1、现代生物学实验（二） 细胞与显微技术学实验教案课程名称: 细胞与显微技术学实验英文名称: Experiments of Cell and Microscopy课程编号: 学科类通修课程课程学时：108 学时课程学分：3 学分教师姓名: 陈 美、王彦海、叶 军前导课程：细胞生物学、生物化学、植物生物学、动物生物学教学方式: 实验及技术理论讲授考试方式: 实验操作+ 平时考核期末考试教学目标和要求：通过学习本课程使学生熟练掌握细胞形态结构的观察、细胞大小的测量、细胞计数等技术。了解各种特殊显微镜在细胞生物学研究方面的应用。掌握使用各种特殊显微镜的技能；掌握细胞化学实验技术、免疫荧光技术、生物显微制
2、片技术、显微摄影与暗房操作技术。为今后开展教学和科研工作奠定基础。主要内容：1 细胞形态结构的观察和普通光学显微镜的使用要求： 掌握普通光学显微镜的基本原理和操作方法。了解不同类细胞的基本形态结构及区别。2 细胞大小的测量要求：掌握显微测量技术。3 细胞的形态多样性及细胞计数要求：了解各类细胞的形态差异。学习掌握借助血细胞计数板，计算单位体积细胞或微小生物数量。4 细胞线粒体的超活染色与油镜观察要求：了解活细胞内线粒体的形态、数量与分布。学习一些细胞器的超活染色技术。5 生物显微绘图要求： 掌握生物显微绘图方法。6 正常及病理细胞观察比较要求：掌握观察比较正常及病理细胞的方法。7. 细胞形态观
3、察与荧光显微镜的使用要求：掌握荧光显微镜的基本原理和使用方法8. 血细胞渗透性与细胞融合的观察要求：了解细胞膜的渗透性及各类物质进入细胞的速度。掌握 PEG 诱导细胞融合的原理和方法； 掌握观察融合细胞的方法； 9. 生物显微制片技术（一）石蜡切片法要求：理解石蜡切片几大步骤（取材、固定、洗涤、脱水;透明、透蜡、包埋;切片、贴片; 染色、封藏）的基本原理掌握石蜡切片操作方法。熟悉石蜡切片过程中应注意的事项。10 生物显微制片技术（二）冰冻切片法要求：熟悉冰冻切片技术。主要教学方法：实验+理论讲授。理论讲授采用多媒体教学，重点与难点部分采用示范教学，指导学生独立完成实验，启发学生参加设计性实验、
4、自主性实验。使用教材 :自编讲义参考书及其它:现代生物学实验,高教出版社,林加涵,ISBN 编号:7-04-008697-2实验项目实验一 细胞形态结构的观察和普通光学显微镜的使用实验二 叶绿体的分离与观察和细胞大小的测量实验三 细胞的形态多样性及细胞计数实验四 动物细胞线粒体的超活染色与油镜观察实验五 植物细胞液泡系观察与生物显微绘图实验六 活细胞观察及相差显微镜的使用实验七 细胞荧光染色观察与荧光显微镜的使用实验八 细胞形态观察与暗视野显微镜的使用实验九 核酸的显示方法Feulgen 反应糖类的显示方法PAS 反应实验十 血细胞渗透性与细胞融合的观察实验十一 激光扫描共聚焦显微镜在细胞生物
5、学研究的应用实验十二 免疫荧光染色观察肿瘤细胞骨架实验十三 石蜡切片法（一）取材、固定、洗涤、脱水实验十四 石蜡切片法（二）透明、透蜡、包埋实验十五 石蜡切片法（三）切片、贴片实验十六 石蜡切片法（四）染色、封藏实验十七 自主设计实验各种生物染料在细胞形态与结构观察中的应用实验十八 冰冻切片法实验十九 显微摄影术实验二十 胶片的冲洗实验二十一 印相和放大模 块 1：细胞形态结构观察与各种显微镜的使用教学要求：通过学习使学生熟练掌握细胞形态结构的观察、细胞大小的测量、细胞计数等基本知识。了解各种特殊显微镜在细胞生物学研究方面的应用。观察及比较不同类型细胞形态结构，学习掌握细胞形态多样性及显微结构
6、观察方法。教学学时：30 学时讲授的内容：介绍几种不同类型显微镜的光学原理和使用方法，其中还包括显微测量、计数和绘图技术。讲解细胞基本形态结构及不同类型细胞形态差别，介绍细胞组分分离技术。实验项目：1. 细胞形态结构的观察和各种显微镜的使用；2. 叶绿体的分离与观察和细胞大小的测量； 3. 细胞的形态多样性及细胞计数； 4. 动物细胞线粒体的超活染色与油镜观察； 5. 植物细胞液泡系观察与生物显微绘图； 6. 活细胞形态观察与相差显微镜的使用；7. 细胞荧光染色观察与荧光显微镜的使用；8. 细胞形态观察与暗视野显微镜的使用。应学习的技术和方法：掌握普通光学显微镜的的基本原理和操作规程，了解各种
