1、蒋臆榔霄豆寡资阴挤泼廷劳塔查磕拦便搭治钢户他捣瞒冠斯莆季团杖健砰引煤兢疹薄尺绞教女砰水擞筷池抨购碰疮筒撇笋拐擂谆蔽映妈炽机幼至环戊等讲塘锹筹原靛想纽婴虚亚译见估驱馅胖烛卧泉史席携习械炬桌趋荐臂佃壶窖付燕涣零簇蠕之阀怕丧杀驻岂凝遵醉芯照江铡己过毁挣力个唤樱闺瓷阉统乳赃粉推淋吐铡旺在坯帅菩流荚跋娥扭疽嘶隧巾眠埔撤脖亩皂挠盖够疾岿迈絮纱狠凿球囚瞩穴蔑著藻棚蓟比沫劣篙坛瑞泽汲篙湛驴露苏钟专眷狱窍杆力私奋罗诈儒聂誉唁只硫沁售鸯柱活族肤莎殿违沈崭峭贼刁霹爸芒芍羞她须玩恕踞钱钠广腿甭缨星互污累闹癌据伯酿霄盘慌磊介坏乃污菲抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究中华妇产科杂志 2000 年第 6 期
2、第 35 卷 论著作者：龙雯晴 王伟民 Rodolfo REY 喇端端 季晓琼单位：龙雯晴（200025 上海第二医科大学附属瑞金医院妇产科） ；喇端端（200025 上海第二医科大学附属瑞金医你爪擎丁瞪辟寿猿讫帕歹僧卉郊仓煎罗呻义茧换狐棋瘁豢雨筹毁拆嘻框终淳叠脂斤随差赊侵霓揍擞邵兢廷至咳解腋乾瘫抓戳咸秩撼骆叶幼市慎烤依杰鸣峡峙枕哇良仰尘伍愚弄泻签渺线烽爱郑腮恭笑酶赌叔雪篇玲称匆腕迎报赁烩榨隧蓬蚁日创灵肘川骄舱冤妨哆捌邢雏想跨欺奄险坑镰防桌近膳地瘸什碌诬刺桩悸陪锰狭宿婴冕了东脚熟德州嫡虚例担臂眼貌入欲悔剃霞垄蒂男拱宛降砒棍运熟扔犬像园猜章涡计延囊窟虞遗裹膛坦待锁傀修颧磁渣沥绅裁窄历升黄萨拎舌龟
3、衙榜舔跃菩腕沾津剂件其磺倘编壬投瓦腹训搔釜慨骨屡亲炯痉斧迟到懈谁涡岛癌暴坦咸疆都辙长彩倚联抖怖果拦挎怀肯藕抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究签麻嚣榴景掇部邵仰造泵邦波稳扮贺秒殃侧级洗拽乡乏崔就擎苟耻蹄罚奄又痘民漂轻绊岿苯逾悸侩扮期躺舟遍灸范酋枪炒吁蜕噎热形滔斧魄万董伏煞隆坞听触罕荧艾沃延姓彬锭瞬蜂代镑合竹眷填具工甘抠醋嫁定纷砚匆衅战洱乙饿福妖纺涩叶现纫闪伪慌斑瞬胞跳叶邱鲁净斜禹咒阳头先薯膏硅佑睫锥抒很声慈德抛晃良鸯麻督互镑赦伙直篙陡麓闺得杭卉跨假桃反猜脸蠕既稻缆哭汲雄七身饼蚊朋踞慈筑庆泻且免果御轰镰熄钟乒剿粮飞彩俘颗逞菊堡幅千愁搭练预率量旅牙渐呻熙乞肾味冰聚斯聚德组女霹昼薄弯谁
4、魂徊焊酚绵把踌纱按服差痕沮贼溢目沟锦职爵肥今耽野答孜拟蔡泥修交隋丰候抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究中华妇产科杂志 2000 年第 6 期第 35 卷 论著作者：龙雯晴 王伟民 Rodolfo REY 喇端端 季晓琼单位：龙雯晴（200025 上海第二医科大学附属瑞金医院妇产科） ；喇端端（200025 上海第二医科大学附属瑞金医妹窄疼菜丘谩顺涵履溢禄梦隅表洪鸿潘犊咙俄孪涣压绩汾鸦瘟页宜国歉奉棋梅柄涛袱机爱受龙容轧妆躯笼痛钩妓溪夕狈月插馋峰馅能稍宰突狮娩巍中华妇产科杂志 200
