1、中国组织工程研究 第 17 卷 第 49 期 20131203 出版Chinese Journal of Tissue Engineering Research December 3, 2013 Vol.17, No.49doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2013.49.006 http:/www.crter.org李天然，杜湘珂，宋斌，魏正茂，霍天龙 . 骨髓间充质干细胞对高转移肝癌模型的干预 J.中国组织工程研究， 2013， 17(49):8498-8504.P.O. Box 1200, Shenyang 110004 www.CRTER.org 8498www.
2、CRTER.org李天然，男，1970 年生，黑龙江省富锦市人， 汉族，2009 年解放 军医学院毕业，博士，2012 年北京大学医学部博士后，副主任医师，主要从事肝癌分子影像学研究。中图分类号:R394.2文献标识码:A文章编号:2095-4344(2013)49-08498-07修回日期：2013-09-10(201302047/DW)Li Tian-ran, M.D., Associate chief physician, Department of Radiology, First Affiliated Hospital, Fuzhou General Hospital of Nanj
3、ing Military Region, Putian 351100, Fujian Province, C Accepted: 2013-09-10骨髓间充质干细胞对高转移肝癌模型的干预 *李天然 1，杜湘珂 2，宋 斌 1，魏正茂 2，霍天龙 2 (1解放军南京军区福州总医院第一附属医院(解放军第九五医院) 放射科，福建省莆田市 351100；2北京大学人民医院放射科，北京市 100044)文章亮点：1 肝癌的转移特性是影响预后的关键因素，观察骨髓间充质干细胞对肝癌转移行为的影响情况，对于提高肝癌患者的生存期具有重要的意义。实验将骨髓间充质干细胞移植入具有高转移潜能动物模型中，观察骨髓间充
4、质干细胞对高转移潜能肝癌组织的影响。2 实验结果表明，骨髓间充质干细胞对高转移潜能肝癌动物模型干预效能随时间而变化，骨髓间充质干细胞移植后第 3 周对肝癌抑制效果最佳，随着时间的延长，骨髓间充质干细胞抑制效能减弱，表明骨髓间充质干细胞具有抗肿瘤的特性，但具有时间性，随着时间的延长抗肝癌的特性逐渐减弱。关键词：干细胞；骨髓干细胞；肿瘤；骨髓间充质干细胞；骨桥蛋白；骨唾液蛋白；整合素 ；高转移潜能肝癌细胞；动物模型；国家自然科学基金主题词：干细胞；肿瘤；间质干细胞；骨髓；肝肿瘤；模型，动物基金资助：国家自然科学基金(81271607) *；博士后基金项目(20100470172)*摘要背景：骨髓间
5、充质干细胞具备化学趋向性和归巢作用，对于促进患者免疫系统的重建、消除残留病灶及防止复发转移具有良好的效果。目的：观察人骨髓间充质干细胞移植入动物模型对肝癌组织的影响情况及对肝癌转移潜能影响。方法：制作高转移潜能动物模型，实验组在接种肿瘤后第 7 日开始尾静脉注射骨髓间充质干细胞，510 5/次，2 次/周；对照组尾静脉注射骨髓间充质干细胞培养液，0.2 mL/次，实验开始后每 4 d 用测量肿瘤体积，肿瘤接种后 14 d(2 周)，21 d(3 周)，28 d(4 周)，35 d(5 周)，42 d(6 周)处死动物，称质量，取瘤块，称瘤质量，计算肿瘤质量抑制率。PCR 检测动物模型标本转移相
6、关因子骨桥蛋白、骨唾液蛋白、整合素 基因的表达，及肿瘤标本凋亡相关因子 bcl-2、bax、caspase3 基因的表达。结果与结论：第 3 周时肿瘤的质量抑制率效果最好，随着时间的延长，肿瘤的抑制率逐渐下降。肝癌转移相关的生物学指标均呈逐渐下降趋势，代表肿瘤凋亡指标的因子呈两极分化表现，抗凋亡 bcl-2 因子呈逐渐下降的趋势，凋亡因子 bax、caspase3 呈逐渐升高的趋势。骨髓间充质干细胞对肝癌动物模型肿瘤抑制效能随时间而变化，骨髓间充质干细胞移植后第 3 周对肝癌抑制效果最显著，随着时间的延长，抑制效能减弱。骨髓间充质干细胞对肝癌的转移潜能具有抑制作用。Bone marrow-de