7、特殊显微镜的基本原理和结构特点；了解细胞器分离的一般原理方法。学习掌握显微测量方法，学习借助血细胞计数板，计算单位体积细胞或微小生物数量，学习一些细胞器的超活染色技术，掌握生物显微绘图方法。应学习的仪器使用方法：学习掌握普通光学显微镜、各种特殊显微镜操作规程，学习借助血细胞计数板掌握显微测量方法，掌握利用显微描绘仪进行生物显微绘图的方法；掌握离心机、PH 计等常规仪器设备的使用方法。教学的重点和难点：教学的重点：学习掌握光学显微镜的的基本原理和操作规程，了解各种特殊显微镜在细胞生物学研究方面的应用；学习掌握细胞形态多样性及显微结构观察方法。教学的难点：显微镜的正确使用和细胞结构观察的准确性。难
8、点的解决办法：通过多次课堂的具体演示及对学生实验过程的个别详细指导，使学生掌握显微镜的的操作规程，准确观察细胞结构。模 块 2：细胞化学与细胞膜生物学教学要求： 1. 掌握细胞化学的原理及试验步骤2. 掌握细胞膜动态变化的特性教学学时：30 学时讲授的内容：1. 细胞化学的原理2. 细胞膜融合及渗透性实验的原理3. 样品制备、操作步骤和注意事项。实验项目：1.核酸的显示方法Feulgen 反应2.糖类的显示方法PAS 反应3.血细胞渗透性4.细胞融合的观察5.激光扫描共聚焦显微镜在细胞生物学研究的应用6.免疫荧光染色观察肿瘤细胞骨架应学习的仪器使用方法：荧光显微镜，暗视野显微镜教学的重点和难点
9、：1. 原理的介绍。2. 仪器的正确使用。难点的解决办法：1细心进行现场指导。2提供相关的阅读参考书。模 块 3：生物显微制片技术教学要求： 1. 理解石蜡切片法各主要步骤的基本原理。2. 掌握各种试剂的配制和各种器材的使用方法。3. 掌握石蜡切片法的具体操作技术。4. 掌握冰冻切片法的具体操作技术。5. 熟悉实验过程中应注意的事项。6. 在显微镜下观察细胞染色玻片标本，了解细胞的显微结构。7了解石蜡切片法、冰冻切片法在生物学研究中的应用。教学学时：24 学时讲授的内容：1介绍石蜡切片法各主要步骤的基本原理。2讲解石蜡切片法操作技术。3. 分析石蜡切片法各主要步骤的注意事项。4. 讲解冰冻切片
10、法操作技术。 实验项目：1 石蜡切片法操作技术：取材、固定、洗涤 、脱水、透明、透入与包埋、切片 、贴片、染色、封藏、观察。2 冰冻切片法的操作技术：取材、固定、切片 、贴片、染色、封藏、观察。应学习的技术和方法：1. 掌握石蜡切片操作技术。2. 冰冻切片法操作技术。应学习的仪器使用方法：组织切片机、自动脱水机、 自动包埋机、冰冻切片机的使用方法。教学的重点和难点：教学的重点： 1. 石蜡切片几大主要步骤的基本原理。2. 石蜡切片基本操作技术。3. 冰冻切片法的操作技术。教学的难点：切片过程出现的问题及其解决的办法。难点的解决办法：3关键步骤进行课堂演示4认真进行现场指导。5启发学生思考实验过
11、程中容易出现的问题。6培养学生分析问题和解决问题的能力。模 块 4：显微摄影与暗房技术教学要求：1.掌握显微摄影技术。2.掌握胶片冲洗技术。3.理解印照片和放大照片的基本原理。4.掌握印照片和放大照片技术。教学学时：12 学时讲授的内容：1.介绍显微摄影、自动曝光控制的装置使用。2.介绍罐中显影、胶片冲洗技术。3.介绍印照片和放大照片的基本原理。4.介绍印照片和放大照片技术。实验项目：1.显微摄影技术。2.胶片的冲洗。3.印相和放大。应学习的技术和方法：1.显微摄影技术。2.胶片冲洗技术。3.印照片和放大照片技术。应学习的仪器使用方法：显微摄影装置、自动曝光控制器、印相机、放大机的使用方法。教学的重点和难点：教学的重点：1.显微摄影技术。2.胶片冲洗技术。3.印照片和放大照片技术。教学的难点：显微摄影、自动曝光控制的装置正确使用。难点的解决办法：1. 进行课堂演示。2. 拟定各步骤的参数及时间。3. 要求学生独立思考、独立操作、自主调整各种参数及时间。
