1、这章是准备对目前能养活的好氧微生物的数量的估计和在所有种类的药物用品中不受指定的微生物种类限制，从原料到成品形状。一个自动化的方法可能代替现在的测试，如果完全有效收到相同的或更好的结果。在应用和测试准备，在处理样品时观察无菌防御。除非另外有指定，这程序指定只要“控温” ，把容器放在空气中也就是温度调节装置控制在温度30 到 35 度之间，一周期 24 到 48 个小时。在这期间“生长”在这被用作一个特殊意义，也就是，对指定存在和假定繁殖的微生物。预备测试测试的有效结果表明在这章保持在足够的实证上主要的那个他们没用的试样，在他们中，抑制繁殖，在测试条件下，微生物会出现。因此，预备操作测试要有正规
2、依据和随附详细的要求，接种冲淡的样品用被测试过的原料通过分离能养活繁殖的金黄色葡萄状球菌，大肠埃希菌，铜绿假单胞菌，和沙门氏菌。个可以用通过加 1 毫升的不少于 10，稀释 24 小时微生物液体培养基培养（在 PH 为 7.2 的磷酸盐缓冲器中，液体大豆酪蛋白消化液培养基，乳糖液状培养基）在测试原料第一次稀释和接下来的试验过程前。在相应的方法中缺少有机物栽培使一部分的检查和必要的修改程序通过（1）增加体积的稀释液，测试原料的数量要保持一致，或通过（2）在稀释液中合并足够数量的适当的钝化的药剂，或通过（3）适当的修改联合（1）和(2)以便允许接种体生长。其次是因素和他们的浓度可能增加繁殖媒介中和
3、禁止的物质呈现在样品中的例子：大豆卵磷脂，0.5；聚山梨醇脂 20，4.0。作为选择，反复试验记述在前面的段落中的，使用流动性的酪蛋白消化大豆卵磷脂聚山梨醇脂 20 培养基中和防腐剂或另外的抗菌剂在测试原料中。禁止的物质包含在产品中和后面的是可溶解的，一个适当的，使有效地适应程序阐明在对产品的无菌状态下的过滤膜中被检查通过无菌测验（71） ，可能是常用的。如果不管适当钝化的药剂和稀释液体积的大幅增长，它还是不可能恢复以上描述的可育繁殖和文章中不适合使用过滤膜，它可以假定使接种有机体隔离失败是由于产品的杀菌性。这个信息提供指出文章是在被给的微生物的种类不可能污染的。监测应该继续为了在文章中建立光
4、谱的禁制和杀菌活跃性。缓冲溶液和培养基繁殖培养基可以像下面准备，或者脱水的培养基假设可以被使用，当再造的被指定通过厂商或发行人，他们有相同的成分和/或生产媒体比得上那些在这给的公式获得的。在准备媒体通过这里提出的公式，在水中溶解可溶解的固体，利用加热，如果可以，会出现全部溶解，然后加足够分量的盐酸溶液或氢氧化钠来产生在媒介中想得到的 PH 在它完全使用时。测定 PH 在 252 度。在琼脂要求在公式中，使用琼脂有一个不超过 15的水分含量。其中的水称为一个公式，用纯净水。PH 7.2 磷酸盐缓冲备用溶液在能包含 1000 毫升体积的长颈瓶大概 500 毫升的水中溶解 34 克的磷酸二氢钾。调整