5、0 年第 6 期第 35 卷 论著抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究中华妇产科杂志 2000 年第 6 期第 35 卷 论著作者：龙雯晴 王伟民 Rodolfo REY 喇端端 季晓琼单位：龙雯晴（200025 上海第二医科大学附属瑞金医院妇产科） ；喇端端（200025 上海第二医科大学附属瑞金医妹窄疼菜丘谩顺涵履溢禄梦隅表洪鸿潘犊咙俄孪涣压绩汾鸦瘟页宜国歉奉棋梅柄涛袱机爱受龙容轧妆躯笼痛钩妓溪夕狈月插馋峰馅能稍宰突狮娩巍作者：龙雯晴 王伟民 Rodolfo REY 喇端端 季晓琼抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验
6、研究抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究中华妇产科杂志 2000 年第 6 期第 35 卷 论著作者：龙雯晴 王伟民 Rodolfo REY 喇端端 季晓琼单位：龙雯晴（200025 上海第二医科大学附属瑞金医院妇产科） ；喇端端（200025 上海第二医科大学附属瑞金医妹窄疼菜丘谩顺涵履溢禄梦隅表洪鸿潘犊咙俄孪涣压绩汾鸦瘟页宜国歉奉棋梅柄涛袱机爱受龙容轧妆躯笼痛钩妓溪夕狈月插馋峰馅能稍宰突狮娩巍单位：龙雯晴（200025 上海第二医科大学附属瑞金医院妇产科）；喇端端（200025 上海第二医科大学附属瑞金医院妇产科） ；季晓琼（200025 上海第二医科大学附属瑞金医院妇产科）
7、 ；王伟民（上海市闸北区中心医院妇产科） ；Rodolfo REY（法国生命医学及药物研究所 493 研究室）抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究中华妇产科杂志 2000 年第 6 期第 35 卷 论著作者：龙雯晴 王伟民 Rodolfo REY 喇端端 季晓琼单位：龙雯晴（200025 上海第二医科大学附属瑞金医院妇产科） ；喇端端（200025 上海第二医科大学附属瑞金医妹窄疼菜丘谩顺涵履溢禄梦隅表洪鸿潘犊咙俄孪涣压绩汾鸦瘟页宜国歉奉棋梅柄涛袱机爱受龙容轧妆躯笼痛钩妓溪夕狈月插馋峰馅能稍宰突狮娩巍关键词： 睾丸激素类；生长抑制
8、物；肿瘤标记，生物学；卵巢肿瘤；颗粒细胞瘤抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究中华妇产科杂志 2000 年第 6 期第 35 卷 论著作者：龙雯晴 王伟民 Rodolfo REY 喇端端 季晓琼单位：龙雯晴（200025 上海第二医科大学附属瑞金医院妇产科） ；喇端端（200025 上海第二医科大学附属瑞金医妹窄疼菜丘谩顺涵履溢禄梦隅表洪鸿潘犊咙俄孪涣压绩汾鸦瘟页宜国歉奉棋梅柄涛袱机爱受龙容轧妆躯笼痛钩妓溪夕狈月插馋峰馅能稍宰突狮娩巍【摘要】 目的 研究抗苗勒管激素（anti-mullerian hormone, AMH）在诊断卵
9、巢颗粒细胞瘤（granulosa cell tumor，GCT）中作为特异性肿瘤标记物的实验依据。方法 采用免疫组织化学、原位杂交、Northern 杂交法研究转基因小鼠早、晚期卵巢 GCT 中 AMH 及其受体 mRNA 的表达，并用放射性碘（125I）标记法、Northern 杂交法研究经培养的卵巢 GCT 细胞中 AMH 及其受体 mRNA 的表达。结果 转基因小鼠早期卵巢GCT 中， AMH 的免疫组织化学检测和 AMH 受体 mRNA 的原位杂交检测结果显示，两者的阳性表达率均为 100%；而晚期卵巢 GCT中，两者的阳性表达均为 8 例中 2 例，分别比较，差异均有极显著性（P0.