7、rived mesenchymal stem cells for high-metastatic potential hepatocellular carcinoma Li Tian-ran1, Du Xiang-ke2, Song Bin1, Wei Zheng-mao2, Huo Tian-long2 (1Department of Radiology, First Affiliated Hospital, Fuzhou General Hospital of Nanjing Military Region, Putian 351100, Fujian Province, China; 2
8、Department of Radiology, Peking University Peoples Hospital, Beijing 100044, China)AbstractBACKGROUND: Bone marrow mesenchymal stem cells have the chemotaxis and homing role that promotes immune system reconstruction, eliminate residual lesions and prevent recurrence in patients.OBJECTIVE: To observ
9、e therapeutic effect of human bone marrow mesenchymal stem cells transplantation into high-metastatic potential hepatocellular carcinoma animal models on metastatic potential of high-metastatic potential hepatocellular carcinoma. METHODS: Nude mouse models of high-metastatic potential hepatocellular
10、 carcinoma were established in vivo. In the experimental group, 5105 cells were injected via the tail vein on day 7 after tumor inoculation, twice a week. In the control group, cell culture medium, 0.2 mL per mouse, was injected by the tail vein. After the start of the experiment, tumor volume was m
11、easured every 4 days. After tumor inoculation for 14 days, 21 days, 28 days, 35 days, 42 days, animal models were sacrificed, and then tumor mass and body mass were recorded to calculate the inhibition rate. PCR was employed to detect osteopontin, bone sialoprotein, and integrin mRNA李天然，等 . 骨髓间充质干细胞
12、对高转移肝癌模型的干预ISSN 2095-4344 CN 21-1581/R CODEN: ZLKHAH 8499www.CRTER.org%)10(CT(1对 照 组 平 均 留 质 量给 药 组 平 均 瘤 质 量肿 瘤 质 量 抑 制 率 -expression, as well as bcl-2, bax, caspase3 mRNA expression.RESULTS AND CONCLUSION: The inhibition rate of tumor mass showed the best results in week 3. As time went on, the tu
13、mor inhibition rate was gradually decreased. Metastasis-related biological factors showed a gradual down-regulated trend, indicating the polarization of tumor apoptotic indexes, that is, anti-apoptotic factor, bcl-2, showed a decreasing trend, while apoptotic factors, bax and caspase3, appeared to h
