1、5.1 DNA的粗提取与鉴定,一、基础知识,（一）提取DNA的方法,1.提取生物大分子的基本思路,选用一定的物理或化学方法，分离具有不同物理或化学性质的生物大分子,2.提取DNA的基本思路,提取DNA，去除其他成分 利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等 在物理和化学性质方面的差异, DNA的溶解性（NaCl溶液中）,DNA和蛋白质等成分 在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同,利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀；或者让其他成分溶解，DNA析出,3.DNA等大分子的理化性质,DNA不溶于酒精溶液， 但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。 将DNA与蛋白质进一步分离。, DNA不
2、溶于酒精溶液, DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性, 蛋白酶水解蛋白质，对DNA没有影响, 高 温大多数蛋白质不能忍受6080而DNA在80以上才会变性, 洗涤剂溶解细胞膜，去除脂质和蛋白质但对DNA没有影响,试剂：,（二）DNA的鉴定,条件：,二苯胺,沸水浴条件下，DNA遇二苯胺被染成蓝色,沸水浴,现象：,（一）实验材料的选取,（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液,（三）除去滤液中的杂质(纯化),（四） DNA的析出与鉴定,二、实验设计,（一）实验材料的选取,从下列材料中选取23种,原则：,菜花、香蕉、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜； 鱼卵、猪肝、鸡血、哺乳动物的红细胞； 在液体培养基中培养的大肠杆菌
3、,凡是含有DNA的生物材料都可以考虑 选用DNA含量相对较高的组织,从核DNA数目来看，猪38条，鸡78条，哺乳动物血0条，猕猴桃58条，洋葱16条，豌豆14条，菠菜12条，大肠杆菌1条。请选择动植物材料各一种。,哺乳动物的血细胞无细胞核及细胞器。 液体培养基中的大肠杆菌的DNA量减少。 鱼卵是减数分裂的产物。,（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液,1、动物细胞,2、植物细胞,容易破碎,需要溶解细胞膜,鸡血细胞溶液： 加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌， 过滤后收集滤液,想一想：为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？,蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体， 水分大量进入血细胞，使血细胞胀裂；, 加
4、入一定的洗涤剂和食盐, 充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液,想一想：洗涤剂和食盐的作用分别是什么？,洗涤剂离子去污剂，能溶解细胞膜，利于DNA释放 食 盐NaCl，利于DNA的溶解于研磨液中,1. DNA的溶解性,2. DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性,（三）除去滤液中的杂质,利用蛋白酶分解杂质蛋白，使提取的DNA与蛋白质分开；,利用DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，使蛋白质变性与DNA分离。,为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？,（四） DNA的析出与鉴定,与滤液体积相等的冷却的酒精溶液(体积分数95)， 静置23min，溶液中会出现白色丝状物。粗提取DNA,1、DNA的析出,用玻璃
5、棒沿一个方向搅拌，（以利于DNA分子的附着和缠绕）卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水。,2. DNA的鉴定, 向两支试管中分别加入 2mol/L NaCl 溶液5ml 其中一支试管中加入DNA丝状物，另一支不加 各加入二苯胺试剂4ml 混匀后，置于沸水浴中加热5min 待冷却后，比较两只试管中溶液的颜色变化 观察现象：,溶解丝状物的溶液变为蓝色,观察你提取的DNA颜色，如果不是白色丝状物，说明DNA中的杂质较多； 二苯胺鉴定出现蓝色，说明实验基本成功， 如果不呈现蓝色，可能所提取的DNA含量低，或是实验操作中出现错误，需要重新制备,2.实验中NaCl的物质的量浓度为2 molL和0.14 molL对DNA有何影响?,1.在DNA的粗提取实验过程中，两次向烧杯中加入蒸馏水的作用是( )。 A.稀释血液、冲洗样品 B.使血细胞破裂、降低NaCl浓度使DNA析出 C.使血细胞破裂、增大DNA溶解量 D.使血细胞破裂、提取含杂质较少的DNA,B,答：前者是溶解DNA，后者是使DNA析出,3.DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成( ) A.砖红色 B.橘黄色 C.紫色 D.蓝色,D,