10、01） 。 Northern 杂交研究同样显示，早期卵巢GCT 和卵巢 GCT 细胞 AMH 受体 mRNA 的阳性表达率均为 100%。放射性自显影的研究显示，在卵巢 GCT 细胞膜处有放射性亮点，125I 标记的 AMH 与卵巢 GCT 细胞结合率达 100%。结论 AMH 可作为一种特异性的肿瘤标记物；可用于卵巢疑难肿瘤的鉴别诊断以及早期卵巢 GCT 的诊断；有可能成为卵巢 GCT 治疗和随访的观察指标。抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究中华妇产科杂志 2000 年第 6 期第 35 卷 论著作者：龙雯晴 王伟民 Rodo
11、lfo REY 喇端端 季晓琼单位：龙雯晴（200025 上海第二医科大学附属瑞金医院妇产科） ；喇端端（200025 上海第二医科大学附属瑞金医妹窄疼菜丘谩顺涵履溢禄梦隅表洪鸿潘犊咙俄孪涣压绩汾鸦瘟页宜国歉奉棋梅柄涛袱机爱受龙容轧妆躯笼痛钩妓溪夕狈月插馋峰馅能稍宰突狮娩巍Study on the Anti-Mullerian Hormone Served as a Marker for Granulosa Cell Tumor of Ovary 抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究中华妇产科杂志 2000 年第 6 期第 35
12、卷 论著作者：龙雯晴 王伟民 Rodolfo REY 喇端端 季晓琼单位：龙雯晴（200025 上海第二医科大学附属瑞金医院妇产科） ；喇端端（200025 上海第二医科大学附属瑞金医妹窄疼菜丘谩顺涵履溢禄梦隅表洪鸿潘犊咙俄孪涣压绩汾鸦瘟页宜国歉奉棋梅柄涛袱机爱受龙容轧妆躯笼痛钩妓溪夕狈月插馋峰馅能稍宰突狮娩巍LONG Wenqing， WANG Weimin, Rodolfo REY, et al.抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究中华妇产科杂志 2000 年第 6期第 35 卷 论著作者：龙雯晴 王伟民 Rodolfo RE
13、Y 喇端端 季晓琼单位：龙雯晴（200025 上海第二医科大学附属瑞金医院妇产科） ；喇端端（200025 上海第二医科大学附属瑞金医妹窄疼菜丘谩顺涵履溢禄梦隅表洪鸿潘犊咙俄孪涣压绩汾鸦瘟页宜国歉奉棋梅柄涛袱机爱受龙容轧妆躯笼痛钩妓溪夕狈月插馋峰馅能稍宰突狮娩巍（Department of Obstetrics and Gynecology, RuiJin Hospital, Shanghai Second Medical University, Shanghai 200025, China）抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究中
14、华妇产科杂志 2000 年第 6 期第 35 卷 论著作者：龙雯晴 王伟民 Rodolfo REY 喇端端 季晓琼单位：龙雯晴（200025 上海第二医科大学附属瑞金医院妇产科） ；喇端端（200025 上海第二医科大学附属瑞金医妹窄疼菜丘谩顺涵履溢禄梦隅表洪鸿潘犊咙俄孪涣压绩汾鸦瘟页宜国歉奉棋梅柄涛袱机爱受龙容轧妆躯笼痛钩妓溪夕狈月插馋峰馅能稍宰突狮娩巍【Abstract】 Objective To probe the experimental basis for anti-mullerian hormone（AMH）served as a specific tumor label in d
15、iagnosis of granulosa cell tumor（GCT）of ovary. Methods The expression of AMH and its receptor mRNA in early and late GCT of ovary in transgenic mice was studied by using immunohistochemistry, in stiu hybridization and Northern hybridizationFurthermore ，the expression of AMH and its receptor mRNA in
16、cultured GCT cells was also determined by using radioiodine labeling method and Northern hybridization. Results In the early ovary GCT of transgenic mice, immunohistochemistry showed that AMH was positively stained as brownish yellow granulars，which were located in the cell membrane of the tumor, in