14、ave a gradually increased trend. These findings suggest that human bone marrow mesenchymal stem cells effects to inhibit high-metastatic potential hepatocellular carcinoma animal models appear to vary with time. After human bone marrow mesenchymal stem cells transplantation for 3 weeks, the inhibiti
15、on performance on high-metastatic potential hepatocellular carcinoma is the best, and then it weakens with time. Human bone marrow mesenchymal stem cells are found to inhibit the metastatic potential of hepatocellular carcinoma.Subject headings: stem cells; tumor; mesenchymal stem cells; bone morrow
16、; liver neoplasms; models, animalFunding: the National Natural Science Foundation of China, No. 81271607*; Postdoctoral Foundation, No. 20100470172*Li TR, Du XK, Song B, Wei ZM, Huo TL. Bone marrow-derived mesenchymal stem cells for high-metastatic potential hepatocellular carcinoma. Zhongguo Zuzhi
17、Gongcheng Yanjiu. 2013;17(49):8498-8504.0 引言 Introduction肝癌是最常见的恶性肿瘤之一，居中国癌症死亡的第2 位，转移复发已成为进一步延长肝癌患者生存期、提高远期疗效的瓶颈问题，也是最终攻克肝癌的关键。手术切除目前仍是治疗的最有效手段，但术后复发转移率高居不下，即使临床上公认预后较好的小肝癌，其5 年术后复发率也达到了40%-50% 1。骨髓间充质干细胞是一种具有多向分化潜能的成体干细胞，研究发现，骨髓干细胞是肝干细胞主要的肝外来源 2-4，所以提取患者的骨髓干细胞移植到患者的肝脏组织中，特定环境下可分化为肝组织和干细胞从而参加肝脏的修复与
18、重建。骨髓 间 充 质 干 细 胞 与 肝 脏 组 织 中 的 多 种 细 胞成 分 关 系 密 切 ， 可 向 肝 脏 内 的 卵 圆 细 胞 ， 成 纤 维 细 胞 ，肌 成 纤 维 细 胞 分 化 ， 具 有 修 复 受 损 肝 脏 组 织 的 作 用 5。通 过 对 接 受 自 体 骨 髓 干 细 胞 移 植 治 疗 失 代 偿 期 肝 硬 化 ，证 实 干 细 胞 移 植 是 一 种 有 效 的 新 方 法 6。 骨 髓 间 充 质 干细 胞 具 备 化 学 趋 向 性 和 归 巢 作 用 ， 对 于 促 进 患 者 免 疫 系统 的 重 建 、 消 除 残 留 病 灶 及 防 止
19、复 发 转 移 具 有 良 好 的 效果 7。干细胞治疗肝癌用于临床中日益显现出无毒、有效的优势，具备化学趋向性和归巢作用，对于促进患者免疫系统的重建、消除残留病灶及防止复发转移具有良好的效果 8。肝癌的转移特性是影响预后的关键因素，观察骨髓间充质干细胞对肝癌转移行为的影响情况，对于提高肝癌患者的生存期具有重要的意义。在小鼠实验中，干细胞移植对肝癌根治性切除术后的复发和转移显示出一定的抑制作用，并且随着人源细胞嵌合率的增加，抗肿瘤效应也相应得到提高 9。实验将骨髓间充质干细胞移植入具有高转移潜能动物模型中，观察骨髓间充质干细胞对高转移潜能肝癌组织的影响。1 材料和方法 Materials an
20、d methods设计：动物实验，造模观察。时间及地点：于2010年5月至2012年5月在北京大学人民医院妇科重点实验室完成。材料：实 验 动 物 ： 健 康 24只 Balb/c裸 鼠 ， 14-17 g， SPF级 ，6周 龄 ， 雌 雄 各 半 ， 由 中 国 药 品 生 物 制 品 检 定 所 实 验 动物 中 心 提 供 ， 实 验 动 物 质 量 合 格 证 号 SCXK(京 ) 2009-0017。 实 验 过 程 中 对 动 物 的 处 置 符 合 医 学 伦 理 学 标 准 。实验用细胞株：人骨髓间充质干细胞，由赛业(广州)生物科技有限公司提供；人高转移潜能肝癌细胞株(MHC