5、 PH7.20.1 通过加氢氧化钠试剂（大概 175 毫升） ，加水到一定体积，混合。分配并消毒。冷藏保存。为了使用，用水以 1 比 800 的比率冲淡储备液，然后消毒。培养基除非另外指出，这个培养基应该在高压锅中加热灭菌（在灭菌下看蒸汽灭菌。 ） ，曝光时间依靠体积是被灭菌的。1. 流动的酪蛋白消化大豆卵磷脂聚山梨醇酯 20 培养基胰腺消化酪蛋白 20 克大豆卵磷脂 5 克聚山梨醇酯 20 40 毫升水 960 毫升在 960 毫升的水中溶解酪蛋白胰腺消化和大豆卵磷脂，加热用水沐浴在 48 度到 50 度大概30 分钟得到溶液。加 40 毫升的聚山梨醇酯 20.混合，分配用作要求。II大豆酪
6、蛋白消化琼脂培养基胰腺消化酪蛋白 15.0 克大豆粗粉的 5.0 克氯化钠 5.0 克琼脂 15.0 克水 1000 毫升灭菌后的 PH：7.30.2III大豆 酪蛋白消化琼脂培养基准备指定的大豆在无菌测试下的酪蛋白消化液培养基。IV甘露醇 含盐醇酯培养基胰腺消化酪蛋白 5.0 克动物组织 5.0 克浓缩牛肉汁 1.0 克D-甘露醇 10.0 克氯化钠 75.0 克琼脂 15.0 克酚红 0.025 克水 1000 毫升 混合，然后加热频繁的加热搅动，煮沸 1 分钟来影响溶液。杀菌后的 PH 为：7.40.2V胰腺消化酪蛋白 10.0 克浓缩牛肉汁 5.0 克酵母膏 1.0 克氯化锂 5.0
7、克琼脂 20.0 克氨基乙酸 12.0 克丙铜酸钠 10.0 克水 950 毫升加热并频繁搅动，煮沸 1 分钟。杀菌，冷却至 45 到 50 度之间，加 10 毫升的亚碲酸钾溶液（1 到 100）和 50 毫升的蛋黄乳剂。充分混合但是要轻轻的，不断地加入盘子。 （准备蛋黄乳剂通过整个蛋壳的表面消毒，在无菌条件下打破蛋，然后分离出完整的蛋黄到一个消过毒的量筒内。加消过毒的碱金属试剂得到一个 3 比 7 比率的蛋黄比碱金属。加到一个消过毒的搅拌机杯子，飞快的混合 5 秒。 ）灭菌后的 PH 为：6.80.2VI胰腺消化酪蛋白 10.0 克酵母膏 5.0 克甘露醇 10.0 克5.0 克氯化锂 5.
8、0 克氨基乙酸 10.0 克琼脂 16.0 克酚红 25.0 毫克水 1000 毫升煮 1 分钟固体溶液。杀菌，冷却到 45 到 50 度之间，加 20 毫升亚碲酸钾溶液（1 到 100）杀菌后的 PH：7.20.2VII.溴棕三甲铵琼脂培养基胰腺消化凝胶 20.0 克氯化镁 1.4 克硫酸钾 10.0 克琼脂 13.6 克0.3 克丙三醇 10.0 毫升水 1000 毫升在水中溶解所有的固体成分，然后加入丙三醇。加热，频繁的搅拌，煮沸 1 分钟得到结果溶液。杀菌后的 PH：7.20.2VIII.发现假单胞琼脂培养基的二氢荧光素胰腺消化酪蛋白 10.0 克动物组织胃蛋白酶消化 10.0 克无水
9、磷酸二基钾 1.5 克硫酸镁 1.5 克丙三醇 10.0 毫克琼脂 15.0 克水 1000 毫升在加入丙三醇前在水中溶解所有的固体成分。加热，频繁搅拌，沸腾一分钟得到结果溶液。杀菌后的 PH：7.20.2IX.探测假单胞菌胰腺消化凝胶 20.0 克无水氯化镁 1.4 克无水硫酸钾 10.0 克琼脂 15.0 克丙三醇 10.0 毫升水 1000 毫升在加入丙三醇前在水中溶解固体成分。加热，频繁搅拌，沸腾一分钟得到结果溶液。杀菌后的 PH：7.20.2X.流动乳糖培养基浓缩牛肉汁 3.0 克胰腺消化凝胶 5.0 克乳糖 5.0 克水 1000 毫升在杀菌后尽快的冷却。杀菌后的 PH：6.90.
