在金霉素链霉菌中对四环素生物合成过程中oxyE的进行阻断,四环素生物合成基因簇,基因簇大小约为30kb,由23个基因组成,包括结构基因3个,调控基因17个,抗性基因3个 存在4个加氧酶oxyE, oxyL, oxyR, oxyS,oxyL作用 在12a和5位上氧化加羟基 oxyE作用 辅助oxyL发挥作用 oxyR作用 推断为具有非催化的协同作用,osyS阻断实验结果:产生一个17C的化合物,提总DNA,做PCR,结果:有非特异性条带 然后在1kb 左右回收连在T载体上 酶切验证 发现 多了一个BamH1酶切位点,PCR下一段,培养的金霉素链霉菌 一直没有孢子 最近第2代因为换了麸皮长出孢子,量很少 用没有长出孢子的斜面做菌丝培养 提总DNA,上面是龟裂链霉菌基因簇 下面是金霉素链霉菌基因簇 由图可见基因相似 但是顺序不一样 所以要把P出的片段测序 再查一下金霉素链霉菌基因簇,