21、C97-H)，由上海复旦大学肝癌研究所提供。实验试剂、仪器与设备：无菌0.9%氯化钠，无水乙醇，注射器，医用净化工作台，多用可调照明放大镜，奥豪斯电子精密天平，电子数显卡尺，日本TE2000 NIKON倒置显微镜，均购于北京科普尔科技发展有限公司。方法：高转移潜能肝癌动物实验模型的制作：取正常传代培养的高转移潜能肝癌细胞株(MHCC97-H)，按常规制成单细胞悬液(细胞浓度为210 8 L-1)，无菌条件下取0.8 mL细胞悬浊液，接种于裸鼠上下肢腋部皮下。分组及干预：将动物随机分为骨髓间充质干细胞组和对照组，每组12只，称体质量标号。骨髓间充质干细胞组在接种肿瘤后第7日开始尾静脉注射骨髓间充
22、质干细胞510 5/次，1周2 次，连续6周。对照组相同时间和频率尾静脉注射骨髓间充质干细胞培养液0.2 mL/次。实验开始后每4 d用卡尺测一次皮下肿瘤体积，于肿瘤接种后分为14 d(2周)、21 d(3周)、27 d(4周)、37 d(5周)、41 d(6周 )处死动物，剖取瘤块并称瘤质量和体质量，计算肿瘤质量抑制率。骨髓间充质干细胞干预效果判定标准：李天然，等 . 骨髓间充质干细胞对高转移肝癌模型的干预P.O. Box 1200, Shenyang 110004 www.CRTER.org8500www.CRTER.orgQ-Real time-PCR检测高转移肝癌动物模型标本骨桥蛋白、
23、骨唾液蛋白、整合素5亚单位基因和bcl-2、bax、 caspase3基因的表达检测。引物设计序列：引物序列来自GenBank数据库，由赛业( 广州) 生物科技公司合成。以人肌动蛋白-Actin作为内参照物(Internal control)：人骨桥蛋白(osteopontin，OPN)：人骨唾液蛋白(bone sialoprotein，BSP)：整合素5亚单位(integrin 5 subunit，alpha-V)：bcl-2抗凋亡基因：bcl-2相关X蛋白(bax)基因：半胱天冬酶3(caspase3)：步骤包括：肿瘤标本RNA提取应用，RevertAid M-MLV RT反应系统和Oli
24、go(dT)合成cDNA ，然后经特异 性 引 物 聚 合 酶 链 反 应 (PCR)扩 增 相 应 的 cDNA。 PCR条件 ： 预 变 性 95 ， 5 min； 变 性 94 ， 30 s， 退 火 58 ，30 s，延伸 72 ，30 s，共30个循环，最后72 ，10 min。PCR产物电泳并经凝胶电泳处理系统扫描半定量分析。 主要观察指标：肿瘤质量抑制率、动物模型标本转移相关因子骨桥蛋白、骨唾液蛋白、整合素基因的表达，及肿瘤标本凋亡相关因子bcl-2、bax、 caspase3基因的表达。统计学分析：数据采用SPSS16.0统计软件处理，实验结果采用t 检验进行分析，以=0.05
25、为检验水准。2 结果 Results2.1 实验动物数量分析 纳入Balb/c裸鼠24只，均分为骨髓间充质干细胞组和对照组进行实验观察，造模过程中未出现动物死亡，按照实验观察时间点处死动物，均进入结果分析。2.2 骨髓间充质干细胞对人高转移肝癌细胞(MHCC97-H)裸鼠移植瘤作用 根据体外标本肿瘤组织质量计算骨髓间充质干细胞干预后的肿瘤质量抑制率，第2周抑制率为26.62%，第3周抑制率为52.00%；第4周抑制率为38.20%，第5周抑制率为31.98%；第6周抑制率为30.23%。见图1。2.3 Real time-PCR检测结果 高转移肝癌动物模型(MHCC97-H)骨髓间充质干细胞干
26、预前后肿瘤标本骨桥蛋白、骨唾液蛋白、整合素a及干预后抗凋亡基因 bcl-2和促凋亡基因bax、caspase 3基因的表达检测结果，见图 2-7。图 1 连续注射骨髓间充质干细胞干预 MHCC97-H 肿瘤模型后不同时间肿瘤质量抑制率变化曲线Figure 1 Inhibition rate of tumor mass with time in MHCC97-H animal models undergoing continuous injection of bone marrow mesenchymal stem cells55504540353025肿瘤质量抑制率(%)2 3 4 5 6t/