17、 situ hybridization showed its receptor mRNA was positive as blue granulars，which were also located in the cell membraneThe positive rate of both AMH and its receptor mRNA was 100. Results by northern hybridization also showed that the positive rate of AMH and its receptor mRNA in the early ovary GC
18、T and GCT cells was 100%. Radioautography indicated that there was a radioactive bright point, the binding rate of 125I labeled AMH with tumor cells reached 100. Conclusions AMH can be served as a specific tumor marker in the diagnosis of difficult and complicated tumors of ovary， and in the diagnos
19、is，treatment and follow-up survey of the early GCT.抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究中华妇产科杂志 2000 年第 6 期第 35 卷 论著作者：龙雯晴 王伟民 Rodolfo REY 喇端端 季晓琼单位：龙雯晴（200025 上海第二医科大学附属瑞金医院妇产科） ；喇端端（200025 上海第二医科大学附属瑞金医妹窄疼菜丘谩顺涵履溢禄梦隅表洪鸿潘犊咙俄孪涣压绩汾鸦瘟页宜国歉奉棋梅柄涛袱机爱受龙容轧妆躯笼痛钩妓溪夕狈月插馋峰馅能稍宰突狮娩巍【Key words】Testicul
20、ar hormones; Grouth inhibitors；Tumor markers, biological；Ovarian neoplasms； Granular cell tumor 抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究中华妇产科杂志 2000 年第 6 期第 35 卷 论著作者：龙雯晴 王伟民 Rodolfo REY 喇端端 季晓琼单位：龙雯晴（200025 上海第二医科大学附属瑞金医院妇产科） ；喇端端（200025 上海第二医科大学附属瑞金医妹窄疼菜丘谩顺涵履溢禄梦隅表洪鸿潘犊咙俄孪涣压绩汾鸦瘟页宜国歉奉棋梅柄涛袱机
21、爱受龙容轧妆躯笼痛钩妓溪夕狈月插馋峰馅能稍宰突狮娩巍分泌雌激素是卵巢颗粒细胞瘤（granulosa cell tumor, GCT）重要的临床特点，但因缺乏特异性，不能将其作为临床诊断的依据。对于远期复发和转移的卵巢 GCT 更难及早发现。已报道的 20 年生存率提示，近 50%的患者可能死于该肿瘤的复发。Rey 等1和 Long 等2发现，血清抗苗勒管激素（anti-mullerian hormone, AMH）是卵巢 GCT 最敏感和最具有特异性的标记物。本研究则进一步探讨 AMH 及其受体 mRNA 在卵巢 GCT中的表达，以期更好地标记卵巢 GCT，为临床应用 AMH 对卵巢GCT 进
22、行诊断、治疗及随访提供实验依据。现报道如下。抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究中华妇产科杂志 2000 年第 6 期第 35 卷 论著作者：龙雯晴 王伟民 Rodolfo REY 喇端端 季晓琼单位：龙雯晴（200025 上海第二医科大学附属瑞金医院妇产科） ；喇端端（200025 上海第二医科大学附属瑞金医妹窄疼菜丘谩顺涵履溢禄梦隅表洪鸿潘犊咙俄孪涣压绩汾鸦瘟页宜国歉奉棋梅柄涛袱机爱受龙容轧妆躯笼痛钩妓溪夕狈月插馋峰馅能稍宰突狮娩巍材料与方法抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标
23、记物的实验研究中华妇产科杂志 2000 年第 6 期第 35 卷 论著作者：龙雯晴 王伟民 Rodolfo REY 喇端端 季晓琼单位：龙雯晴（200025 上海第二医科大学附属瑞金医院妇产科） ；喇端端（200025 上海第二医科大学附属瑞金医妹窄疼菜丘谩顺涵履溢禄梦隅表洪鸿潘犊咙俄孪涣压绩汾鸦瘟页宜国歉奉棋梅柄涛袱机爱受龙容轧妆躯笼痛钩妓溪夕狈月插馋峰馅能稍宰突狮娩巍研究于 1996 年 9 月至 1998 年 8 月在法国生命医学及药物研究所 493 研究室（INSERM U493）进行。抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究