10、2XI流体硒 胱氨酸培养基胰腺消化酪蛋白 5.0 克乳糖 4.0 克磷酸钠 10.0 克亚硒酸 4.0 克胱氨酸 10.0 毫克水 1000 毫升最终 PH：7.00.2混合，加热得到结果溶液。在流动的蒸汽中加热 15 分钟。不要杀菌XII.流体介质连四硫酸盐胰腺消化酪蛋白 2.5 克消化性动物组织 2.5 克胆盐 1.0 克碳酸钙 10.0 克硫代硫酸钠 30.0 克水 1000 毫升加热固体溶液到沸腾。当天使用，事先准备溶液通过在 20 毫升的水中溶解 5 克的碘化钾和6 克的碘。然后加 10 毫升的亮绿色溶液（1 到 100） ，混合。在加亮绿色溶液后不要加热。XIII亮绿色琼脂培养基酵
11、母提取物 3.0 克消化性动物组织 5.0 克胰腺消化酪蛋白 5.0 克乳糖 10.0 克氯化钠 5.0 克蔗糖 10.0 克酚红 80 毫克琼脂 20.0 克亮绿 12.5 毫克水 1000 毫升煮 1 分钟固体溶液。只要在加热前杀菌，溶解媒介，倒入培养皿，让它冷却。杀菌后的 PH：6.90.2XIV.赖氨酸 去氧胆酸琼脂培养基木糖 3.5 克L-赖氨酸 5.0 克乳糖 7.5 克蔗糖 7.5 克氯化钠 5.0 克酵母菌提取物 3.0 克酚红 80 毫克琼脂 13.5 克去氧胆酸钠 2.5 克硫代硫酸钠 6.8 克柠檬酸酸铁铵 800 毫克水 1000 毫升最终 PH：7.40.2加热固体和
12、水的混合物，搅拌，只要到沸腾点。不要加热过头或消毒。立刻转到水浴保持大概 50 度，媒介一冷却就倒入板中。XV亚硫酸铋琼脂培养基牛肉提取物 5.0 克胰腺消化酪蛋白 5.0 克消化性动物组织 5.0 克葡萄糖 5.0 克磷酸钠 4.0 克硫酸铁 300 毫克亚硫酸铋指标 8.0 克琼脂 20.0 克亮绿 25 毫克水 1000 毫升最终 PH：7.60.2加热固体和水的混合物，搅拌，只要到沸点。不要加热过头或消毒。立刻转移到水浴保持在大概 50 度，媒介一冷却就倒入板中。XVI三倍糖 铁琼脂培养基胰腺消化酪蛋白 10.0 克消化性动物组织 10.0 克乳糖 10.0 克蔗糖 10.0 克葡萄糖
13、 1.0 克硫酸亚铁铵 200 毫克氯化钠 5.0 克硫代硫酸钠 200 毫克琼脂 13.0 克酚红 25 毫克水 1000 毫升杀菌后的 PH：7.30.2XVII麦康基琼脂培养基胰腺消化凝胶 17.0 克胰腺消化酪蛋白 1.5 克消化性动物组织 1.5 克乳糖 10.0 克混合胆盐 1.5 克氯化钠 5.0 克琼脂 13.5 克中性红 30 毫克结晶紫 1.0 毫克水 1000 毫升煮固体和水的混合物 1 分钟得到结果溶液。杀菌后的 PH：7.10.2XVIII莱文曙红亚甲基蓝琼脂培养基胰腺消化凝胶 10.0 克磷酸二基钾 2.0 克琼脂 15.0 克乳糖 10.0 克曙红 Y 400 毫
14、克亚基钾蓝 65 毫克水 1000 毫升在水中溶解胰腺消化凝胶，磷酸二基钾，和琼脂，加温，然后让它冷却。正好在使用凝胶琼脂溶液，加剩下的原料，像溶液，下列数额，混合；溶解琼脂溶液每个 100 毫升5 毫升的乳糖溶液（1 到 5） ，2 毫升的曙红 Y 溶液（1 到 50） ，2 毫升的亚甲基蓝溶液（1 到300）.成品可能不是很清楚。杀菌后的 PH：7.10.2XIX沙氏琼脂培养基葡萄糖 40 克等份消化性动物组织和胰腺消化酪蛋白的混合物 10 克琼脂 15 克水 1000 毫升混合，加热得到最后溶液。杀菌后的 PH：5.60.2XX. 马铃薯葡萄糖琼脂培养基在 500 毫升通过蒸馏准备好的水
