1、光化学法诱导豚鼠耳蜗微循环障碍模型实验原理：光化学法造模主要的机制是光敏剂在血液中吸收光能后产生自由基和单态氧，自由基和单态氧可致脂质、蛋白质和细胞核酸过氧化进而产生血管内皮细胞损伤，从而启动凝血系统导致血栓形成。实验材料：常规手术器械，敷料，四碘四氯荧光素二钠（rose bengal，RB）染料，注射器，冷光源，波长为 540nm 的滤光片。实验方法：1. 腹侧径路3%戊巴比妥钠（30mg/kg）豚鼠腹腔注射麻醉。豚鼠仰卧，固定头部及四肢，用电热毯保持其肛温 38左右。腹侧径路，沿着下颌角切口，垂直分离肌肉群，尽量不要破坏肌肉，直至找到白色弧形骨性结构，此为听泡，壁薄，以尖锐的注射器尖端或针
2、灸用的三棱针刺破听泡，以尖镊子扩大听泡孔至直径 0.3mm 以上。整个开孔过程要注意保持鼓膜和听骨链的完整。然后再解剖并显露左颈外静脉，注入 2%RB20 mg/kg后，用 150 W 卤素灯冷光源（OlympusCLH-2 日本）相连的光导纤维（=2 mm） ，经滤光后形成波长为（54040）nm、光强为（500 600）mW/cm2 的绿色光束，垂直照射耳蜗破损处，其末端与被照射部位相距 0.5 cm。诱导局部血管纹（stria vascularis，SV）内微血栓形成。2.耳后径路3%戊巴比妥钠（30mg/kg）豚鼠腹腔注射麻醉。豚鼠俯卧，将四肢固定于手术台上，用电热毯保持其肛温 38左
3、右。耳后径路，沿着外耳耳根做弧形切口，以手术刀柄钝性剥离皮下组织及骨膜，此部分较薄，皮下组织较少，听泡位置表浅，分离时用力要轻。暴露骨性结构后，确定听泡位置。听泡与颅骨并排排列，两者之间有一条缝，但二者颜色不同，颅骨呈灰白色，而听泡为纯白色；另外，二者位置不同，靠近外耳道的狭窄条形骨为听泡，靠近正中线的为颅骨。暴露听泡后，以眼科剪尖部钻开听泡，此部分听泡较为坚硬，难于开孔，可适当增加力度。打开听泡后，立即经股静脉注入2%RB，20 mg/kg，然后用 150 W 卤素灯冷光源（OlympusCLH-2 日本）相连的光导纤维（=2 mm） ，经滤光后形成波长为（54040）nm、光强为（5006
4、00）mW/cm2的绿色光束，垂直照射耳蜗破损处，其末端与被照射部位相距 0.5 cm。诱导局部血管纹（stria vascularis，SV ）内微血栓形成。微球栓塞法制备豚鼠耳蜗微循环障碍模型实验原理：常压下，Fe（CO） 5 的溶点在-20.3左右，沸点在 103.6左右。羰基铁粉最早由德国人发明。目前德国 BASF 公司拥有世界上最大，最先进的羰基铁粉生产线。德国巴斯夫生产的羰基铁粉为球形颗粒，具有洋葱球层状结构、粒度超细、颗粒不粘连及粒度分布均匀、流动性好等优点。基于这些优点，羰基铁成为我们制备耳蜗微循环障碍动物模型的最佳栓塞物。实验材料：羰基铁粉(直径 23.5m， Sigma 公
5、司，美国) ，永磁铁(直径 2.5 mm，表面磁场强度 350 mT)，常规手术器械，敷料，注射器等。实验方法：先将羰基铁与生理盐水按 1%比例混合，超声波清洗仪震荡，经 70 目无菌滤网过滤（孔径 4-5 微米）过滤后摇匀备用。豚鼠仰卧固定，3%戊巴比妥钠(30 mg/kg)腹腔注射麻醉。经股静脉注入羰基铁粉微粒混悬液 1 ml/kg。柱形轴向将钕铁硼永磁铁固定于左外耳道，30 min 后取出。右耳不置磁铁。perry 建议：1. 肛温测定问题2. 应该先照灯，后注射药物。3. RB 染料浓度问题，注射速度问题。4. 降低 RB 浓度。5. 设立对照组，注射 RB 不光照组，听泡开孔，注射 RB，不光照组。