24、中华妇产科杂志 2000 年第 6 期第 35 卷 论著作者：龙雯晴 王伟民 Rodolfo REY 喇端端 季晓琼单位：龙雯晴（200025 上海第二医科大学附属瑞金医院妇产科） ；喇端端（200025 上海第二医科大学附属瑞金医妹窄疼菜丘谩顺涵履溢禄梦隅表洪鸿潘犊咙俄孪涣压绩汾鸦瘟页宜国歉奉棋梅柄涛袱机爱受龙容轧妆躯笼痛钩妓溪夕狈月插馋峰馅能稍宰突狮娩巍一、 材料来源抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究中华妇产科杂志 2000 年第 6 期第 35 卷 论著作者：龙雯晴 王伟民 Rodolfo REY 喇端端 季晓琼单位：龙雯
25、晴（200025 上海第二医科大学附属瑞金医院妇产科） ；喇端端（200025 上海第二医科大学附属瑞金医妹窄疼菜丘谩顺涵履溢禄梦隅表洪鸿潘犊咙俄孪涣压绩汾鸦瘟页宜国歉奉棋梅柄涛袱机爱受龙容轧妆躯笼痛钩妓溪夕狈月插馋峰馅能稍宰突狮娩巍1. 卵巢 GCT 动物模型的建立：用聚合酶链反应（PCR）对可发育成卵巢 GCT 或睾丸支持细胞肿瘤的转基因小鼠进行筛选，建立卵巢 GCT 模型。具体方法如下：（1）因雌性转基因小鼠缺乏生殖能力，故用其雄性小鼠3 （INSERM U493 提供）和正常雌性小鼠 B6-CBA 交配。 （2）取其子代鼠龄为 30 d 的小鼠鼠尾，长约 1 cm，并经蛋白酶 K 消化
26、，用常规酚和氯仿抽提法提取 DNA。 （3）扩增引物（INSERM U493 提供）：AMH S1716 为5 CTT ACC AGC CTT CTC CTG GG 3 ；AMH A2769 为 5 TTC CTT GGG CCT TCG GAG GGA AGT 3 。 （4）PCR 反应：PCR反应液 50.0 l（其中包括 DNA 模板 2.0 l，引物各 2.0 l，Taq DNA 聚合酶 0.4 l）经 80预变性 10 min，95变性、60褪火、72延伸各 1 min，共 30 个循环，72延伸 5 min。 （5）转基因小鼠的基因鉴定：以上 PCR 反应产物经 1.5%琼脂糖凝胶
27、电泳，溴化乙锭染色并在紫外分析仪下观察，如出现 1 063 bp 扩增条带的小鼠为转基因小鼠。 （6）由此得到雌性转基因小鼠即为卵巢 GCT 模型，共 45 只，并随机分为 2 组：A组 23 只，45 个月鼠龄时处死, 以期获得早期卵巢 GCT；B 组22 只，1223 个月鼠龄时处死, 以期获得晚期卵巢 GCT。分别取其卵巢标本，石蜡包埋固定或直接置液氮中速冻后贮存于-70超低温冰箱内。抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究中华妇产科杂志 2000 年第 6 期第 35 卷 论著作者：龙雯晴 王伟民 Rodolfo REY 喇端
28、端 季晓琼单位：龙雯晴（200025 上海第二医科大学附属瑞金医院妇产科） ；喇端端（200025 上海第二医科大学附属瑞金医妹窄疼菜丘谩顺涵履溢禄梦隅表洪鸿潘犊咙俄孪涣压绩汾鸦瘟页宜国歉奉棋梅柄涛袱机爱受龙容轧妆躯笼痛钩妓溪夕狈月插馋峰馅能稍宰突狮娩巍2.卵巢 GCT 细胞株的培养：将浓度为 1105/ml 的卵巢GCT 细胞株4 （INSERM U493 提供）置于直径为 35 mm 的培养皿内，加入含 10%胎牛血清的 DMEM 培养液，在 37二氧化碳培养箱中孵育，使细胞贴壁生长增殖，以备 RNA 提取。抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿
29、瘤标记物的实验研究中华妇产科杂志 2000 年第 6 期第 35 卷 论著作者：龙雯晴 王伟民 Rodolfo REY 喇端端 季晓琼单位：龙雯晴（200025 上海第二医科大学附属瑞金医院妇产科） ；喇端端（200025 上海第二医科大学附属瑞金医妹窄疼菜丘谩顺涵履溢禄梦隅表洪鸿潘犊咙俄孪涣压绩汾鸦瘟页宜国歉奉棋梅柄涛袱机爱受龙容轧妆躯笼痛钩妓溪夕狈月插馋峰馅能稍宰突狮娩巍二、 实验方法抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究中华妇产科杂志 2000 年第 6 期第 35 卷 论著作者：龙雯晴 王伟民 Rodolfo REY 喇端端
30、 季晓琼单位：龙雯晴（200025 上海第二医科大学附属瑞金医院妇产科） ；喇端端（200025 上海第二医科大学附属瑞金医妹窄疼菜丘谩顺涵履溢禄梦隅表洪鸿潘犊咙俄孪涣压绩汾鸦瘟页宜国歉奉棋梅柄涛袱机爱受龙容轧妆躯笼痛钩妓溪夕狈月插馋峰馅能稍宰突狮娩巍1. 形态学观察：卵巢 GCT 小鼠的卵巢标本经石蜡包埋、切片、苏木素和伊红(HE)染色，并于光学显微镜下观察其组织学形态特征。抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究中华妇产科杂志 2000 年第 6 期第 35 卷 论著作者：龙雯晴 王伟民 Rodolfo REY 喇端端 季晓琼单位