15、中煮 300 克剥皮切成丁的土豆，通过粗棉布过滤，加通过蒸馏准备好的水到 1000 毫升，然后加一下的：琼脂 15 克葡萄糖 20 克通过加热溶解，消毒杀菌后的 PH：5.60.2为了使用，之前浇注板，调整融化和冷却到 45 度媒介用无菌酒石酸溶液（1 到 10）达到PH3.50.1.不要加热 PH 为 3.5 的培养基。取样提供分离 10 毫升或 10 克的样品每个测试要求在个人的记录中。程序准备样品并对它的物理特性进行测试处理，不会改变微生物原来出现的数量和种类，为了获得到一个溶液或样品在种类中有全部或部分的适合测试程序的执行。为使固体溶解到一个可预见的程度但不完全，减少物质到一个适当的好
16、的粉末，暂停其指定的手段，然后根据总好氧微生物数量的规定，通过金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌和对沙门氏菌和大肠杆菌的测试。对于一个由纯溶液组成的流体样品，或悬浮在水中或水醇车包含少于百分之 30 的酒精，然后对于溶解充分溶解和几乎完全的 90 毫升的 PH 为 7.2 的磷酸盐缓冲液或规定媒介，在总好氧微生物数量下按规定进行，通过金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌和对沙门氏菌和大肠杆菌的测试。对于流动水混溶，软膏，乳脂，和蜡，准备一次暂时的通过帮助一个合适的最小的数量的，无菌乳化剂（比如聚山梨醇酯的一种） ，使用一个机械搅拌机加热到一个温度不过 45 度，如果可以，用悬架进行像总好氧微生物数量的规定，通过金黄
17、色葡萄球菌和绿脓杆菌和对沙门氏菌和大肠杆菌的测试。对于气溶胶形成液标本，冷却容器在一个酒精干冰混合物中大概 1 个小时，剖开容器，让它达到室温，允许推进物泄漏，或者加热击退推进剂如果可行，转移测试材料的数量在前面的段落规定的程序要求，要酌情。在 10.0 克或 10.0 毫升样品的情况下，无论哪个都是合适的，不能从 10 悬浮微粒状容器中获得，转移全部内容从 10 已冷的的器皿到培养媒介，允许推进物逃离，继续用剩余的做测验。假如结果是非决定性的或是难以预测的，用样品重复测试从 20 多个容器。计算有氧微生物数量样品是充分溶解或半透明的允许用平板法，使用哪个方法；另外，使用多管方法。用任何一个方
18、法，首先溶解或悬挂 10.0 克的样品如果是固体，或 10 毫升，准确的仔细斟酌，如果样品是液体，在 PH 为 7.2 的磷酸盐缓冲液，液体大豆酪蛋白消化，或流体酪蛋白消化大豆卵磷脂聚山梨醇酯 20 媒介到 100 毫升。对于黏性样品不能吸取在这个最初的1：10 稀释，稀释样品直到获得悬浮液，i.e.,1：50 或 1：100，etc.,可以吸取。为执行根据前面所描述的筹备测试的总好氧微生物数量的决心没有抑制性能测试。在准备合适的稀释接芽后加样品到媒介不超过一个小时。平板法更多稀释，如果可以，这样的液体 1 毫升的预期收益率为 30 至 300 菌落。吸取 1 毫升的最终稀释到两个无菌培养皿中