27、周注：第 3 周时肿瘤的抑制率效果最好，随着时间的延长，肿瘤的质量抑制率逐渐下降。图 2 骨髓间充质干细胞干预前后 MHCC97-H 动物模型肿瘤标本骨桥蛋白表达情况Figure 2 Osteopontin gene expression in MHCC97-H animal models undergoing continuous injection of bone marrow mesenchymal stem cells141210864202-CT2 3 4 5 t/周注：骨髓间充质干细胞干预后骨桥蛋白表达明显下降，且随着时间延长进一步降低，5 周时有所上升。Forward prime
28、r：5 GCA GAA GGA GAT CAC AGC CCT 3Reverse primer：5 GCT GAT CCA CAT CTG CTG GAA 3Forward primer：5TCA CCA GTC TGA TGA GTC TCA C 3Reverse primer：5 CAG GTC TGC GAA ACT TCT TAG AT 3Forward primer：5GAA TGG CCT GTG CTT TCT CAA 3Reverse primer：5 TCG GAT GAG TCA CTA CTG CCC 3Forward primer：5CCT CAG ACG CTG CG
29、T GGA GC 3Reverse primer：5 AGG GCT GAG CTT CGG AGC GA 3Sense primer: 5- ATC CAG GAT AAC GGA GGC -3Antisense primer: 5- CAG CCA GGA GAA ATC AAA C -3Sense primer: 5- GAC CCG GTG CCT CAG GAT GC -3Antisense primer: 5- GTC TGT GTC CAC GGC GGC AA -3Sense primer: 5- CAT GGA AGC GAA TCA ATG GAC T -3Antisens
30、e primer: 5- CTG TAC CAG ACC GAG ATG TCA -3干预前干预后李天然，等 . 骨髓间充质干细胞对高转移肝癌模型的干预ISSN 2095-4344 CN 21-1581/R CODEN: ZLKHAH 8501www.CRTER.org2.4 骨髓间充质干细胞干预后MHCC97-H动物模型转移相关因子与凋亡基因表达的相关性分析骨唾液蛋白、整合素 表达与抗凋亡因子 bcl-2呈明显正相关 (P 0.05)。见图10。结果表明，经骨髓间充质干细胞干预后，肿瘤转移与凋亡存在一定的相关性。2.5 骨髓间充质干细胞干预后MHCC97-H动物模型凋亡基因与肿瘤抑制率表达的
31、相关性分析 肿瘤质量抑制率与抗凋亡因子bcl-2 、促凋亡因子bax、caspase3因子无明显相关性(P 0.05)，与转移相关因子骨桥蛋白基因表达呈明显正相关(P 0.05)，见图11， 12。结果表明，骨髓间充质干细胞对肿瘤抑制作用与肿瘤转移潜能的变化存在一定的相关性。图 3 骨髓间充质干细胞干预前后 MHCC97-H 动物模型肿瘤标本骨唾液蛋白基因表达情况Figure 3 Sialoprotein gene expression in MHCC97-H animal models undergoing continuous injection of bone marrow mesenc
32、hymal stem cells141210864202-CT2 3 4 5 t/周干预前注：骨髓间充质干细胞干预后骨唾液蛋白基因表达明显下降，且随着时间延长进一步降低。图 4 骨髓间充质干细胞干预前后 MHCC97-H 动物模型肿瘤标本整合素 基因表达情况Figure 4 Integrin gene expression in MHCC97-H animal models undergoing continuous injection of bone marrow mesenchymal stem cells141210864202-CT2 3 4 5 t/周注：骨髓间充质干细胞干预后整合素
33、 基因表达明显下降，且随着时间延长进一步降低。图 5 骨髓间充质干细胞干预前后 MHCC97-H 动物模型肿瘤标本 bcl-2 基因表达情况Figure 5 bcl-2 expression in MHCC97-H animal models undergoing continuous injection of bone marrow mesenchymal stem cells1.21.00.80.60.40.202-CT干预前 2 3 4 5 t(干预后 )/周注：骨髓间充质干细胞干预后，bcl-2 抗凋亡基因表达明显呈下降趋势。图 6 骨髓间充质干细胞干预前后 MHCC97-H 动物模型