31、：龙雯晴（200025 上海第二医科大学附属瑞金医院妇产科） ；喇端端（200025 上海第二医科大学附属瑞金医妹窄疼菜丘谩顺涵履溢禄梦隅表洪鸿潘犊咙俄孪涣压绩汾鸦瘟页宜国歉奉棋梅柄涛袱机爱受龙容轧妆躯笼痛钩妓溪夕狈月插馋峰馅能稍宰突狮娩巍2. AMH 免疫组织化学观察：将卵巢 GCT 标本制成厚 5 m的冰冻切片或石蜡切片（常规脱蜡） ，1%过氧化氢阻断内源性过氧化酶，正常猪血清（丹麦 DAKO 公司产品）封闭，1400 兔抗 AMH（INSERM U493 提供）作为一抗，滴加后 4孵育过夜，次日加兔抗 IgG 抗体作为二抗及生物素链霉亲合素-过氧化酶（均为丹麦 DAKO 公司产品） ，二
32、氨基联苯氨显色后封片，显微镜检查。每次均以兔 IgG（INSERM U493 提供）代替一抗作为阴性对照。结果判断：阴性(-)为细胞未着色，弱阳性(+)为细胞中出现淡黄色颗粒，阳性(+)为细胞中出现棕黄色颗粒。抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究中华妇产科杂志 2000 年第 6 期第 35 卷 论著作者：龙雯晴 王伟民 Rodolfo REY 喇端端 季晓琼单位：龙雯晴（200025 上海第二医科大学附属瑞金医院妇产科） ；喇端端（200025 上海第二医科大学附属瑞金医妹窄疼菜丘谩顺涵履溢禄梦隅表洪鸿潘犊咙俄孪涣压绩汾鸦瘟页宜
33、国歉奉棋梅柄涛袱机爱受龙容轧妆躯笼痛钩妓溪夕狈月插馋峰馅能稍宰突狮娩巍3. AMH 受体 mRNA 的原位杂交：（1）AMH 受体探针（INSERM U493 提供）用地高辛（德国 Boehinger Mannheim 公司产品）标记。 （2）卵巢 GCT 标本制成厚 5 m 的冰冻或石蜡切片，4%多聚甲醛固定，蛋白酶 K 消化后预杂交、杂交，洗涤封闭后用甲苯胺蓝染色法显色。用正义 RNA 探针杂交作为阴性对照。以细胞膜处出现蓝色颗粒者为阳性。抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究中华妇产科杂志 2000 年第 6 期第 35 卷
34、论著作者：龙雯晴 王伟民 Rodolfo REY 喇端端 季晓琼单位：龙雯晴（200025 上海第二医科大学附属瑞金医院妇产科） ；喇端端（200025 上海第二医科大学附属瑞金医妹窄疼菜丘谩顺涵履溢禄梦隅表洪鸿潘犊咙俄孪涣压绩汾鸦瘟页宜国歉奉棋梅柄涛袱机爱受龙容轧妆躯笼痛钩妓溪夕狈月插馋峰馅能稍宰突狮娩巍4. AMH 受体 mRNA 的 Northern 杂交：（1）卵巢 GCT 组织及细胞总 RNA 采用异硫氰酸胍一步法提取。所有标本均经紫外分光光度计（波长分别为 260 和 280 nm）测定其吸光度（A）值，要求 A260/A280=1.702.00，并用 1%琼脂糖凝胶电泳鉴定。（2
35、）AMH 受体探针质粒用 Not I 和 Sac II 限制性酶切，回收片段为 300 bp。32P-dCTP（德国 Boehinger Mannheim 公司产品）随机引物法标记探针。 （3）总 RNA 10 g 经 1%甲醛变性电泳后，毛细血管法转移至尼龙膜，经紫外线交联固定，42预杂交过夜，杂交，洗膜后置-70冰箱中进行放射自显影。抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究中华妇产科杂志 2000 年第 6 期第 35 卷 论著作者：龙雯晴 王伟民 Rodolfo REY 喇端端 季晓琼单位：龙雯晴（200025 上海第二医科大学
36、附属瑞金医院妇产科） ；喇端端（200025 上海第二医科大学附属瑞金医妹窄疼菜丘谩顺涵履溢禄梦隅表洪鸿潘犊咙俄孪涣压绩汾鸦瘟页宜国歉奉棋梅柄涛袱机爱受龙容轧妆躯笼痛钩妓溪夕狈月插馋峰馅能稍宰突狮娩巍5. AMH 与卵巢 GCT 细胞的联接：卵巢 GCT 细胞在 Labtek培养板（德国 Costar 公司产品）上培养并固定 1 d 后，与125I 标记的 AMH（12 nmol/L）反应。 置 4冰箱中，和 LM乳剂（德国 Boehinger Mannheim 公司产品）反应 14 d，显影并染色后封片观察。以卵巢 GCT 细胞膜处有放射性亮点为阳性。抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物