19、。马上在盘中加 15 到 20 毫升的大豆酪蛋白消化琼脂培养基事先已经融化，冷却约 45 度。覆盖培养皿，混合样品和琼脂通过倾斜或旋转器皿，然后让允许的内容，在室温下固化。倒置培养皿，孵化 48 至 72 小时。接下来的孵化，对培养皿的生长检测，数群体数量，表示这两个板块的平均就每克或每毫升的微生物的数量方面来说。如果没有微生物群体从器皿上获得等于最初的 1：10 稀释的样品，表示结果是“每克或没毫升的样品中少于 10 个微生物” 。多管方法在每个有相似尺寸的十四测试管放置 9.0 毫升的液体大豆酪蛋白消化媒介。安排在四个三管各设置管 12。储藏起其中一个三管来充当控制。在每个三管一组（“10
20、0” ）和在一个四管（A）吸取 1 毫升溶液或样品的悬浮液，混合。从管 A，吸取 1 毫升它的内容到一个剩余管中（B）不包括在放置中，混合。这两个管包含了 100 毫克（或 1 微升）和 10 毫克（或 1 微升）的样品，分别。在每个第二组（“10” ）三管从管 A 中吸取 1 毫升，然后在每个第三组的管（“1” ）从管 B 中吸取 1 毫升。接下来的繁殖期，仔细检查管内的生长：三个控制管清晰并且在管中的观测包含样品，解释时参考表 1，表明每克或每毫升样本的微生物最有可能的表 1. 最可能的总数由多管法在每组观测到的制品在数量管中生长情况 大多可能的微每个管内样品每个（或每毫升） 的数量生物每
21、100 10 1 克或每毫升（100uL） (10uL) (1uL) 在药品中加液体大豆酪蛋白消化培养基到 100 毫升，混合，孵化。仔细观察媒介的生长，如果是目前生长的，使用一个接种环使在福格尔约翰逊琼脂培养基表面的一部分媒介（或贝尔德帕克琼脂培养基，或甘露醇盐琼脂培养基）和铵琼脂培养基，每个培养皿镀。覆盖并颠倒器皿，孵化。假如，当检查时，板块都不包含群体有规格参数表列在表 2 和 3 中媒介使用，测试样品满足所需条件不受金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌的影响。表 2.金黄色葡萄球菌的形态特征选择性琼脂培养基选择媒介 菌落形态特征 革兰氏染色福格尔约翰逊琼脂培养基 黑黄区所包围 阳性球菌甘露醇盐琼脂
22、培养基 黄色群体黄色区域 阳性球菌贝尔德帕克琼脂培养基 黑色，有光泽，周围明确区 2 至 5 毫米 阳性球菌表 3. 对选择性和诊断防老剂媒介铜绿假单胞菌形态学特征选择媒介 菌落形态特征 荧光紫外灯 氧化酶试验 革兰氏染色溴棕三甲铵琼脂 一般绿 绿 阳性 阴性杆菌培养基检测的荧光素假 一般无色至微黄色 微黄色 阳性 阴性杆菌单胞菌琼脂培养基绿脓菌素检测假 一般绿 蓝 阳性 阴性杆菌单胞菌琼脂培养基凝固酵素测试（金黄色葡萄球菌）和一个循环注射的辅助，从福格尔约翰逊琼脂培养基（或贝尔德帕克琼脂培养基，或甘露醇盐琼脂培养基）的琼脂表面转移可能有危险的群体，每个包含了 0.5 毫升的哺乳动物，最好是兔