34、肿瘤标本 bax 基 因 表达情况Figure 6 bax expression in MHCC97-H animal models undergoing continuous injection of bone marrow mesenchymal stem cells4.03.53.02.52.01.51.00.502-CT干预前 2 3 4 5 注 ： 骨 髓 间 充 质 干 细 胞 干 预 后 ， bax 凋 亡 基 因 表 达 明 显 呈 上 升 趋势 。图 7 骨髓间充质干细胞干预前后 MHCC97-H 动物模型肿瘤标本 caspase3 基 因 表达情况Figure 7 casp
35、ase3 expression in MHCC97-H animal models undergoing continuous injection of bone marrow mesenchymal stem cells5432102-CT干预前 2 3 4 5 注：骨髓间充质干细胞干预后，caspase3 凋亡基因表达明显呈上升趋势。干预后干预前干预后t(干预后 )周t(干预后 )/周李天然，等 . 骨髓间充质干细胞对高转移肝癌模型的干预P.O. Box 1200, Shenyang 110004 www.CRTER.org8502www.CRTER.org3 讨论 Discussion人
36、骨髓干细胞主要包括造血干细胞和骨髓间充质干细胞两大类型。骨髓间充质干细胞在肿瘤生长中的作用可以分为3 种：抑制肿瘤生长，如肺癌、肝癌等。促进肿瘤生长，如多发性骨髓瘤、乳腺癌等。对肿瘤生长没有效果，如结肠癌等。1999年Petersen等图 9 骨髓间充质干细胞干预后 MHCC97-H 动物模型转移相关因子骨唾液与凋亡因子相关性分析Figure 9 Correlation analysis between sialoprotein and apoptotic factors in MHCC97-H animal models undergoing continuous injection of
37、bone marrow mesenchymal stem cells5432101 2 3 4 注：与抗凋亡因子 bcl-2 呈明显正相关(P 0.05)。图 11 骨髓间充质干细胞干预后 MHCC97-H 动物模型肿瘤抑制率与抗凋亡因子 bcl-2、促凋亡因子bax、 caspase3 因子相关性分析Figure 11 Correlation analysis of tumor inhibition rate and apoptosis factors and anti-apoptotic factors in MHCC97-H animal models undergoing contin
38、uous injection of bone marrow mesenchymal stem cells25 30 35 40 45 50 55注：无明显相关性(P 0.05)。图 12 骨髓间充质干细胞干预后 MHCC97-H 动物模型肿瘤抑制率与骨唾液蛋白、整合素 、骨桥蛋白相关性分析Figure 12 Correlation analysis of tumor inhibition rate and osteopontin, bone sialoprotein, and integrin in MHCC97-H animal models undergoing continuous in
39、jection of bone marrow mesenchymal stem cells654321025 30 35 40 45 50 55 注：与骨桥蛋白基因表达呈明显正相关，与骨唾液蛋白、整合素 因表达无明显相关性。Caspase3 r=-0.902，P=0.001bax r=-0.803，P =0.016bcl-2 r=0.908，P =0.002Caspase3 r=-0.910，P=0.002bax r=-0.779，P =0.023bcl-2 r=0.890，P =0.003Caspase3 r=-0.586，P=0.127bax r=-0.368，P =0.370bcl-2