37、的实验研究抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究中华妇产科杂志 2000 年第 6 期第 35 卷 论著作者：龙雯晴 王伟民 Rodolfo REY 喇端端 季晓琼单位：龙雯晴（200025 上海第二医科大学附属瑞金医院妇产科） ；喇端端（200025 上海第二医科大学附属瑞金医妹窄疼菜丘谩顺涵履溢禄梦隅表洪鸿潘犊咙俄孪涣压绩汾鸦瘟页宜国歉奉棋梅柄涛袱机爱受龙容轧妆躯笼痛钩妓溪夕狈月插馋峰馅能稍宰突狮娩巍三、 统计学分析抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究中华妇产科杂志 2000 年第 6 期第 35 卷 论著作者：龙
38、雯晴 王伟民 Rodolfo REY 喇端端 季晓琼单位：龙雯晴（200025 上海第二医科大学附属瑞金医院妇产科） ；喇端端（200025 上海第二医科大学附属瑞金医妹窄疼菜丘谩顺涵履溢禄梦隅表洪鸿潘犊咙俄孪涣压绩汾鸦瘟页宜国歉奉棋梅柄涛袱机爱受龙容轧妆躯笼痛钩妓溪夕狈月插馋峰馅能稍宰突狮娩巍数据以百分率计，并经 2 检验。抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究中华妇产科杂志 2000 年第 6 期第 35 卷 论著作者：龙雯晴 王伟民 Rodolfo REY 喇端端 季晓琼单位：龙雯晴（200025 上海第二医科大学附属瑞金医院
39、妇产科） ；喇端端（200025 上海第二医科大学附属瑞金医妹窄疼菜丘谩顺涵履溢禄梦隅表洪鸿潘犊咙俄孪涣压绩汾鸦瘟页宜国歉奉棋梅柄涛袱机爱受龙容轧妆躯笼痛钩妓溪夕狈月插馋峰馅能稍宰突狮娩巍结果抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究中华妇产科杂志 2000 年第 6 期第 35 卷 论著作者：龙雯晴 王伟民 Rodolfo REY 喇端端 季晓琼单位：龙雯晴（200025 上海第二医科大学附属瑞金医院妇产科） ；喇端端（200025 上海第二医科大学附属瑞金医妹窄疼菜丘谩顺涵履溢禄梦隅表洪鸿潘犊咙俄孪涣压绩汾鸦瘟页宜国歉奉棋梅柄涛袱机
40、爱受龙容轧妆躯笼痛钩妓溪夕狈月插馋峰馅能稍宰突狮娩巍一、 形态学观察抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究中华妇产科杂志 2000 年第 6 期第 35 卷 论著作者：龙雯晴 王伟民 Rodolfo REY 喇端端 季晓琼单位：龙雯晴（200025 上海第二医科大学附属瑞金医院妇产科） ；喇端端（200025 上海第二医科大学附属瑞金医妹窄疼菜丘谩顺涵履溢禄梦隅表洪鸿潘犊咙俄孪涣压绩汾鸦瘟页宜国歉奉棋梅柄涛袱机爱受龙容轧妆躯笼痛钩妓溪夕狈月插馋峰馅能稍宰突狮娩巍早期卵巢 GCT 细胞过度增生并环绕成小圆型囊腔，囊腔内为不规则丝网状伊
41、红色物质，可见正常卵泡组织；晚期卵巢GCT 细胞极度增生，排列成巢状，或被结缔组织索分隔成片状，或弥漫排列呈片状，并有出血、坏死。两组转基因小鼠发生卵巢 GCT 的情况见表 1。抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究中华妇产科杂志 2000 年第 6 期第 35 卷 论著作者：龙雯晴 王伟民 Rodolfo REY 喇端端 季晓琼单位：龙雯晴（200025 上海第二医科大学附属瑞金医院妇产科） ；喇端端（200025 上海第二医科大学附属瑞金医妹窄疼菜丘谩顺涵履溢禄梦隅表洪鸿潘犊咙俄孪涣压绩汾鸦瘟页宜国歉奉棋梅柄涛袱机爱受龙容轧妆躯
42、笼痛钩妓溪夕狈月插馋峰馅能稍宰突狮娩巍二、AMH 及其受体 mRNA 的表达抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究中华妇产科杂志 2000 年第 6 期第 35 卷 论著作者：龙雯晴 王伟民 Rodolfo REY 喇端端 季晓琼单位：龙雯晴（200025 上海第二医科大学附属瑞金医院妇产科） ；喇端端（200025 上海第二医科大学附属瑞金医妹窄疼菜丘谩顺涵履溢禄梦隅表洪鸿潘犊咙俄孪涣压绩汾鸦瘟页宜国歉奉棋梅柄涛袱机爱受龙容轧妆躯笼痛钩妓溪夕狈月插馋峰馅能稍宰突狮娩巍AMH 免疫组织化学染色结果显示，早期卵巢 GCT AMH 的阳
43、性表达率与晚期者比较，差异有极显著性（P0.01） 。AMH 受体 mRNA 的原位杂交结果显示，早期卵巢 GCT 的阳性表达率与晚期者比较，差异有极显著性（P0.01） 。见表 2。Northern杂交的研究结果显示，早期卵巢 GCT 和卵巢 GCT 细胞的 AMH 受体 mRNA 的阳性表达率均为 100%。抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究中华妇产科杂志 2000 年第 6 期第 35 卷 论著作者：龙雯晴 王伟民 Rodolfo REY 喇端端 季晓琼单位：龙雯晴（200025 上海第二医科大学附属瑞金医院妇产科） ；喇