23、子或马，血浆有或没有合适的附加剂。孵化到水温为 37 度，审查管子在 3 个小时和随后适当的间隔 24 小时。测试同时积极和消极控制未知的样品。如果观测在任何度数没有凝结，样品符合条件的情况下对金黄色葡萄球菌。氧化酶和颜料测试（铜绿假单细胞菌）辅助用一个注射环，条纹代表怀疑从防老剂铵表面上防老剂琼脂培养基殖民地的荧光素和在培养皿中绿脓菌素检测假单胞菌琼脂培养基检测假单胞菌琼脂培养基表面。如果很多群体是被转移的，划分划分每个板面为四块，每一个都可以从一个单独的群体接种。盖住并倒置接种媒介，在 352 度内孵化不少于三天。在紫外光下研究条纹表面。检查板，以确定是否有群体，在表 3 中列出的特点都存
24、在。确认任何有怀疑的群体在发展中的一个或多个作为铜绿假单胞菌的媒介氧化酶的测试手段。在群体的生长的地方或转移群体到纸条或有过滤纸的圆盘事先用 N 饱和的，N -二甲基对苯二胺盐酸盐：如果这不能变成粉红色，变成紫色，样品符合为铜绿假单胞菌的情况下试验的要求。对绿脓杆菌的存在可能会确认其他适当的文化和生化检查，如有必要。测试沙门氏菌及大肠杆菌样品，包含在一个合适的容器中，加一定体积的流体乳糖媒介到 100 毫升，并孵化。仔细检查媒介生长，是否正在生长，通过轻轻摇动混合。吸取 1 毫升的一部分到密封的容器中，分别，10 毫升的流体亚硒酸眼胱氨酸媒介和流体连四硫酸盐媒介，混合，孵化 12 到 24个小
25、时。 （保留的剩余液体乳糖培养基） 。表 4. 沙门氏菌的种类形态特征媒体选择性阿赫尔选择媒介 菌落形态特征亮绿琼脂培养基 小的，透明的，无色的或粉红色到白色不透明（频繁的被粉色到红色区域环绕）木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基 红色，有或没有黑色中心亚硫酸铋琼脂培养基 黑色或绿色如果革兰氏阴性的群体与表 4 的描述相匹配成立，继续进行进一步的鉴定通过转移代表可能的群体。通过通过一个接种线的手段，在对接倾斜的糖铁防老剂培养基通过首先快速移动倾斜的表面，然后用金属线刺在表面下。孵化。如果检查下表明没有管中有碱性（红）斜向和酸性（黄）烟蒂（有或没有伴随着的从硫化氢产品中使烟蒂变黑） ，样品满足沙门氏菌
26、属的要求的情况下：埃希氏菌属的测试依靠一个注射用的环，快速移动一部分的麦康基琼脂培养基表面余下的液体乳糖培养基。覆盖并导致器皿，孵化。在检查时，如果没有一个群体符合表 5 中关于这个培养基的描述，该样品为符合大肠杆菌的情况下试验的要求。表 5.大肠杆菌在麦康凯琼脂培养基的形态特征革兰氏染色 菌落形态特征阴性杆菌（cocco-杆菌） 红砖色; 周围可能有胆汁沉淀区如果与群体相同的描述在表 5 中被找到，继续做更多的鉴定通过分别转移有疑问的群体，用一个注射用环，到莱文曙红亚甲基蓝琼脂培养基表面，镀在培养皿。如果很多的群体被转移，划分各板面为四块，每一个都可以从一个单独的群体繁殖。覆盖并倒置盘子，孵化。当检查时，如果没有一个群体呈现既有在反射光下有金属光泽的特性也有在在透射光下有蓝黑色光泽，该样品为符合大肠杆菌的情况下试验的要求。存在的大肠杆菌可能会确认通过更远的合适的文化和生化的试验。合并后的整个模具和酵母菌数接着做关于在总好氧问生物数量下的平板法，除了使用相同数量的沙氏琼脂培养基或马铃薯葡萄糖琼脂培养基，代替大豆酪蛋白消化培养基，除了孵化倒培养皿在 20 到 25 度 5 到 7天。重新测试为了证实一个未定的结果通过任何一个程序提纲在先前的测试后他们申请 10.0 克的样品，重新测试