40、r=0.553，P =0.155caspase3 r=-0.144，P=0.733bax r=-0.087，P =0.838bcl-2 r=-0.095，P=0.824543210骨唾液酸蛋白 r=-0.766，P =0.027整合素 r=-0.411，P =0.312骨桥蛋白 r=-0.521，P =0.185凋亡因子整合素 凋亡因子骨唾液蛋白凋亡因子骨桥蛋白凋亡因子肿瘤抑制率凋亡因子肿瘤抑制率李天然，等 . 骨髓间充质干细胞对高转移肝癌模型的干预ISSN 2095-4344 CN 21-1581/R CODEN: ZLKHAH 8503www.CRTER.org10首次证实大鼠肝卵圆细胞和
41、肝细胞可由骨髓细胞分化而来，Sato等 11将人骨髓细胞分为骨髓间充质干细胞、CD34 细胞和非骨髓间充质干细胞/CD34 -细胞，分别移植到烯丙基乙醇致肝损伤的大鼠肝脏后发现，骨髓间充质干细胞是肝癌坏死区肝细胞的主要细胞来源，这些细胞能够表达肝特异性标志，未发现细胞融合证据。此后，骨髓间充质干细胞体内外研究实验都证实可以分化成肝细胞或肝样细胞 12-13。骨髓间充质干细胞(骨髓间充质干细胞)对肿瘤的治疗一直存在着争议，骨髓间充质干细胞对肿瘤具有抑制或促进肿瘤生长、转移双重作用 14-15。研究发现，骨髓干细胞是肝干细胞主要的肝外来源，提取患者的骨髓干细胞移植到患者的肝脏组织中，骨髓干细胞在特
42、定环境下可分化为肝组织和干细胞从而参加肝脏的修复与重建 16。通过对接受自体骨髓干细胞移植于病肝治疗失代偿期肝硬化，证实该干细胞移植是一种安全有效的新方法 17-18。干细胞具备化学趋向性和归巢作用，对于促进患者免疫系统的重建、消除残留病灶及防止复发转移具有良好的效果 19。在小鼠实验中，干细胞移植对肝癌根治性切除术后的复发和转移显示出一定的抑制作用，并且随着人源细胞嵌合率的增加，抗肿瘤效应也相应得到提高 20。本实验选取5 -8代骨髓间充质干细胞进行实验，通过对骨髓间充质干细胞的表型鉴定结果表明，实验中应用的5-8代骨髓间充质干细胞具有骨髓间充质干细胞的各项特征能够符合实验要求。本实验采用裸
43、鼠进行肿瘤接种，制作高转移潜能肝癌动物模型，骨髓间充质干细胞经尾静脉注射，观察骨髓间充质干细胞对肝癌的治疗效果及对其转移潜能的干预情况。实验最重要的发现是骨髓间充质干细胞对高转移潜能肝癌动物模型干预效能随时间而变化，骨髓间充质干细胞移植后第3周对肝癌抑制效果最佳，随着时间的延长，骨髓间充质干细胞抑制效能减弱，表明骨髓间充质干细胞具有抗肿瘤的特性，但具有时间性，随着时间的延长抗肝癌的特性逐渐减弱。有研究表明，骨髓间充质干细胞对肿瘤具有双重作用，对肿瘤生长的保护机制和对肿瘤生长的破坏机制，主要受微环境及内分泌活 动 的 影 响 21-22， 实 验 结 果 可 能 是 骨 髓 间 充 质干 细 胞
44、 这 种 机 制 功 能 作 用 的 结 果 ， 具 体 机 制 尚 需 进 一 步研 究 ， 而 关 于 骨 髓 间 充 质 干 细 胞 对 肿 瘤 长 期 疗 效 的 观 察罕 有 报 道 。 在 生 物 学 指 标 监 测 过 程 中 发 现 转 移 相 关 因 子骨 桥 蛋 白 与 肿 瘤 的 质 量 抑 制 率 具 有 明 显 的 正 相 关 性 ， 骨髓 间 充 质 干 细 胞 抑 制 肝 癌 的 转 移 潜 能 可 能 是 通 过 抑 制 骨桥 蛋 白 的 分 泌 而 产 生 效 果 。 凋 亡 因 子 与 肿 瘤 抑 制 率 无 明显 相 关 性 ， 表 明 骨 髓 间 充 质
45、 干 细 胞 对 肿 瘤 的 抑 制 作 用 机制 复 杂 。骨桥蛋白是一种分泌型磷酸化糖蛋白，其分子结构中含有RGD多肽序列，骨桥蛋白主要通过与其受体整合素相互作用，参与肿瘤转移的多个过程。整合素在肿瘤转移过程中有着重要的作用，肿瘤转移是一个多步骤、连续的主动过程，在肿瘤转移过程中发生许多肿瘤细胞和细胞外基质相互作用，黏附分子在此过程中发挥主要作用，而整合素正是主要的黏附分子家族之一，肿瘤发生早期，整合素表达降低可致瘤细胞与基底膜或细胞外基质成分的黏附作用减弱，从而有利于肿瘤在局部生长与扩散；瘤细胞进入血循环后，整合素表达增高有利于瘤细胞黏附于血管内皮，继而定位增殖。整合素可以调节降解基膜的蛋白分解酶的活性，从而影响肿瘤细胞与细胞外基质之间的黏附。另外，肿瘤血管为肿瘤生长提供营养和为肿瘤细胞转移提供了通道，在此过程中血管内皮细胞必须互相黏附并与细胞外基质黏附以构成并扩充新生微血管 23-24。相关的研究发现，在肝癌细胞侵袭与转移过程中，整合素11、21、31 、v3、51 、61等发挥了不同的作用，除介导肝癌细胞与细胞、肝癌细胞与细胞外基质的黏附外，整合素还参与了细胞外基质的降解以及肝癌细胞的运动，趋触与趋化、细胞的增殖和凋亡等活动，即整合素参与了整个肝癌细胞的侵袭转移过程 25-26。有 研 究 发 现 ， 将 骨 髓 间
