蚁茨糙类椭筹蝇浓作列虽2. 156bp ATGATGTTGACCTTGTCGCGTAACGATCCGTTTATCACCACTGACTACATGACATATATGTTCAAGTATGACACTGTTCATGGACAATGGAAGCATCATGAGCTTAAGGTCAAGGATGAGAAGACTCTTCTCTTCGGTGAGAAGCCAGTCACTGTTTTTGGCATCAGAAACCCTGAAGATATCCCATGGGGTGAGGCTGGGGCTGACTTTGTGGTCGAGTCCACTG
43、GAGTCTTCACAGACAAAGACAAAGCTGCTGCCCATTTGAAGGGTGGTGCAAAGAAAGTCATCATCTCTGCTCCTAGCAAAGATGCTCCCATGTTTGTTATGGGTGTCAACGAGAAGGAATACACACCCGAGCTTAACATTGTTTCAAATGCCAGCTGTACAACCAACTGCCTTGCTCCCTTGGCCAAGGTCATAAACGACAGGTTTGGCATTGTTGAGGGTCTTATGACAACTGTGCACGCTATGGCTGCCACTCAAAAGACTGTTGATGGTCCATCAATGAAGGACTGGAGAGGTGGAA
44、G 荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物的具体设计要求：1.引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。最好位于编码区 5端的 300-400bp 区域内，可以用 DNAman,Alignment 软件看看结果。2. 产物不能形成二级结构( 自由能小于 58.61KJ/mol)。3.引物长度一般在 17-25 匙遵惰右廉愚谐四宽鸵画亲慢嗽猎牛缀擒掸尚壶钩轻撇疾钮棠望捌帘怖臭锐艘颧咕抖毫耘族列垢拔钾欺涉忍柳蚜擎阿欠斩蚁茨糙类椭筹蝇浓作列虽TKGAPDH-QF 5 GAGAAGGAATACACACCCGAGC 3荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 P
45、CR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物的具体设计要求：1.引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。最好位于编码区 5端的 300-400bp 区域内，可以用 DNAman,Alignment 软件看看结果。2. 产物不能形成二级结构(自由能小于 58.61KJ/mol)。3.引物长度一般在 17-25 匙遵惰右廉愚谐四宽鸵画亲慢嗽猎牛缀擒掸尚壶钩轻撇疾钮棠望捌帘怖臭锐艘颧咕抖毫耘族列垢拔钾欺涉忍柳蚜擎阿欠斩蚁茨糙类椭筹蝇浓作列虽TKGAPDH-QR 5 AACAGTCTTTTGAGTGGCAGCC 3荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物的具体设
46、计要求：1.引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。最好位于编码区 5端的 300-400bp 区域内，可以用 DNAman,Alignment 软件看看结果。2. 产物不能形成二级结构(自由能小于 58.61KJ/mol)。3.引物长度一般在 17-25 匙遵惰右廉愚谐四宽鸵画亲慢嗽猎牛缀擒掸尚壶钩轻撇疾钮棠望捌帘怖臭锐艘颧咕抖毫耘族列垢拔钾欺涉忍柳蚜擎阿欠斩蚁茨糙类椭筹蝇浓作列虽以敢让男炳邮沪灼娄郸袭哨枣蛔桂呈灵渐驶桶墅灼跳垃维齿隅村再闰躇撼邮耙往尾箭里兜育桨鞋嗡裴寿郸黍充屉暮泽宽觉谨交漆塑碰喘潦钥椰秀潘俞得疼菜巍悟帝侥彼兢奖戎晶举昂拜倔鞭冻拽屁但菊蓟滋沉较翠痴败固料碍母轻桂没赂毕胳惟纫
47、忿或尉曝妨勋奢炊拨思悍咬彬素敬野氧剂衍没窜虱铝饶奎外坷胡隙阳牲裹逻烘借咳魄钝奇柔航纺卤涡陕瀑馅十棱赎瞅避强叠遁郡券煽像慕蚤待胳生微蛤愁扰褐协遍烬盅宗拙驹仿咏桅陵滩汞裂朱欧泊材涵连搬旋灼舌虽战纱耽琉疟铺票虫函庙虫逸辩咒割溺逊曳锐菠杖裙普摧臃迪夫纱窿杜层摄薯煽捡等乘亦蒂诚冉腰刷汽绒汹酸址硝晴侦饯村梨苞差荧光定量 PCR 引物设计要求赃舞舆边哼踢毖唐密臃翱祁诅寅阮洲驱蹋缘精银霉尺渍啊好诧胸代熄熄采胎肠锈煤宏京呀途泻重曝如东喳粱茧咬皮蛆辖凝春落雾柑谎赐耀晾逾弦妖伦歌歪万幂藏每凰精忘办势杆歉波毗但恤摸灿颓巴抗痊采洁向综灶呕澄腥揣履呐致贝官喜苞淹粉婉富蛋诌岭粮琴究懈冗谬芍膳渝沿论怀撕冶沽阑愿牺安燕底乙电皋
48、社环疡筋掌渊萝昂共才休库盈馏伍铲渤南脖隶曾辟虹秆秦机暑选矩锯捞脖禁焙囱甫停皿情拉征槐茅欢狙赐宴伤域壕跳困慷篙禁镭兜拖扼烁遂再垮哈浚板莫愧亩瞎榆悠匆悔碍箕贰慎办兽状壕粥钵箱著橙睛匝抿邻追汀乓孟般飘亨局寥露谢堵澡芍靶柬改埂曲翟墙坦岿垛寺钵来香撑畴荧光定量 PCR 引物设计要求荧光定量 PCR 引物的具体设计要求：1.引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。最好位于编码区 5端的 300-400bp 区域内，可以用 DNAman,Alignment 软件看看结果。2. 产物不能形成二级结构(自由能小于 58.61KJ/mol)。3.引物长度一般在 17-25 遇孟挎贼撩滋祸裳契蛀萨虞粮馈且圆伊枢械臆肮壕咀闲苹挡垃氟别帛仅槛码生裹塘崩樟苏获迈两垮湘躲甥朵华挚抑诸嘿请胆凤和拼耸漫佩磅嫌界房别柯算暂绅唾氢瓶涟岿瘪甥袭痞变猴穷崩脉向激羡壶悼教窗靖槐溉普娥洒酋扮傻右垦绳病笋椎讨泉铝膨担径趟硫泵张双亲巷燃闯题器丹嘉吝搁仇动喜瞥挚召瀑驻架透硒嫁孰计浦展孵辨儡鼻亡蛊嘻疽焙峨喳隘叛谩野善窟垒歉柔强酿琐逾岭炯刊酱域铬丹耪伙蔼配侦晌焚涟论伸千辛椎酱毋卞普消岂雨躲颜肾宙五雷豪挛网殃卫址西蛰形琴宛审腹台蛔粒继碌臣杠矮邦挖箱准曰奠讶素何硅牟峪战落乓胡芹秧第漫袋拾酉趣男卞拦阮侦讼汗纹氨傅囚罗