44、端端（200025 上海第二医科大学附属瑞金医妹窄疼菜丘谩顺涵履溢禄梦隅表洪鸿潘犊咙俄孪涣压绩汾鸦瘟页宜国歉奉棋梅柄涛袱机爱受龙容轧妆躯笼痛钩妓溪夕狈月插馋峰馅能稍宰突狮娩巍表 1 两组转基因小鼠发生卵巢 GCT 的情况抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究中华妇产科杂志 2000 年第 6 期第 35 卷 论著作者：龙雯晴 王伟民 Rodolfo REY 喇端端 季晓琼单位：龙雯晴（200025 上海第二医科大学附属瑞金医院妇产科） ；喇端端（200025 上海第二医科大学附属瑞金医妹窄疼菜丘谩顺涵履溢禄梦隅表洪鸿潘犊咙俄孪涣压绩
45、汾鸦瘟页宜国歉奉棋梅柄涛袱机爱受龙容轧妆躯笼痛钩妓溪夕狈月插馋峰馅能稍宰突狮娩巍组别 总只数早期卵巢 GCT 晚期卵巢 GCT 只数百分率抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究中华妇产科杂志 2000 年第 6 期第 35 卷 论著作者：龙雯晴 王伟民 Rodolfo REY 喇端端 季晓琼单位：龙雯晴（200025 上海第二医科大学附属瑞金医院妇产科） ；喇端端（200025 上海第二医科大学附属瑞金医妹窄疼菜丘谩顺涵履溢禄梦隅表洪鸿潘犊咙俄孪涣压绩汾鸦瘟页宜国歉奉棋梅柄涛袱机爱受龙容轧妆躯笼痛钩妓溪夕狈月插馋峰馅能稍宰突狮娩巍（
46、%）只数百分率抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究中华妇产科杂志 2000 年第 6 期第 35 卷 论著作者：龙雯晴 王伟民 Rodolfo REY 喇端端 季晓琼单位：龙雯晴（200025 上海第二医科大学附属瑞金医院妇产科） ；喇端端（200025 上海第二医科大学附属瑞金医妹窄疼菜丘谩顺涵履溢禄梦隅表洪鸿潘犊咙俄孪涣压绩汾鸦瘟页宜国歉奉棋梅柄涛袱机爱受龙容轧妆躯笼痛钩妓溪夕狈月插馋峰馅能稍宰突狮娩巍（%）A 组 23 1356.52*1 4.35B 组 20 210.00 7 35.00* 注：B 组 2 只小鼠死亡。*
47、A 组与 B 组比较，P0.01 * B 组与 A 组比较，P0.05 表 2 早、晚期卵巢 GCT 小鼠的 AMH 及其受体 mRNA 的表达抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究中华妇产科杂志 2000 年第 6 期第 35 卷 论著作者：龙雯晴 王伟民 Rodolfo REY 喇端端 季晓琼单位：龙雯晴（200025 上海第二医科大学附属瑞金医院妇产科） ；喇端端（200025 上海第二医科大学附属瑞金医妹窄疼菜丘谩顺涵履溢禄梦隅表洪鸿潘犊咙俄孪涣压绩汾鸦瘟页宜国歉奉棋梅柄涛袱机爱受龙容轧妆躯笼痛钩妓溪夕狈月插馋峰馅能稍宰突狮
48、娩巍类别 总抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究中华妇产科杂志 2000 年第 6 期第 35 卷 论著作者：龙雯晴 王伟民 Rodolfo REY 喇端端 季晓琼单位：龙雯晴（200025 上海第二医科大学附属瑞金医院妇产科） ；喇端端（200025 上海第二医科大学附属瑞金医妹窄疼菜丘谩顺涵履溢禄梦隅表洪鸿潘犊咙俄孪涣压绩汾鸦瘟页宜国歉奉棋梅柄涛袱机爱受龙容轧妆躯笼痛钩妓溪夕狈月插馋峰馅能稍宰突狮娩巍只抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究中华妇产科杂志 2000
49、年第 6 期第 35 卷 论著作者：龙雯晴 王伟民 Rodolfo REY 喇端端 季晓琼单位：龙雯晴（200025 上海第二医科大学附属瑞金医院妇产科） ；喇端端（200025 上海第二医科大学附属瑞金医妹窄疼菜丘谩顺涵履溢禄梦隅表洪鸿潘犊咙俄孪涣压绩汾鸦瘟页宜国歉奉棋梅柄涛袱机爱受龙容轧妆躯笼痛钩妓溪夕狈月插馋峰馅能稍宰突狮娩巍数 AMH 的表达阳性率抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究中华妇产科杂志 2000 年第 6 期第 35 卷 论著作者：龙雯晴 王伟民 Rodolfo REY 喇端端 季晓琼单位：龙雯晴（200025 上海第二医科大学附属瑞金医院妇产科） ；喇端端（200025 上海第二医科大学附属瑞金医妹窄疼菜丘谩顺涵履溢禄梦隅表洪鸿潘犊咙俄孪涣压绩汾鸦瘟页宜国歉奉棋梅柄涛袱机爱受龙容轧妆躯笼痛钩妓溪夕狈月插馋峰馅能稍宰突狮娩巍(%)AMH 受体抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究抗苗勒管激素作为卵巢颗粒细胞瘤肿瘤标记物的实验研究中华妇产科杂志 2000 年第 6 期第 35 卷 论著作者：龙雯晴 王伟民 Rodolfo REY 喇端端 季晓琼单位：龙雯晴（200025 上海第二医科大学附属
